宿主体内质粒有无微生物竞争模型的种群动力学和抗生素耐药分析

研究宿主体内带质粒微生物和不带质粒微生物的竞争关系．在分析相应数学模型动力学行为的基础上，获得了依赖于具有生物学意义参数的所有8种可能的结果．在对质粒模型分析的基础上，进一步分析抗生素的杀菌效果，这些抗生素是临床上通过注射、口服和输液而进入宿主体内，结果表明抗生素的剂量越大，带质粒微生物幸存的可能性越大，也就是说产生抗生素耐受的几率越大。     

质粒Yp7构建的探讨

以大肠杆菌酵母穿梭质粒YRp7 DNA为材料,经体外重组构建了质粒Yp7。该质粒具有Amp~r、Tet~r两个抗药性标记和一个来自酵母细胞的Trpl基因。分子量约为5.25kb。该质粒可用于筛选水稻等真核生物DNA中的自主复制序列。     

PheAB基因在棒状杆菌染色体上的整合

改造大肠杆菌质粒ｐＬＣＸ３１,切除其中的ｘｙｌＥ基因得到大肠杆菌质粒ｐＪＬ０１．将源于大肠杆菌分枝酸变位酶－预苯酸脱水酶基因２．３ｋｂ ＢａｍＨＩ片段克隆到大肠杆菌质粒ｐＪＬ０１中启动子Ｐ３２的下降,构建成质粒ｐＪＬ０２。再在ｐＪＬ０２的ＨｉｎｄⅢ位点接入棒状杆菌染色体的ＨｉｎｄⅢ消化的随机片段,构建成带不同棒状杆菌染色体片段而不带棒状杆菌自主复制顺序的棒状杆菌整合质粒ｐＪＬ０３。     

蓝细菌新质粒载体pPRS—1的构建

以蓝细胞Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａ ｂｏｒｙａｎｕｍ内源小质粒ｐＰｂｓ（１．５ｋｂ）和Ｅ．ｃａｌｉ质粒载体ｐＢＲ３２２（４．３ｋｂ）为材料，用限制性内切核酸酶ＣｌａＩ分别消化，经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１感受态细胞，在含Ａｍｐ（Ａｐ）和含Ｔｅｔ（Ｔｃ）的ＬＢ琼脂培养基上筛选出Ａｍｐ＾ｒＴｅｔ＾ｓ的转化子，提取转化子的质粒，用ＣｌａＩ消化，得１．５ｋｂ和４．３ｋｂ两片段，表明转化子     

产 PHB 重组大肠杆菌质粒稳定性的研究

从工程应用的角度研究了重组Ｅ．ｃｏｌｉＨＭＳ１７４（ｐＴＺ１８Ｕ－ＰＨＢ）的质粒稳定性，结果表明，质粒ｐＴＺ１８Ｕ－ＰＨＢ具有结构稳定性和分裂不稳定性，ＰＨＢ在胞内的大量积累和重组菌较低的生长速率增加了质粒的分裂不稳定性。为了保证细胞的正常生长及表达，在种子培养基中必须添加氨苄青霉素（Ａｐ）；由于接种时种子带入的１０ｍｇ／ＬＡｐ足以杀死丢失了质粒的细胞，因而在摇瓶发酵阶段不必再添加Ａｐ。在ＬＢ和ＬＢＧ培养基中传代１８次后，带质粒的菌分别为７．４％和３．５％；细胞每分裂一次，质粒的平均丢失率分别为０．９６％和０．９３％。并建立了野生菌的Ａｐ敏感动力学方程和质粒丢失的动力学方程     

三种新的穿梭质粒pCC10、pCCT7和pST16的构建和性质研究

利用大肠杆菌质粒pUC18、pTG206和金黄色葡萄球菌质粒pC194在体外构建3个嵌合质粒pCC10、pCCT7和pST16.3个新质粒均是大肠杆菌和枯草杆菌的穿梭质粒。它们在大肠杆菌中呈Ap~rCm~r型,在枯草杆菌中则为Cm~rAp~5型。其中pCCT7和pST16含有xylE基因,可作为启动子探测质粒。所有的新质粒都具有来自pUC18的多酶克隆位点,适合于在大肠杆菌和枯草杆菌中重组外源DNA以及比较它们的表达情况。     

氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125的构建及其在大肠杆菌之间的转移

对氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)隐蔽性质粒pTt12进行了限制性酶切分析,并绘出了限制性酶切图谱,其大小为13.7Kb.将pTt12质粒与pBR325质粒重组,得到了重组质粒pSDT125(Cm',Ap',Tc~s).氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125本身不具有接合转移能力,但它在广泛寄主范围的转移性质粒RP4的带动下以较高的频率在大肠杆菌(Escherichia coli)之间转移,表明在氧化硫硫杆菌质粒pTt12上存在着与接合转移有关的DNA序列.     

小肠结肠炎耶氏菌体外毒力试验

为了初步研究小肠结肠炎耶氏菌（Ｙ．ｅ．）致病机理，本文报告应用依钙、自凝、刚果红平板毒力试验和质粒ＤＮＡ提取方法，进行Ｙ．ｅ．体外毒力探讨。结果表明：带毒力质粒的Ｙ．ｅ．菌株Ｇ１５１，９２０和ＬＡＢ－Ｂ１８２依钙、自凝和刚果红平板毒力试验阳性；不带毒力质粒的Ｙ．ｅ．菌株８２－１４０和４３９－８０Ｖ￣－依钙、自凝和刚果红平板毒力试验阴性。依钙、自凝、刚果红平板毒力试验阳性与携带毒力质粒的一致性以及依钙、自凝、刚果红平板毒力试验阴性与不携带毒力质粒的一致性表明：Ｙ．ｅ．的依钙、自凝和吸收刚果红特性是毒力质粒编码。     

天冬氨酸酶基因工程菌质粒pXZ70的稳定性

将pSC101质粒上的Par区域（控制质粒分配的基因座）克隆到含有天冬氨酸酶基因的质粒pXZ70上，构建成重组质粒pZZ1，将pZZ1质粒转化入大肠杆菌JM109细胞中，得到一株质粒可稳定遗传的重组子细胞，培养100代后，含质粒菌数仍在90％以上．     

一种快捷可靠的大肠杆菌重组质粒筛选方法

针对如何大规模地筛选大肠杆菌重组子,将质粒快检和菌落PCR两种方法巧妙地融合,建立一种新的高效快捷的重组质粒筛选方法.该方法不需接种抽取质粒,在转化子长出当天即可筛选到重组质粒.大规模基因克隆表明该方法能够快速、准确地筛选出阳性克隆.     

酵母质粒Killer系统的研究

从酿酒酵母中筛选出两个具有线状双链RNA质粒的酵母菌株,提取并纯化了它的质粒RNA.用RNase和DNase处理,发现它们能被RNase消化,证明它们是质粒RNA.用电镜观察到它们呈线状,凝胶电泳图谱表明,这些质粒RNA都含有两条带;其分子量分别为3.0×10~6d和1.5×10~6d。     

大肠杆菌JM105的转化及快速鉴定

用CaCL_2处理JM105空白的大肠杆菌,使之成为感受态细菌,然后将含白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)的cDNA的质粒PGEM-72f~(( ))转化到感受态细菌中去,涂布于含有氨苄青霉素的LB固体培养基中,培养过夜,挑取生长良好的单菌落,再接种到含氨苄青霉素的LB液体培养基中,培养过夜,用溶菌酶法裂解细菌细胞壁,用0.8％。琼脂糖凝胶电泳检测质粒,在紫外反射透射仪上观察结果。此方法简便,快速,不需特殊设备及试剂。     

利用反向PCR鉴定沼泽红假单胞菌中野生质粒

为准确研究沼泽红假单胞菌的野生质粒及其携带的基因信息,在常规碱裂解法基础上,对沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris AS1.2352中野生质粒提取方法进行了优化,优化方法具有易操作、耗时少、纯度高等特点,所得质粒DNA纯度和质量均满足进一步分子操作的需要.同时,利用反向PCR技术鉴定该野生质粒,并结合生物信息学方法对其进行分析,比传统的质粒丢失法验证和考察质粒更为省时、可靠和直观.证明菌株携带4个野生质粒,其中2.3 kb的质粒序列与Escherichia coli pEC157 Rom-like protein gene有97.8%的同源性,推测1885~1887碱基为复制起点.     

Analysis of length distribution of short DNA fragments induced by ^7Li ions using the random-breakage model

Deoxyribonucleic acid (DNA) is an important bio-macromolecule. DNA double strand breaks (DSBs) are considered to be the most important initial damage responsible for all biological effects induced by ionizing radiation. In this paper the length distribution of DNA fragments induced by ^7Li ionizing radiation is fitted with the random breakage model. In this model, the parameter u is the average number of DSBs on every DNA molecule induced by ionizing radiation. The fitting result shows that the random breakage model cannot describe the distribution of DNA fragments in lower doses, while the random breakage model is in better accordance with the experimental data in higher doses. It is shown that the length distribution of DNA fragments has random statistical feature in higher doses. In this situation, the random breakage model looks like a model without any parameter since the u has specific physical meaning and can directly be obtained from experimental data.     

质粒DNA计算模型的计算体系

首先从具体实例入手抽象和归纳出质粒DNA计算模型的概念,并对质粒DNA计算模型计算体系的2个基本要素———计算物质和计算手段进行研究,由此形成了质粒DNA计算模型完备的计算体系;然后针对质粒DNA计算模型计算体系的应用,分析和解决了经常出现的关键问题.讨论了初始质粒DNA重新合成的重要性,并给出了重新合成的方法;接着对计算体系的2个基本实验(酶切和酶连实验)的成功率问题进行了分析,并提出了解决的方案;最后对检测实验进行了分析,提出了检测多种DNA序列的检测方法.对这些问题的分析和解决有利于质粒DNA计算模型理论的完善和应用的拓广.     

反义蜡质基因质粒pWXAB的构建

蜡质蛋白也叫结合颗粒淀粉合成酶 ( GBSS) ,是直链淀粉合成的关键酶 .谷类作物包括小麦其胚乳直链淀粉含量主要由蜡质蛋白水平决定 .研究表明 ,小麦胚乳直链淀粉含量低 ,此小麦面粉生产出的面条韧性大、不粘、适口性好 .因此构建含有反义蜡质基因的质粒 ,通过转基因的方法导入小麦 ,抑制蜡质基因的表达 ,对于提高面条品质和改良淀粉性质 ,获得新品种 ,具有重要价值 .笔者以 Shimad博士惠赠的质粒p WXA2 3和本实验室已有的质粒 p5 1 0为材料 ,构建了一个含反义蜡质基因同时含有 GUS报告基因及抗除草剂基因的新质粒 [1,2 ] .用此质粒转…     

Screening large numbers of recombinant plasmids: modifications and additions to alkaline lysis for greater efficiency

Selecting bacteria transformed with recombinant plasmid is a laborious step in gene cloning experiments. This selection process is even more tedious when large numbers of clones need to be screened. We describe here modifications to the ultra fast plasmid preparation method described previously by Law and Crickmore. The modified method is coupled to an efficient PCR step to rapidly determine orientation of the inserts. Compared to traditional methods of analysis requiring growth of overnight cultures, plasmid isolation and restriction enzyme digestion to determine orientation this procedure allows for the analysis and storage of a large number of recombinants within a few hours.     

棒状杆菌诱发质粒简报

用溴化乙锭诱发质粒，溴化乙锭不同浓度对棒状杆菌基因组起不同作用，低浓度无作用；高浓度消除质粒，适中浓度能诱发质粒，本试验诱发出４种大小不同质粒，转种５代质粒消失。