一品红离体培养及体细胞胚高频率发生的研究

一品红苞片为外植体进行离体培养,以MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1固体培养基愈伤诱导率及相对生长量最高。此培养基中继代的愈伤组织转入MS+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+水解酪蛋白80 mg.L-1固体培养基时体细胞胚分化率最高。加入活性碳1 g.L-1有利于高频率体细胞胚发生。MS培养基优于N6和B5培养基,有利于高频率体细胞胚发生。胚性愈伤组织及时转入液体培养基中悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。     

青钱柳幼胚愈伤组织的诱导

以青钱柳幼胚为外植体,研究了不同幼胚期、基本培养基种类、植物生长调节剂种类及其浓度配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,不同发育期的幼胚诱导出的愈伤组织在形态上差异较大,青钱柳种子发育至子叶胚中期较适合愈伤组织的诱导。青钱柳幼胚愈伤诱导时基本培养基以改良DKW效果最佳,诱导率达到了88.89%,且无褐化现象;含2,4-D与KT组合的培养基较适宜愈伤组织的诱导,其中2,4-D(0.5 mg/L)+KT(2.0 mg/L)和2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的组合对青钱柳幼胚诱导愈伤组织效果最佳,诱导率分别为80.00%和78.33%。     

枸杞体细胞胚高频发生体系的建立

实验以枸杞种子为材料,培育成无菌苗后,取叶片和下胚轴进行诱导愈伤组织,在含有2,4-D的MS培养基上继代培养并诱导体细胞胚发生.通过从不同时期的胚性愈伤组织中剥离不同时期的体细胞胚,对它们进行形态学观察和发生频率统计,进而研究不同枸杞品种、2,4-D质量浓度、继代培养次数、不同部位和温度对枸杞体细胞胚发生的影响.结果表明:在含有0.2 mg/L2,4-D的MS培养基上,继代3次的愈伤组织经诱导分化体细胞胚可达496个/g;同时还探讨了枸杞体细胞胚高频发生再生体系建立的关键影响因素,为体细胞胚发生机理的研究和应用提供依据.     

前胡组织培养和细胞悬浮培养中胚状体发生及植株再生

前胡的种子幼苗切段在含有1mg/l2,4-D的(1/2)MS 固体培养基(大量元素减半)上,诱导产生愈伤组织。诱导两个半月的愈伤组织,在含有1mg/l6-BA+0.5mg/lIBA 或无激素的(1/2)MS 固体培养基上,分化出胚状体,再生成完整植株。愈伤组织在液体培养基中振荡分散及过滤制备成悬浮培养物,在含1mg/l2,4-D的液体培养基中,胚性细胞不断增殖。转移至含有0.05mg/l 2,4-D+0.05mg/l 6-BA 的(1/2)MS 液体培养基中,分化出胚状体,发育成完整植株。     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

新疆海岛棉新海15体细胞胚胎的发生及植株再生

为了扩展可再生棉花的基因型,选取新疆自育海岛棉品种新海15的胚珠为外植体,利用组织培养的方法进行再生体系的建立。结果表明:含0.5mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D的MSB培养基,在暗培养条件下可诱导胚珠,产生初始愈伤;愈伤分化则以含0.05/0.1mg/L KT和0.1mg/L 2,4-D的MSB培养基效果较佳;选取浅黄色、结构疏松的愈伤组织在含较高浓度IBA和较低浓度KT、2,4-D的3种调控培养基上依次继代,以此实现胚性愈伤组织的增殖及细胞状态调控;液体悬浮培养和干燥胁迫处理均有利于胚性愈伤的体细胞胚胎诱导;子叶胚的萌发及植株再生则以含谷氨酰胺和天冬酰胺的1/2 MSB培养基效果较佳。     

东方百合的器官发生与体胚发生研究

以东方百合栽培品种'Sorbonne'、'Siberia'、'Tiber'的试管苗鳞片和叶片为外植体,研究了6-BA(0.3～2.0 mg/L)、KT(0.5～2.0 mg/L)、NAA(0.1～2.0 mg/L)、2,4-D(0.5～2.0 mg/L)、ZT(0.1～0.5 mg/L)对器官发生的影响;以‘Tiber'的愈伤组织为外植体探讨了6-BA(0.2～1.5 mg/L)、2,4-D(0.5～2.0 mg/L)对体胚发生的影响.结果表明:高浓度的激素有利于叶片分化不定芽,6-BA能提高鳞片上不定芽的分化频率,2,4-D能诱导'Tiber'的愈伤组织形成体细胞胚.     

刺槐体细胞胚发生的同步化调控

为了建立一个高频率、同步化发生的体细胞胚培养系统,以二倍体刺槐为材料,对影响刺槐体细胞胚同步化发生的培养基渗透压、培养基中添加的植物生长调节剂、低温等培养环境条件以及悬浮培养结合看护培养方法进行了研究,建立了刺槐体细胞胚同步发生体系.结果表明:1)4 ℃低温条件下处理7 d的胚性愈伤组织,最有利于刺槐体细胞胚的同步化诱导,同步化率可达37.3%;2)培养基中蔗糖质量浓度为50 g/L最适宜调控刺槐的体细胞胚同步化发生,同步化率可达35.0%;3)培养基中的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)质量浓度为0.1 mg/L时最适宜体细胞胚同步化的调控,体细胞胚发生的同步化率可达43.6%,同时对畸形胚的发生有较好的控制作用;4)将悬浮培养的胚性细胞用50目筛(孔径0.28 mm)过滤,将留在筛上的细胞团接种到铺有滤纸的半固体体细胞胚诱导培养基上(培养基为MS(Murashige & Skoog)+NAA(naphthylacetic acid)0.5 mg/L+ BA(benzyladenine)0.5 mg/L+2-吗啉乙磺酸(MES)500 mg/L+谷氨酰胺 500 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂3 g/L),培养21 d后,球形胚大量发生,占到总胚状体数目的67.3%.本结果可为其他植物种类的体细胞胚同步化调控研究提供参考.     

高羊茅高频再生体系的建立

目的建立高频再生体系,为相关基因的转化提供良好的受体系统。方法以高羊茅(Fes-tuca.arundinacea)成熟种子为外植体,以MS为基本培养基,进行高羊茅胚性愈伤组织诱导、继代、分化及生根培养。结果初生愈伤组织在MS 2,4-D5 mg/L CH400 mg/L 蔗糖60 g/L 琼脂12 g/L的继代培养基诱导出体细胞胚后,在含6-BA2.0 mg/L NAA0.5 mg/L的MS培养基上分化形成丛生苗,分化率达78.9%;再生苗在1/2 MS NAA0.5 mg/L生根培养基上生根,生根率达100%。结论MS 2,4-D 9 mg/L为最佳愈伤组织诱导培养基,MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.5mg/L为最佳分化培养基,1/2 MS NAA0.5 mg/L为最佳生根培养基。     

西洋参组织培养及愈伤组织中人参皂苷Rg1和Rb1含量分析

用西洋参(Panax quinquefolium L.)根作为外植体进行愈伤组织诱导,通过不同的培养基和激素配比实验,发现2.0mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA适合西洋参愈伤组织的诱导,愈伤组织在MS 2.0mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA培养基上生长较快,而在NB 2.0mg/L 2,4-D 0.5mg/L 6-BA培养基上细胞培养物中人参皂苷Rg1和Rb1含量较高,分别占干重的1.40%和0.24%.     

2，4-D和6-BA对唐古特大黄愈伤组织诱导的影响

实验选用唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim.ex Regel.)种子萌发的无菌苗为外植体进行离体培养.结果表明,2mg/L的2,4-D最有利于愈伤组织的形成,但更高浓度的2,4-D会影响诱导效果;1mg/L的6-BA有利于愈伤组织的快速诱导,但单独的6-BA无诱导作用.     

莜麦组织培养及再生植株

以莜麦（Ａｖｅｎａｎｕｄａ）成熟种子为材料，研究了培养基成分对愈伤组织的诱导、分化和继代保持的影响。通过对ＭＳ为基本培养基附加２，４－Ｄ、６－ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ等成分的各种培养基上诱导产生的愈伤组织观察比较，发现在２，４－Ｄ浓度为２ｍｇ／Ｌ时，诱导产生的愈伤组织量最多，随着２，４－Ｄ浓度降低，愈伤组织形成的量也减少；在２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的培养基中愈伤组织能分化出芽，产生大量苗，进而再生植株。实验结果表明，在继代培养基中加入一定量的ＡＢＡ和ＺＴ，能有效地促使褐化的愈伤组织恢复正常，使之保持良好的生长状态和分化能力。     

2,4-D和6-BA对唐古特大黄愈伤组织诱导的影响

实验选用唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Regel.)种子萌发的无菌苗为外植体进行离体培养。结果表明,2mg/L的2,4-D最有利于愈伤组织的形成,但更高浓度的2,4-D会影响诱导效果;1mg/L的6-BA有利于愈伤组织的快速诱导,但单独的6-BA无诱导作用。     

当归水培苗的组织培养

以甘肃漳县当年的当归(Angelicasinensis(Oliv.)Diels)种子经萌发而得的幼嫩水培苗为材料进行组织培养研究,结果表明:最佳诱导愈伤组织的培养基是H 0 5mg/L2,4-D;产生愈伤组织的能力依次是叶柄,根尖,叶片;愈伤组织的最佳增殖培养基是MS 1 0mg/L2,4-D 0 2mg/L6-BA;水培苗的最佳壮苗、增殖培养基是MS 1 0mg/LIAA 300mg/LLH 5 0mg/L6-BA;最佳生根培养基是MS 1 0mg/LIAA 300mg/LLH.     

正交设计在毛白杨组织培养中的应用

用正交设计法考察了4种激素对毛白杨叶片诱导愈伤组织的影响.结果显示,2,4 D,NAA作用显著,IAA,6 BA作用不显著.它们作用大小依次为:2,4 D>NAA>6 BA>IAA.诱导毛白杨愈伤组织产生的最佳激素配比为:MS+2,4 D1mg/L+6 BA1.5mg/L+IAA0.5mg/L.     

蛇床愈伤组织的形态发生及植株再生

蛇床幼茎外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２ｍｇ／ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／ｌ培养基上形成淡黄绿色松软状愈伤组织。愈伤组织在转入培养基ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ＋２Ｔ０．８ｎｇ／ｌ以后分化出不定芽，在１／２ＭＳ＋ＩＡＡ２ｍｇ／ｌ培养基中可产生不定根，进而发育成为完整植株。愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．２ｍｇ／ｌ＋ＺＴＺＴ０．４ｍｇ／ｌ培养基中继代３～４次以后，再转入ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／ｌ＋ＺＴ０．８ｍｌ／ｌ培养基中继代１～２次，形成了大量胚状体。胚状体经过球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚最终发育成再生植株。器官发生和体细胞胚胎发生这两种形态发生方式在发生顺序、形态特征和所需激素条件等方面都是不同的。     

不同生长调节物质对宣木瓜愈伤组织的诱导

以宣木瓜(Chaenomeles speciosa Nakai)种子的子叶、胚轴为外植体,研究不同生长调节物质对愈伤组织诱导的影响.结果表明:(1)在子叶诱导实验中,2,4-D比NAA更高效地诱导出愈伤组织,且愈伤组织生长量大,经过继代培养后仍能保持较好的长势.2,4-D与KT组合的效果好干2,4-D与BA的组合.筛选试验表明:MS 2,4-D(1.0 mg/L) KT(0.1 mg/L)对子叶愈伤组织诱导及其生长效果较好.(2)胚轴愈伤组织诱导率达到87%,而子叶的诱导率较低,为69%.虽然NAA的诱导效果较好,但愈伤组织生长速度较慢;2,4-D能高效诱导愈伤组织,但容易出现玻璃化.提高NAA,2,4-D和BA的浓度,愈伤组织呈现水浸状的比例和程度都会相应提高.试验中,2,4-D(0.1 ng/L) BA(0.3 mg/L)处理对胚轴愈伤组织的诱导效果较好.     

植物生长调节剂对黄芪愈伤组织中次生代谢物质含量的影响

以膜荚黄芪幼叶为外植体,运用正交设计研究2,4-D、6-BA和NAA等3种植物生长调节剂组合对愈伤组织生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的影响．结果表明对黄芪黄酮合成的影响顺序是：NAA〉6-BA〉2,4-D;对黄芪皂苷合成的影响顺序是：2,4-D〉6-BA〉NAA．生产黄芪黄酮和黄芪皂苷的最佳培养基分别为;MS＋2,4-D（0．5mg·L^-1）＋6-BA（1．0mg·L^-1）＋NAA（2．0mg·L^-1和MS＋2,4-D（2．0mg·L^-1）＋6-BA（2．0mg·L^-1）＋NAA（1．0mg·L^-1）．细胞伸长有利于愈伤组织中次生代谢物质的合成．     

苦豆子愈伤组织的诱导与继代培养的去褐化研究

利用苦豆子的子叶进行愈伤组织的诱导与继代,筛选出诱导愈伤组织及继代时的最佳培养基．实验发现各种培养基均能诱导出愈伤组织,0．5—1．0mg／L的2,4-D和0．5—2．0mg／L的细胞分裂素6-BA或与Zt共同添加,诱导的愈伤组织状态较好,且当NAA（浓度为0．5mg／L）存在时可改善愈伤组织的状态;浓度为2．0mg／L的Kt和1．0mg／L以下的2,4-D、NAA分别或同时使用时同样可得状态较好的愈伤组织．低浓度的2,4-D、6-BA混合使用或添加1．0mg／L以下的NAA是愈伤组织继代时较好的激素组合,同时观察到0．5mg／L2,4-D和0．5mg／L Kt以及0．5mg／L2,4-D、0．2m-g／LNAA和0．2mg／LTDZ两种组合也能较好的继代愈伤组织．愈伤组织的去褐化除调节激素的浓度与配比外,还采取了其他的去褐化措施,发现添加0．1％活性炭的条件下快速继代（2d继代一次）以及调整基本培养基是较好的去褐化措施．