新疆主要梨品种亲缘关系的分子标记分析

为了分析新疆主要梨品种间的亲缘关系，从160个随机十聚体引物中筛选出12种RAPD引物分析18份材料，共扩增133条带，平均每个引物扩增约11条带，其中14条带为所有材料的共有带，有119个多态位点(占89．47％)，Nel相似系数在0．5～0．723，用PHYLIP构建UPGMA、NJ树，认为：1)对选用的形态学经典分类已较明确的新疆梨、白梨、砂梨、西洋梨、秋子梨，RAPD数据完全与其相符；2)几个芽变间高度相似；3)杂种新梨1号与砀山梨、杂种新梨6号与香梨、杂种早酥梨与苹果梨分别并类；4)苹果梨独立于供试的5个种之外，建议将该品种上升为种一级阶元；5)库尔勒香梨归属于新疆梨。     

库尔勒香梨自交不亲和SFBB-γ基因F-box区和可变区V3 RNAi表达载体的构建及遗传转化

目的为在分子水平应用RNAi(RNA interference)技术调控梨自交不亲和性状,培育自交亲和梨品种。方法基于本实验室获得的库尔勒香梨(Pyrus bretschneideri Rehd)自交不亲和品种花粉决定子SFBB-γ基因c DNA全长序列,选取SFBB-γ基因F-box区和可变区V3分别设计141 bp和120 bp的片段作为干扰序列,以棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR (Fusion PCR)构建SFBB-γ基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihpRNA),酶切后与pCAMBIA1304植物表达载体相连,构建SFBB-γ基因RNAi表达载体并转化至农杆菌GV3101中。利用叶盘转化法转化到库尔勒香梨无菌叶片中,用GUS组织化学染色法鉴定侵染叶片。测序结果表明干扰F-box区获得的ihpRNA臂长为141 bp,茎环253 bp;干扰可变区V3获得的ihpRNA臂长为120 bp,茎环253 bp。结果说明SFBB-γ基因F-box区和V3区的ihpRNA结构融合成功。通过双酶切检验及PCR证实,SFBB-γ基因F-box区和V3区的RNAi表达载体p CAMBIA1304-RNAi-SFBB构建成功; PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌GV3101中,GUS染色检验获得蓝色,目的基因已整合进入库尔勒香梨叶片中。结论成功构建库尔勒香梨SFBB-γ基因F-box区及可变区V3的RNAi表达载体,为诱导香梨SFBB-γ基因转录后基因沉默及培育自交亲和梨品种提供参考。     

应用ISSR分子标记探讨酵母菌种间亲缘关系

从27条简单重复序列区间(ISSR)引物中筛选出10条引物对19株酵母菌进行PCR扩增;采用正交试验设计方法,对ISSR的影响因素进行了研究,对Taq酶,Mg2+,dNTP和引物进行了4因素3水平优化试验,再通过对退火温度和模板DNA浓度的筛选,得出ISSR-PCR扩增的最佳反应体系.10条引物共扩增出108条带,其中90.7%呈多态性,相似系数为0.48~1.00.     

利用ISSR技术对优质红锥种质资源遗传多样性的分析

利用ISSR分子标记对10个优质红锥品种进行基因组多态性分析.从20条引物中筛选的11条具有扩增多态性的引物共扩增出435条带,其中多态性条带325条,占总扩增条带的74.7%,平均每个引物扩增3.95条.ISSR标记揭示的10个优质红锥品种的遗传相似系数变化范围为0.473 7～0.808 1 ,平均值为0.728 7.聚类分析可将10个优质红锥品种分为四类.     

用隶属函数值评价库尔勒香梨在越冬期对不同低温的耐性

为了研究库尔勒香梨枝条在越冬期对不同低温的耐性,试验以库尔勒香梨枝条为材料,测定了越冬期不同低温条件下香梨枝条生理指标的变化,并采用隶属函数法对不同月份枝条对低温的耐性进行综合评价。结果表明:越冬期,香梨枝条相对电导率和丙二醛(MDA)含量随着温度的降低而升高,当半月平均最低温度下降到1月1日的-11.63℃之前,枝条的相对电导率和MDA含量上升缓慢,分别比11月1日增加了6.29%和0.31μmol/g,期间,香梨枝条的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性出现了大量积累,SOD和CAT酶活性在12月1日达到全年最高,分别是392.32 U/g和4.58μmol/g·min,POD酶活性在12月15日达到全年最高2.63μmol/g·min。然而,12月15日之后,随着外界温度的快速下降,枝条的保护酶活性开始降低,相对电导率和MDA含量则迅速上升,在温度最低的2月1日,相对电导率和MDA含量较越冬初期分别上升了43.37%和112.45%。2月1日之后,随着温度的上升,枝条保护酶出现累积,相对电导率和MDA含量也开始下降。隶属函数法评价表明:香梨枝条在越冬期对不同低温的耐性出现了动态的变化,在全年温度最低的2月份,枝条各生理指标的平均隶属值最小,为0.05,此时香梨枝条对低温的耐性最弱。     

宝石鲈与淡水黑鲷及其子一代微卫星位点分析

使用11对微卫星引物对杂交父本宝石鲈(Scortum barcoo)和母本淡水黑鲷(Hephaestus fuliginosus)及其子一代胜斑(F1)进行分子遗传机制研究,结果表明:(1)在11个微卫星位点中,淡水黑鲷有10个位点得到扩增产物,F1有9个位点得到扩增产物,而宝石鲈只得到6个位点的扩增产物,5个位点能在3个种类中稳定扩增;(2)宝石鲈、淡水黑鲷及其F1这3个群体在这5个位点中的平均等位基因数(Ao)为2.000 0、3.000 0、2.200 0;平均有效等位基因数(Ae)分别为2.000 0、2.719 8、2.133 3;平均观测杂合度(Ho)均为1.000 0;平均期望杂合度(He)分别为0.545 5、0.672 7、0.572 7;平均多态信息含量(PIC)为0.375 0、0.537 6、0.410 9;平均Shannon信息指数(I)分别为0.693 1、1.022 7、0.762 5;(3)F1与宝石鲈和淡水黑鲷的遗传相似性系数分别为0.974 7和0.839 8,遗传距离分别为0.025 6和0.174 6.根据Nei's遗传距离建立的UPGMA聚类图表明杂交F1与2亲本的遗传差异不是对等的,而是偏向父本宝石鲈一方.     

松材线虫快速检测试剂盒研制

采用引物对K09F2/R对枯死松树内分离的松材线虫、拟松材线虫及其他线虫进行检测,结果表明,所有松材线虫株系均扩增出一条340 bp的清晰、明亮的条带.而拟松材线虫、其他线虫均无扩增产物.利用引物对K09F2/R构建了松材线虫检测试剂盒.采用该试剂盒可使整个检测过程不超过2.5 h;该试剂盒检测灵敏度为1/7 条线虫,达到了对幼虫成功鉴定的目的,且检测结果便于判读,检测费用较低.     

基于线粒体COⅢ基因变异鉴定黄渤海地区海鱼种类

本研究根据GenBanK发布的核苷酸数据库信息,设计扩增鱼类线粒体COⅢ基因的通用引物,扩增黄渤海地区7种重要商品海鱼(光鱼、梭鱼、鲫鱼、舌鳎、扒皮鱼、六线鱼、白姑鱼)的COⅢ全长基因序列.对扩增产物进行测序、比对,利用分子生物学软件进行序列酶切分析,最终选用Nla Ⅲ限制性内切酶进行酶切,并获得了所研究的各鱼种的特异酶切片段图谱.结果表明,利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术能有效地区分以上7种海鱼,PCR-RFLP技术应用在鱼种鉴定上具有快速、准确的优势.     

高压对大麦种子萌发的影响及诱变的DNA分子指纹分析

利用不同静水压力处理萌动的大麦种子, 保压2 h， 发现高压对大麦种子萌发及幼苗生长均有一定的抑制作用，大麦发芽率和成苗率明显下降，压力达到200 MPa时不再有幼苗成活. 高压处理后 幼苗中出现了表型发生变异的植株，选取不同压力处理中表型变异最明显的3棵单株： P₁,P₂,P₃,， 以ISSR(inter simple sequence repeat) 和RAPD(random amplified polymorphic DNA)手段对其进行DNA指纹图谱分析， 用选取的21个ISSR引物和19个RAPD引物分别扩增出391和229条带，多态性条带比率 (PPB)分别为4993%和5859%，在 P₂和P₃中，两种标记分别扩增出112和113多态条带，ISSR检测中原种与P₂的平均绝对距离系数为0.136　1， 与P₃的平均绝对距离系数为0.116　5. RAPD检测中原种与P₂的平均绝对距离系数为0.151 3，与P₃的平均绝对距离系数 为0.195　9. 结果显示， 原种与P₂,P₃在ISSR和RAPD的检测中DNA的多态性十分明显. 本研究进一步证实， 高压是诱导种子植物变异的一种行之有效的新方法.     

四川黑山羊品种(群体)的RAPD标记研究

从5组24个随机引物中筛选出16个重复性好的多态引物,对四川9个黑山羊品种(群体)共计572只个体,进行随机扩增多态DNA(RAPD)标记研究.结果表明,16个引物扩增出125条带,其中102条带呈现多态,多态率为81.61%.不同引物扩增出的DNA片段在各品种(群体)中的分布频率不同.9个黑山羊品种(群体)间相似系数为0.7533～0.9642,遗传距离指数为0.0358～0.2467.引物OPQ-06(序列为GAGCGCCTTG)未在乐至黑山羊中扩增出900bpDNA片段,而在其他8个黑山羊品种(群体)中出现率均为1,可作为区分乐至黑山羊和其他8个黑山羊品种(群体)的分子遗传标记.引物OPK-03(序列为CCAGCTTAGG)未在江安黑山羊扩增出550bpDNA片段,在其他8个黑山羊品种(群体)中出现率均为1,可用于区分江安黑山羊和其他8个黑山羊品种(群体)的分子遗传标记.