乙肝病毒基因上一个新的维甲素受体反应元件的发现

用构建好的乙肝病毒基因亚克隆ｐＢａｍＨＩＨｉｎｃｌＣＡＴ２转染人特异性肝癌细胞ＨｅｐＧ２及人非特异性肝癌细胞Ｈｅｌａ,通过相应配体的刺激,使细胞内氯霉素乙酰基转移酶活力明显增强．进一步的体外蛋白阻滞分析,确定在该亚克隆上含有一新的维甲素受体反应元件．此元件序列极端保守,由相隔６个碱基的重复序列构成     

—3位碱基对HBVc基因在昆虫细胞中表达的影响

应用ＰＣＲ定点突变技术,分别扩增出－３位碱基是Ａ或Ｔ的乙肝病毒核心抗原基因ｃ１,ｃ２,平端克隆到自行构建便于ＰＣＲ产物克隆的通用载体ｐＢｌｕｅｏＳ中后,利用经ＰＣＲ引物在ｃ１及ｃ２末端引入的酶切位点,切出ｃ１,ｃ２基因,构建出ｐＸ３－ｃ１和ｐＸ３－ｃ２．在Ｓｆ９细胞中瞬时表达ｃ１,ｃ２基因,乙肝核心抗原放免检测结果表明,两种形式的ｃ基因的表达无明显差异．说明－３位是否为Ａ对ｃ基因在昆虫细胞中的表达量没有影响．     

全反式维甲酸对人真皮成纤维细胞RXR的表达影响

Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测人真皮成纤维细胞维甲类Ｘ受体（ＲＸＲ）的表达。结果显示,细胞中只有ＲＸＲα和β的信息ＲＮＡ表达,无γ受体信息ＲＮＡ表达;用全反式维甲酸（ＡＴ－ＲＡ）刺激细胞于不同时段,对ＲＸＲ家族无诱导作用。表明人真皮成纤维细胞ＲＸＲ基因家族的表达调节完全不同于ＲＡＲ基因家族     

血栓素A2在抗原引起气道嗜酸性粒细胞浸润中的作用

为观察血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）合成酶抑制剂ＯＫＹ－０４６及ＴＸＡ２受体拮抗剂Ｓ－１４５２对嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）浸润气道的影响,探讨ＴＸＡ２在ＥＯＳ浸润过程的作用,应用鸡卵白蛋白（ＯＶＡ）致敏和反复雾化吸入刺激小鼠以复制过敏性气道炎症模型。除对照组外,各实验组小鼠于每天ＯＶＡ刺激前分别给予不同剂量ＯＫＹ－０４６或Ｓ－１４５２腹腔注射,计数支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＥＯＳ数量并测定ＢＡＬＦ中ＴＸＢ２和６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）水平。结果,致敏小鼠给予ＯＶＡ刺激后ＢＡＬＦ中ＥＯＳ数,ＴＸＢ２和６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α水平均显著升高,当以ＯＫＹ－０４６或Ｓ－１４５２处理后,ＢＡＬＦ中的ＥＯＳ明显减小,并呈剂量相关性,而且ＯＫＹ－０４６尚能引起ＴＸＢ２水平呈剂量相关性降低。表明,ＴＸＡ２对于ＥＯＳ浸润到呼吸道具有明显的趋化作用,其合成酶抑制剂或受体拮抗剂对于临床治疗哮喘者可能会具有重要的价值。     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

犬冠状动脉周期性血流减少时冠状窦内血浆TXB_2及6-K-PGF_(1α)升高的意义

目的：观察冠状动脉（冠脉）发生周期性血流减少（ＣＦＲｓ）时血栓烷Ａ２（ＴＸＡ２）及前列环素（ＰＧＩ２）的变化及意义。方法：犬剖胸分离出２～３ｃｍ长的冠脉前降支（ＬＡＤ）,用血管钳钳夹方法损伤冠脉内膜后放置血管缩窄环,使冠脉达临界狭窄。缩窄环近端置电磁流量计,诱发ＣＦＲｓ,在ＣＦＲｓ出现前及ＣＦＲｓ出现后４０ｍｉｎ冠状窦内采血,用放免法测ＴＸＡ２及ＰＧＩ２的代谢产物ＴＸＢ２及６－Ｋ－ＰＧＦ１α。结果：ＣＦＲｓ出现４０ｍｉｎ后,ＴＸＢ２及６－Ｋ－ＰＧＦ１α均显著升高（Ｐ＜０．０１）（ＴＸＢ２从７５．６２±４８．８７ｎｇ／Ｌ升至１０９．２２±４５．９９ｎｇ／Ｌ;６－Ｋ－ＰＧＦ１α从１６．１４±９．２８ｎｇ／Ｌ升至３５．５７±１７．２１ｎｇ／Ｌ）。结论：发生ＣＦＲｓ时,血管内皮细胞分泌的６－Ｋ－ＰＧＦ１α随血小板分泌的ＴＸＢ２一同显著升高,其机理可能是血管内皮细胞的一种应激性反应。     

犬冠状动脉周期性血流减少时冠状窦内血浆TXB2及6-K-PGF1α升高的意义

观察冠状动脉发生周期性血流减少时血栓烷Ａ２及前列环素的变化及意义。方法；犬剖胸分离出２－３ｃｍ长的冠脉前降支，用血管钳钳夹方法损伤冠脉内膜后放置血管缩窄环，使冠脉达临界狭窄。缩窄环近端置电磁流量计，诱发ＣＦＲＳ，在ＣＦＲＳ出现前及ＣＲＦｓ出现后４０ｍｉｎ冠状窦内采血，用放免法测ＴＸＡ２及ＰＧＩ２的代谢产物ＴＸＢ２及６－Ｋ－ＰＧＦ１α。     

人红细胞生成素受体膜外结构域在大肠杆菌中的融合表达及其纯化

将插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｂｅ的人红细胞生成素受体ｃＤＮＡ,用ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶解,分离得到的基因片段,插入到经ＥｃｏＲＩ和ＲａｍＨＩ消解的表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ中,得到重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ。重组质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ／ｈＥＰＯＲ含有ｔａｃ启动子,ＥＰＯＲ膜外结构域基因５端与谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）编码基因融合,阳性重组子在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ｈＥＰＯＲ,重组表达菌裂解上清液经ＧＳＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱一步纯化,能除去绝大部分杂蛋白,基本达到纯化的效果。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫杂交分析显示,重组表达产物确系人红细胞生成素受体     

人rabl3基因克隆和表达

以人的胚胎ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法筛选获得ｒａｂ１３基因，并克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３和原核表达载体ｐＧＥＸ、ｐＥＴ－１５ｂ和ｐＭＡＬ－ｃ２中，把ｒａｂ１３基因转染入牛肾上腺毛细血管内皮细胞（ＢＣＥ细胞）中，免疫荧光染色显示Ｒａｂ１３定位于ＢＣＥ细胞胞质内膜性细胞器上，在为ｒａｂ１３基因对膜通道调节功能的进一步研究打下了基础。     

过氧杂多化合物的合成与催化性能（I）：Dawson结构的过氧钽杂多化？…

合成了过氧磷钨杂多酸盐α２－Ｋ７－ｍＨｍ（Ｐ２Ｗ１７（ＴαＯ２）Ｏ６１）．ｘＨ２Ｏ（Ｍ＝Ｋ,ＴＭＡ,ＴＥＡ,ＴＢＡ）并且极谱－循环伏安,ＩＲ,ＵＶ吸收光谱,ＸＰＳ,ＸＲＤ,＾３１ＰＮＭＲ,＾１８３ＷＮＭＲ谱进行表征。     

Hepatitis B virus DNA integration in a sequence homologous to v-erb-A and steroid receptor genes in a hepatocellular carcinoma

Hepatitis B virus (HBV) is clearly involved in the aetiology of human hepatocellular carcinoma (HCC) and the finding of HBV DNA integration into human liver DNA in almost all HCCs studied suggested that these integrated viral sequences may be involved in liver oncogenesis. Several HBV integrations in different HCCs and HCC-derived cell lines have been analysed after molecular cloning without revealing any obvious role for HBV. From a comparison of a HBV integration site present in a particular HCC with the corresponding unoccupied site in the non-tumorous tissue of the same liver, we now report that HBV integration places the viral sequence next to a liver cell sequence which bears a striking resemblance to both an oncogene (v-erb-A) and the supposed DNA-binding domain of the human glucocorticoid receptor and human oestrogen receptor genes. We suggest that this gene, usually silent or transcribed at a very low level in normal hepatocytes, becomes inappropriately expressed as a consequence of HBV integration, thus contributing to the cell transformation.     

水动力转染技术建造慢性乙型肝炎动物模型特效研究

摘要: 目的比较不同质粒建立的水动力转染乙型肝炎小鼠模型的特性。方法将pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 与PAAV-1. 2-HBV-A 两种质粒通过水动力转染法建立两种乙型肝炎小鼠模型,通过对建模成功率和小鼠外周血HBsAg 滴度及稳定性,T 细胞指数流式等检测分析,比较不同模型差异和特效。结果转染pcDNA3. 1-1. 3-HBV-C质粒建模成功率为78. 6%,转染后体内HBsAg 滴度最高达到220IU/mL; 转染PAAV-1. 2-HBV-A 质粒建模成功率为56%,转染后体内HBsAg 滴度最高达到2 300IU/mL。建模小鼠的肝脏进行切片,做免疫组化后,观察实验结果,转染pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 质粒的小鼠肝脏切片的HBsAg 免疫组化较PAAV-1. 2-HBV-A 质粒小鼠颜色面积更大。实验小鼠转染质粒后6 周的外周血进行流式细胞术检测,结果显示特异性T 细胞CD4 +、CD8 + 和正常小鼠比较,两种质粒的造模小鼠未有差别。结论利用水动力转染法用不同质粒建造乙型肝炎小鼠模型在乙肝病毒指标水平和稳定性方面有着显著差异。     

HIV-1和HBV复合型DNA免疫的初步研究

近年的研究表明,在啮齿类和非人灵长类免疫带有编码病毒和细菌抗原基因的质粒ＤＮＡ可以激发体液和细胞免疫应答．在本实验中,将ＨＢＶ的Ｓ基因和ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０基因以融合形式插入到载体ｐｃＤＮＡ３中,其能表达ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０的融合蛋白,并将此质粒ＤＮＡ分别直接注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠和Ｓｗｉｓ小鼠．三次免疫后,用ＥＬＩＳＡ的方法初步检测ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０抗原特异的抗体免疫应答均为阳性．结果说明,带有ＨＢＶ和ＨＩＶ－１融合基因的质粒ＤＮＡ直接免疫小鼠后,均激发了小鼠产生相应的免疫应答反应,这个结果为研究和生产多价疫苗提供了新的思路     

含CpG motifs的乙肝表面抗原载体的构建及表达

构建了编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒pVAX-CpGS2S，其中通过PCR克隆了若干CpG motifs到质粒载体中。经酶切鉴定和测序正确后将重组质粒体外转染COS7细胞，ELISA法检测上清液中的HBsAg呈阳性，说明重组质粒pVAX-CpGS2S在体外能够有效表达HBsAg，为探讨CpG motifs克隆入DNA疫苗载体后对体内免疫反应的影响打下基础。     

Characterization of DNA sequences through which cadmium and glucocorticoid hormones induce human metallothionein-IIA gene

Deletion experiments have defined two stretches of DNA (genetic elements), lying close to the promoter for a human gene for metallothionein, that separately mediate the induction of the gene by heavy metal ions, particularly cadmium, and by glucocorticoid hormones. The element responsible for induction by cadmium is duplicated, yet a single copy is fully functional; the element responsible for induction by glucocorticoid hormones is coincident with the DNA-binding site for the glucocorticoid hormone receptor.     

中草药中胰高血糖素受体拮抗剂的高通量细胞筛选

为筛选胰高血糖素受体拮抗剂，建立了一种高通量筛选胰高血糖素受体拮抗剂的细胞模型.利用PCR方法扩增得到人的胰高血糖素受体 cDNA，并连接到哺乳动物细胞表达载体pCDNA3.1上，构成质粒h glucagons-R/pCDNA3.1，将这种质粒与报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)共转染到HEK293细胞，通过G418筛选，建立稳定的人胰高血糖素受体拮抗剂筛选细胞株.利用胰高血糖素受体内源激动剂探索和优化了筛选条件，筛选方法合理， Z′因子大于0.6，系统稳定，符合胰高血糖素受体拮抗剂的高通量筛选的要求.     

用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质的初报

血小板生成素（ｔｈｒｏｍ ｂｏｐｏｉｅｔｉｎ, ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－Ｍｐｌ介导．利用酵母双杂合系统（ｔｗ ｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ）筛选与ｃ－Ｍｐｌ相互作用的蛋白质因子,以Ｇａｌ４ ＢＤ融合ｃ－Ｍｐｌ膜内部分ｃＤＮＡ 的ｐＡＳＭＭ 为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘ｃＤＮＡ 文库,分离到人波形纤维蛋白（ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ）的部分编码序列,首次检测到波形纤维蛋白与ＴＰＯ 受体之间的相互作用,这提示细胞骨架蛋白可能在ＴＰＯ 的信号转导过程中起着重要的作用