人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因…

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用第三性的分子机制，表明了感染复ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ－１病毒复制受纲细胞的人癌细胞株ＱＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ－１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ－Ｋ     

HuIFN－γ／HuTNF－β重组双功能杂交蛋白的分离和初步纯化

本文对Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１菌株的外源基因表达产物＂人γ－干扰素／人β－肿瘤坏死因子重组双功能杂交蛋白＂（ＨｕＩＦＮ－γ／ＨｕＴＮＦ－β简称γＴＮＦβ）进行了分离和初步纯化，并将产物作了抗病毒和细胞毒活性检测。结果表明，此初步纯化的γＴＮＦβ的细胞毒活性为１．４×１０６ｕ／ｍｇ·ｐ；抗病毒活性为１．７×１０６ｕ／ｍｇ·Ｐ。这一方法的建立，为进一步分离纯化γＴＮＦβ打下了基础。     

人肿瘤细胞株中细小病毒H—1的DNA扩增与非结构蛋白NS—1基因的表达

研究三株人癌细胞和两株对照细胞对细小病毒Ｈ－１杀伤作用敏感性的分子机制．表明了在感染复数ｍｏｉ（ｍｕｌｔｉｐｉｃｉｔｙｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）为５ｐｆｕ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／细胞的情况下，作为Ｈ—１病毒复制受纳细胞的人肝癌细胞株ＯＧＹ－７７０３和人胃癌细胞株ＳＧＣ—７９０１，能够支持病毒ＤＮＡ扩增和非结构蛋白ＮＳ—１基因的表达，这和作为阳性对照的由ＳＶ４０转化的新生儿肾细胞株ＮＢ—Ｋ一样，但对Ｈ—１病毒感染有抗性的人肾癌细胞株ＯＵＲ—１０和它的对照人胎肾细胞株ＨｕＫ—１，并不支持病毒ＤＮＡ扩增和ＮＳ—１蛋白的表达．本文结果指出，细小病毒Ｈ—１的杀伤作用与细胞中的病毒ＤＮＡ扩增及ＮＳ—１基因表达的程度相关．     

干扰素—γ对假孕大鼠黄体功能的影响（Ⅱ）

以假孕大鼠为实验对象,在体注射ＩＦＮ－γ研究ＩＦＮ－γ对血浆孕酮水平的影响,黄体器官离体培养研究ＩＦＮ－γ,ＰＧＦ２α对黄体孕酮水平的作用,结果表明,注射ＩＦＮ－γ后,能提高血浆孕酮水平,由８３．８７ｎｇ／ｍＬ升至１１７．０９ｎｇ／ｍＬ,增长３９．６％（Ｐ〈０．０５）,离体培养条件下加入ＩＦＮ－γ（１２０Ｕ／ｍＬ）也能提高培养液中的孕酮水平（Ｐ〈０．０１）,加入ＰＧＦ２α（１００ｎｇ／ｍＬ）则能显     

人抑癌基因nm23—H1在逆转录病毒载体上表达的研究

应用基因工程的方法，将抑癌基因ｎｍ２３－Ｈ１的ＤＮＡ片段克隆到逆转录病毒表达载体ｐＬＸＳＮ，得到重组质粒ｐＬＸＳＮ－ｎｍｈ１。用磷酸钙沉淀技术将重组质粒转染到辅助包装细胞ψＣＲＩＰ中，通过Ｇ４１８筛选，得到抗性克隆。经ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测证实：ｎｍ２３－Ｈ１基因已整合到克隆细胞的染色体上，并且得到表达。获得的逆转录病毒滴度达１０５ＣＦＵ／ｍＬ。     

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞MCF-7的杀伤效应及其可能机制

用１０μｇ／ｍＬ去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）作用于人乳腺癌细胞,以ＭＴＴ法、流式细胞仪、台盼蓝排斥法和透射电镜等方法分别观察ＮＣＴＤ对癌细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明：ＮＣＴＤ对乳腺癌细胞的杀伤作用有时间和剂量依赖性,药物作用２４ｈ后,Ｇ１期细胞减少,Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增多,凋亡细胞百分比升高并可见到凋亡细胞的形态学变化。     

人肿瘤坏死因子cDNA衍生物在大肠杆菌中的表达及活性测定

应用基因工程方法构建了含人肿瘤坏死因子ＣＤＮＡ衍生物的重组体．转化大肠杆菌后酶切鉴定．转化菌经摇瓶培养及温度调控，获得高效表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，表达的ＴＮＦ分子量约为１７ｋＤ，蛋白量约为菌体可溶性蛋白的２０％．用Ｌ９２９细胞毒性测定法测得菌液ＴＮＦ的表达为２×１０８ｕ／ｍＬ．抗ＴＮＦ的单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的ＴＮＦ对Ｌ９２９细胞的细胞毒性．     

携带TIMP-1基因逆转录病毒载体的构建及其实验研究

构建携带组织金属蛋白酶抑制物ＴＩＭＰ－１基因的逆转录病毒载体，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的变化．利用常规分子克隆技术，通过对逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ（Ｆ６）质粒的去磷酸化、粘端连接，构建ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ；经限制性内切酶酶切、电泳鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的ＰＡ１３７包装细胞进行基因转移，Ｇ４１８筛选阳性克隆，收集上清，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系的研究．构建获得ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ，有效滴度为１０４ＣＦＵ／ｍＬ～１０６ＣＦＵ／ｍＬ．本研究构建获得的ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体，在感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的研究中得到有效应用     

粘虫PuA7S细胞的悬浮培养病毒增殖及其细胞克隆

粘虫ＰｕＡ７Ｓ细胞能在ＴＮＭＦＨ培养基和Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４０５，Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４００两种无血清培养基中实现高密度悬浮培养。在１００ｒ／ｍｉｎ搅拌条件下，ＰｕＡ７Ｓ细胞上述培养其中的最大生长密度分别为１．６５＊１０＾６细胞／ｍＬ，３．５０＊１０＾５细胞／ｍＬ和２．０２＊１０＾６细胞／ｍＬ，群体倍增时间分别为４８ｈ，４５ｈ和４２ｈ，ＡｃＭＶＰＶ能够在ＰｕＡ７Ｓ细胞悬浮系统高水平增殖，在３种培养基培养细胞     

去甲斑蝥素对人乳腺细胞MCF—7的杀伤效应及其可能机制

用１０μｇ／ｍＬ去甲斑螯素（ＮＣＴＤ）作用于人乳腺癌细胞,以ＭＴＴ法、流式细胞仪、台盼蓝排斥法和透射电等方法分别观察ＮＣＴＤ对癌细胞的增殖抑制作用及对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明：ＮＣＴＤ对乳腺癌细胞的杀伤作用有时间和剂量依赖性,药物作用２４ｈ后,Ｇ１期细胞减少,Ｇ２＋Ｍ期细胞明显增多,凋亡细胞百分比升高阈可见到凋亡细胞的形态学变化。     

Ha—ras和Ki—ras癌基因转染和细胞对小鼠细小病毒杀伤敏感…

为研究Ｈａ－ｒａｓ和Ｋｉ－ｒａｓ癌基因转染和细胞对小鼠细小病毒（ＭＶＭ）杀伤敏感性间的关系，两个细胞株，即Ｋｉ－ｒａｓ癌基因转株ＤＴ和Ｈａ－ｒａｓ癌基因转化细胞株ＲＥＦ４－３，被用来作为研究材料，体外细胞集落形成率和细胞在裸小鼠体内的成瘤能力测定显示，和对照细胞ＮＩＨ／３Ｔ３相比之这ＲＥＦ４－３和ＤＴ对ＭＶＭ的杀伤作用更敏感，同时，ＤＮＡ杂交和蛋白免疫沉淀实验结果也显示，在ＲＥＦ４－３和ＤＴ细胞中     

Fe—Mn—Si基形状记忆合金的奈尔温度（TN）对马氏体相变...

用静电音频内耗仪测量了Ｆｅ－３０．３Ｍｎ－６．１Ｓｉ,Ｆｅ－２９．０５Ｍｎ－６．２７Ｓｉ－ＲＥ,Ｆｅ－２６．４Ｍｎ－６．０２Ｓｉ－５．２Ｃｒ形状记忆合金在１５０￣６００Ｋ温度范围的内耗及模量变化,确定了三种合金的ＴＮ温度及Ｍｓ温度,通过计算ε→γ相变内耗峰的面积,研究了奈尔温度ＴＮ对γ→ε马氏体相变的影响。结果表明,合金成分显著地影响ＴＮ温度,其中ＲＥ和Ｃｒ均降低ＴＮ温度。随着ＴＮ温度的降低,Ｍｓ     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

非小细胞肺癌CD44v6,VEGF与C—erbB—2和nm23基因蛋白 …

应用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（ＳＰ）法染色技术测定６５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织标本的ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｎｍ２３基因蛋白的表达水平。显示ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ组织中表达的阳性率分别为６６．２％、７８．５％、６３．１％及７３．８％,均显著高于癌旁组织;上述四项指标阳性率与ＮＳＣＬＣ的病理类型无明显关系;区域性淋巴结转移组ＣＤ     

EXPRESSION OF HUMAN TUMOR NECROSIS FACTOR α IN ANABAENA SP.PCC7120

通过三亲结合转移方式，将含人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ＿α）ｃＤＮＡ和ｐｓｂＡ启动子的鱼腥藻－大肠杆菌穿梭质粒ＰＤＣ＿ＴＮＦ导入单细胞丝状鱼腥藻７１２０中．Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，人肿瘤坏死因子αｃＤＮＡ在鱼腥藻７１２０细胞中能以自主复制形式存在于ＰＤＣ＿ＴＮＦ质粒上．ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ和免疫印迹分析结果显示，转ＰＤＣ＿ＴＮＦ的鱼腥藻７１２０可表达分子量约为１７ｋｕ的人ＴＮＦ＿α，其表达量约占藻体蛋白的１６％左右．转ＰＤＣ＿ＴＮＦ的鱼腥藻７１２０粗提液的ＴＮＦ生物学比活性约为２５×１０４ｕ／ｍｇ．     

带HSV—tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧苷激酶基因的泉病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分很强的杀伤作用。在感染复数（Ｍ。Ｏ。ＩＭｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％。四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９，ＬＡＸ，ＳＰＣ，ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的泉病毒（ＡＤＶ／ＲＳ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性。但杀伤效果有很大差别；就Ａ５４９而言，ＧＣ     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

亚甲二醇二硝酸酯构型和电子结构的ab initio研究

采用量子化学中的从头计算（ａｂｉｎｉｔｉｏ）方法，在ＨＦ／３－２１Ｇ和ＨＦ／６－３１Ｇ＊水平上分别计算研究了亚甲二醇二硝酸酯（ＭＧＤＮ）的旋转构象和电子结构，计算所得ＭＧＤＮ绕Ｃ—Ｏ键旋转的能垒较低（约６ｋＪ／ｍｏｌ），其平面构象的能量最高．能量最低的构象（亦即最稳定构型或平衡几何构型）的２个酯基均绕Ｃ—Ｏ键旋转７７．４°．不同构型的电荷分布差异较小．     

IM-94对肿瘤细胞的抑制作用

采用细胞培养，细胞计数和ＭＴＴ快速检测法观察了肿瘤抑制剂ＩＭ－９４对培养的人肿瘤细胞的抑制作用，结果表明ＩＭ－９４对培养的肿瘤细胞，包括Ｋ５６２细胞，肺癌ＳＰＣ－Ａ１及胃腺癌７９０１细胞均有明显的杀伤作用，并具有一定的量一次和时一效关系，而培养的正常细胞没有明显影响。     

柱层析法纯化重组人肿瘤坏死因子α及其抑癌作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达．发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铰沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—２５、ＤＥＡＥ—５２纤维素和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮＦ—α比活性为２×１０７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％．经过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５％左右，分子量为１７×１０３．ｒｈＴＮ—α对热稳定性试验表明，—２０℃下贮存一年或者０℃下贮存一个月，ｒｈＴＮＦ—α活性仍保留５０％．人胃癌和肝癌细胞株的体外抑瘤试验和接种小鼠的活体抑瘤试验表明，本实验取得的ｒｈＴＮＦ—α具有明显的抑瘤生长作用．