HIV-GAG质粒DNA疫苗的纯化工艺

采用中空纤维超滤浓缩、 离子交换介质和复合模式凝胶过滤介质纯化获得了HIV-GAG药用级质粒DNA疫苗, 并对菌体培养、 菌体裂解、 粗提分离和柱层析等环节进行研究. 实验结果表明, 产品基本符合药用级的质粒DNA要求.     

牛肉风味强化肽（BMP）表达载体的构建

牛肉风味强化肽(Beefy Meaty Peptide,BMP)最初是从牛肉木瓜蛋白酶的水解物中分离得到的八肽,它与味精和盐具有较好的协同作用,可以呈现出牛肉风味.为了能够大量、廉价地得到这种风味小肽物质,本文根据毕赤酵母密码子偏爱性设计出4拷贝头尾相连的BMP表达基因,并将其进行体外串联,得到8拷贝、12拷贝和16拷贝的BMP表达基因,将其插入到表达载体pPIC9,从而得到4种不同的毕赤酵母的表达载体.     

仙人掌多糖的超滤膜分离提取及其影响因素

应用不同截留分子质量的超滤膜对仙人掌多糖浸提液进行分离、纯化和浓缩,并分析了超滤压力、超滤温度、纯化时间、料液体积流量、浓缩倍数等对超滤过程的影响,得出了最适宜的操作条件.研究结果表明,当选用截留分子质量为10000 ku的超滤膜、超滤压力为0.20MPa、超滤温度为25℃、料液体积流量控制在0.04~0.05 L/min、浓缩倍数为5~7倍时,粗多糖得率达0.95%.与传统的真空浓缩法相比,超滤浓缩法的粗多糖得率较高,所得多糖的品质也得到了改善,减轻了后续工艺进一步分离纯化多糖的负担.     

利用中空纤维超滤分离和浓缩灵芝多糖

采用中空纤维超滤器从灵芝菌发酵液中分离和浓缩灵芝多糖。结果表明，中空纤维超滤器具有截留率佳，总通量大，浓缩效果好等优点，为取代真空薄膜蒸馏法提供了一个较理想的分离和浓缩方法，适用于灵芝多糖的工业规模生产。     

重组类人胶原蛋白Ⅰ的层析分离

目的研究重组类人胶原蛋白的基因工程下游工艺对阴离子交换树脂（DE52）和阳离子交换树脂（CM52）的吸附效果。方法将基因工程菌E．coil BL 21经超声破碎、硫酸铵盐析、超滤浓缩后，再进行批量层析进一步分离纯化。结果得到最佳实验条件：采用阴离子交换树脂，pH值为6．0。盐浓度为0．2mol／L，蛋白进样浓度为0．4％（质量分数）。结论在HCBI的纯化过程中，阴离子交换树脂（DE52）较阳离子交换树脂（CM52）的分离效果更优，最终产物的纯度达到95．98％，回收率为91．7％，纯化倍数为5．3。纯化的类人胶原蛋白Ⅰ经SDS—PAGE电泳测定为电泳纯，分子质量为90ku。     

利用扇贝边制造水解动物蛋白的研究

选用复合蛋白酶酶解扇贝边制备水解液，并优化酶解工艺条件；采用中空纤维超滤膜对水解液进行分离纯化，制造高质量的水解动物蛋白，并测试膜分离试验操作条件对分离效率的影响．研究结果表明，先用枯草杆菌蛋白酶酶解4h，然后用风味蛋白酶继续酶解，可以显著提高酶解液中多肽、短肽及游离氨基酸的含量；超过滤的操作压力、温度、酶解液的pH值及浓缩比等因素都将影响超过滤效率，在操作压力不高于0．10MPa，pH值为7．0～7．5，温度为43℃，每过滤10min后就对超过滤膜进行2min的反冲洗等操作条件下，可以大大提高超过滤的分离效率、减少膜的污染及延长膜的使用寿命；试验结果还表明，超过滤分离后水解液的感官指标明显优于未分离的水解原液。     

华根霉固态发酵产纤溶酶的工艺优化和初步提纯

采用华根霉TK317（Rhizopus chinensis）进行固态放大发酵实验，发酵培养基初始含水量为0．75mL／g，固体发酵罐中湿度控制在70％，发酵前期30h通风量为640L／min，后30h通风量变为560L／min，酶活力最高，达到706．3U／g干基。研究并确定了中空纤维超滤浓缩，硫酸铵盐析的分离提取工艺，经过纯化，酶的比活力达23．32U／mg，比浸提液提高11．05倍，酶活力回收率为70．2％。     

重组人胰岛素及C肽的分离纯化

对基因工程构建的含重组人胰岛素和C肽基因的毕赤酵母工程菌进行诱导表达，工程菌用甲醇诱导72 h后，离心去除菌体，上清液经中空纤维膜超滤后SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换柱层析，0~400 mmol/L NaCl梯度洗脱，得到纯度大于92％的重组人胰岛素原。经Lys-C酶和羧肽酶B酶切后，Sephadex G-25柱分离，得到了重组人胰岛素和C肽。     

文蛤蛋白水解制备抗氧化活性肽的研究

以文蛤蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备抗氧化活性肽.利用体外清除DPPH活性评价酶解产物的抗氧化活性,采用超滤、葡聚糖凝胶柱层析和HPLC对相应的活性肽进行分离纯化,通过HPLC-MS进行结构鉴定.结果表明:木瓜蛋白酶水解产物的DPPH清除活性明显高于碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶,产物质量浓度为1 mg·mL-1时,DPPH清除率为55.74%;以DPPH清除率为筛选指标,对木瓜蛋白酶酶解产物进行逐级分离,得到4个具有抗氧化活性的目的肽段,氨基酸序列分别为LNFNLEKSR(1120.3 u)、SWLRPR(814.4 u)、RIGNIISQY(1063.3 u)和LNFNLEK(877.2 u).     

超滤洋葱伯克霍尔德菌CF-66发酵液提取抗菌物质的研究

对洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）CF-66进行摇床培养,获得具有活性的抗菌物质。对其发酵液中抗菌物质的提取采用截留分子量为10 000的双酚A型聚砜中空纤维膜超滤。结果表明,在室温、膜两侧压差0.02～0.03 MPa、料液体积流量为14 L·h^-1时超滤,抗菌活性物质均截留在浓缩液中,超滤浓缩的体积比为2.0%～3.6%,清洗后的膜通量可恢复至97%以上。     

木鳖子皂苷提取分离工艺研究

皂苷为木鳖子主要药效成分之一．本文对木鳖子皂苷的几种提取方法和分离纯化方法进行比较,以期得到一种能够快速简便的提取和纯化方法．考察了木鳖子皂苷的浸渍提取、超声提取、闪式提取对提取率的影响,并进行比较;把小鳖子皂苷的粗提物,分别采用正丁醇萃取和大孔吸附树脂法进行纯化．结果显示,超声提取的提取率最高;闪式提取时间最短;经大孔树脂处理纯度提高,为54．17％;超声或闪式提取结合大孔树脂纯化,成本低、操作简便易行、具有实用性．     

毕赤酵母表达不同拷贝数风味肽的呈味性比较

应用毕赤酵母发酵表达不同串联拷贝牛肉风味肽(4BMP、8BMP、12BMP、16BMP).分别以不含风味肽的发酵液和牛肉汤作对照,经过美拉德反应制备牛肉香精.对不同串联拷贝数的BMP制备的牛肉香精风味特性进行感官评价.结果显示:由不含BMP的发酵液制备的牛肉香精特征味不明显,总体肉香味弱;由牛肉汤制备的牛肉香精特征味明显,但强度弱;以含多拷贝BMP发酵液制备的牛肉香精肉香味和特征味明显.其中4BMP总体香味不和谐;8BMP、12BMP、16BMP牛肉特征突出,肉香味明显,且权重评分方差分析显示3种多肽制备的牛肉香精总体风味无显著性差异.所以,BMP作为基料进行美拉德反应可以提升产物的牛肉特征味和总体肉香味,而拷贝数的增加对风味的影响并不显著.     

玫瑰茄花青素的提取分离研究进展

综述了近年来国内外应用溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、膜过滤及树脂吸附纯化等方法对玫瑰茄花青素的提取、分离和纯化的最新研究进展。这些方法仍存在提取温度高、溶剂回收难和设备可靠性差等问题,应用新型低温提取技术,如超临界/亚临界流体萃取、高静压提取以及生物酶技术等,是今后玫瑰茄花青素提取分离的发展方向。     

蛇神经毒素在毕赤酵母中的分泌表达及其分离纯化

文中主要研究了毕赤酵母基因工程菌的构建及其发酵表达产物蛇神经毒素的分离纯化条件。蛇神经毒素编码基因由本实验室设计、合成，并重组构建成表达质粒pPIC9k-hPK。经电穿孔将该质粒转化毕赤酵母GS115 (His-Mut+)，筛选His+Muts型菌株，经诱导表达，产物进行SDS- PAGE电泳鉴定，相对分子质量与理论值一致，目标蛋白经小试发酵产量可达350mg/L。利用超滤、离子交换树脂及分子筛分离纯化，产物经高效液相色谱(HPLC)分析纯度达92%。     

全氟磺酸中空纤维膜基本性能研究

本文用 EW=1563的 Nafion 树脂为原料,纺制了内径为0.44mm,外径为1mm 的中空纤维膜,并将其转化成 K 型、Na 型和 H 型。研究了不同类型的 Nafion 中空纤维膜对水的吸附行为,并初步探讨了 Nafion-H 中空纤维膜对极性不同的两种液体的分离效果。结果表明,水在Nafion 中空纤维膜中的扩散系数与膜中阳离子半径有关,阳离子半径愈小,扩散系数愈大;水在Nafion-K 中空膜中的扩散系数随温度的升高而增加,求得的扩散活化能为44KJ/mol;同时还表明,Nafion-H 中空纤维膜对甲苯-乙醇混合溶液透过蒸发的分离效果良好。     

纳米级分离技术研究--中空纤维分离膜的制备和应用

研究了中空纤维膜分离技术和纺丝制膜原液的配制原理,尤其是复合中空纤维膜纺丝制膜技术,结果表明,通过复合技术可以得到高分离功能、高透过通量、高抗污染性、高许能可迅速恢复,说明本文提出的内凶双洗方法清洗效果显著。     

大孔树脂层析法分离纯化地榆多糖工艺

采用大孔树脂层析法研究地榆多糖分离纯化工艺,确定最佳工艺条件:选择HB-1600作为地榆多糖分离纯化的最佳树脂,上样浓度为0.333 mg/m L,上柱流速为1 BV/h,洗脱流速为1 BV/h.按此条件进行地榆多糖分离纯化,可以使地榆多糖的纯度由31.15%提高到76.50%.由此表明:利用大孔树脂层析法纯化地榆多糖可除去蛋白质等大部分杂质,提高多糖的纯度和品质,为地榆多糖的后续深入研究奠定基础.     

大孔吸附树脂分离纯化柚皮总黄酮的研究

通过研究大孔吸附树脂分离纯化柚皮总黄酮的工艺,为柚皮总黄酮的工业化生产提供实验依据。本文以广东产柚皮为原料,以柚皮总黄酮含量及回收率等为考察指标,选用大孔吸附树脂对柚皮总黄酮进行分离纯化,分别采用静态试验、动态试验等分别考察大孔树脂对柚皮总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果表明,D101型大孔吸附树脂对柚皮总黄酮静态饱和比吸附量为63.76mg.g-1(干树脂),洗脱率99.37%,纯度在51.56%以上,是实验树脂中分离纯化柚皮总黄酮的最佳大孔吸附树脂。因此采用本法分离纯化柚皮总黄酮是稳定、高效的,可进一步推广应用于工业化生产。     

蒺藜皂甙的提取及部分纯化研究

对蒺藜皂甙的提取、索氏梯度分离和大孔树脂部分纯化进行了系统研究。结果表明,70％乙醇提取法优于水提醇沉法,得率为1．98％;经大孔树脂纯化,皂甙主要存在于40％,50％,55％,60％,65％乙醇洗脱液中,以40％乙醇洗脱液中皂甙含量最高;用薄层分析证实皂甙得到了纯化。