动物抑制素的分子生物学特性(综述)

抑制素是一种水溶性非类固醇促性腺因子，它选择性地抑制促卵泡素的分泌，是控制卵泡生长和精子生成的关键激素之一。近年来，用克隆技术已测出大鼠、牛、绵羊、猪、禽类和人类的抑制素氨基酸序列。本文综述了动物抑制素的来源、合成特性、分子结构、牛卵泡液抑制素Ｎ端氨基酸序列、人类抑制素基因结构、几种动物抑制素亚单位比较和亚单位的表达等方面的研究进展。     

动物抑制素的作用机制与技术开发（综述）

抑制素的生理功能不仅是抑制促卵泡素分泌,而且与下丘脑或更高级的中枢神经活动有关。生理剂量的抑制素只影响促卵泡素的分泌,对促黄体素分泌基本无作用。抑制素免疫可显著提高动物体内促卵泡素的浓度,对繁殖季节和非繁殖季节的母畜都有作用。本文综述了抑制素免疫在提早母畜性成熟和提高公畜繁殖力,提高母畜排卵率,与其它生殖激素免疫的比较,牛抑制素亚单位重组产品,抑制素在禽类繁殖上的作用,抑制素水平检测及应用等方面研究进展,并阐明了抑制素技术开发的前景。     

单克隆抗体亲和渗滤法制备两种生殖激素

在本室已获得高特异抗牛促卵泡激素（bFSH）和抗牛促黄体激素（bLH）杂交瘤细胞的基础上，制备纯化抗bFSH和抗bLH两种单克隆抗体（McAbs），并进而建立了一种单抗免疫亲和渗滤新技术。使用该技术成功地制备了上述两种牛生殖激素，从7g牛垂体干粉可提取3．3mg亲和纯bFSH和11．1mg亲和纯bLH。回收率分别为85％和82％。     

形形色色的牛家族（上）

2009年是农历己丑年，也是十二生肖中的牛年。自古以来，牛就给人类留下了很好的印象，它不仅外表温驯善良、健壮憨厚，更有着吃苦耐劳、勤勤恳恳的性格。另外，在人类历史长河中，牛在宗教、艺术、民俗中也扮演了十分重要的角色，可见牛与我们人类关系是多么紧密的一种动物。那么“牛”到底是什么样的一种动物，牛科动物到底有多少种？哪些动物才算是真正的牛？下面让我们认识一下牛家族的各位成员。     

刊中刊

《科学》 324卷5928号435—537页 牲畜解码 动物驯化是人类社会发展过程中的一个重要部分，研究人员历时6年，花费5300万美金最终破解了牛的基因组序列，可以从历史和生物学的角度对牛有了更近一步的认识。牛的基因组的破译不仅有助人们了解牛的驯化过程，提高牛肉，牛奶的质量改善人类的生活质量，还有助了解人类的疾病。     

牛ANGPTL1基因的电子克隆与序列分析

以牛的ANGPTL1基因为研究对象,利用生物信息学方法,对牛的ANGPTL1基因进行了电子克隆和序列分析,并对推导出的ANGPTL1蛋白结构与性质进行了初步分析。结果表明,牛的ANGPTL1基因序列长为2576bp,该基因的编码序列长为1476bp,编码492个氨基酸,编码序列的两翼有135bp的5’非编码区和785bp的3’非编码区。DNA序列的G＋C百分含量为44．31％,A＋T百分含量为55．69％。该基因的核苷酸序列与人、黑猩猩、鼠和狗ANGPTL1基因的cDNA序列的相似性分别为91％、90％、82％和93％。在氨基酸序列上与人、黑猩猩、鼠和狗的相似性分别为95％、95％、92％和95％。用氨基酸序列构建的进化树显示,在人、牛、黑猩猩、狗、褐鼠、原鸡几种动物中,牛与狗的亲缘关系最近。     

藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR、T-A克隆技术获得了藏绵羊H-FABP基因, 并对克隆序列进行分析. 结果显示, 藏绵羊H-FABP编码基因全长402bp, 编码133个氨基酸. 将藏绵羊H-FABP基因及氨基酸序列分别与Gene Bank中公布的山羊、水牛、家牛、野牦牛、猪、马、狗7种动物进行序列一致率比对, 结果显示, 藏绵羊与所选的7种动物的H-FABP基因序列一致率在90.8%～99.5%之间, H-FABP氨基酸序列一致率在93.2%～100%之间. 其中, 藏绵羊与藏山羊H-FABP基因存在2个位点核苷酸差异:114位碱基位点A→G和第129位碱基位点T→C, 但两个位点的核苷酸差异均为同义密码子, 藏绵羊与山羊H-FABP氨基酸无差异.     

试探索抑制素与生精过程

抑制素是一种主要由性腺分泌的糖旦白激素，其主要作用是抑制腺垂体分泌卵泡刺激素。本文试探索其在生精过程中的作用及机理。     

卵泡分化排卵和黄体发生的分子基础

本文综述了近二十年来在雌性生殖研究领域中五个方面的研究进展。（1）原始卵泡的启动生长和分化：原始卵泡生长启动可能受卵巢内在因子,像生长因子的调控,而不是人所想象的FSH;启动生长的卵泡受生长因子,FSH,激活素,孤儿受体和其他卵巢旁分泌因子调控,并发展成“优势卵泡”;（2）优势卵泡和闭锁卵泡：FSH,激活素／抑制素,卵泡抑素和雌激素调节卵泡分化的趋向,它们的相互作用和平衡决定“优热卵泡”和“闭锁卵泡”的形成,其中雌激素在此起关键性作用;它一方面促进FSH对LH受体的诱导作用,增加GC上的LH受体数目;另一方面可促进GC芳香水酶的产生,使此卵泡进入良性循环,发展为优势卵泡;（3）两种细胞两种促性尕激素学说：在FSH和LH作用下,GC产生的孕酮可被膜细胞利用转化为雄激素;因此GC和TC相互作用是卵巢雌激素产生的前提;（4）排卵:GC主要产生tPA,而TC主要表达tPA的抑制因子PAI－1,在激素作用下,GC的tPA和TC的PAI－1相互作用,形成一个局部蛋白水解窗口,它对卵泡破裂起决定性作用;（5）黄体形成和萎缩：uPA和MMP／TIMP系统对黄体发生起重要作用;而tPA对黄体萎缩起关键作用。     

单克隆抗体亲和渗滤法制备两种牛生殖激素

在本室已获得高特异抗牛促卵泡激素 (bFSH)和抗牛促黄体激素 (bLH)杂交瘤细胞的基础上 ,制备纯化抗bFSH和抗bLH两种单克隆抗体 (McAbs) ,并进而建立了一种单抗免疫亲和渗滤新技术。使用该技术成功地制备了上述两种牛生殖激素 ,从 7g牛垂体干粉可提取 3.3mg亲和纯bFSH和 1 1 .1mg亲和纯bLH。回收率分别为 85 %和 82 %。     

"两步法"体外培养山羊卵母细胞的初步研究

体外成熟培养的卵母细胞经本外受精后，囊胚发育率远低于体内成熟卵母细胞，原因之一是由于体外成熟卵母细胞的不充分获能造成的，有假说认为：卵母细胞在体外培养过程中，如果延长GV期，可促进卵母细胞进一步获能，从而提高发育潜能。本文以山羊卵子为研究对象，探讨了山羊卵泡各种成分以及异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制以及抑制解除后减数分裂的影响，结果显示，山羊50％Q卵泡液、100％卵泡液、半卵泡、打孔整体卵泡以及完整卵泡对山羊卵母细胞的核成熟抑制率分别为：0.00%、9.38%、60.47％、78.26%和70.09%，随后，对经山羊半卵泡、打孔整体卵泡、完整卵泡抑制培养后的卵子进行恢复培养发现，卵子核成熟率分别为：64.29%、3.49%和4.13%，山卵母细胞与半卵泡共培养24h后进行0h、12h、20h、24h和30h的恢复培养，核成率分别为：0.00%、20.00%、61.90%、64.29%和43.75%，表明山羊半卵泡可以有效抑制山羊卵母细胞使之处于GV期，并且这种抑制作用可以恢复，恢复培养时间以20h和24h较为适宜，初步研究异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制的影响发现，50％牛卵泡液、1005牛卵泡液、50％绵羊卵泡液、100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制率分别为3.7%、21.88%、10.00%、58.82%，表明，100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制效果较好。     

病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用

RNA沉默是一种依赖核酸序列特异性的RNA降解过程,是动物、植物抵抗病毒等外源核酸的一种保守防御机制。而针对寄主的这种防御机制,许多病毒演化出RNA沉默抑制子以克服这种防御反应。本文综述了几种动物、植物病毒抑制子的结构和作用方式,讨论了病毒抑制子之间的交叉抑制功能,病毒运动和沉默抑制子之间的关系,病毒RNA和亚病毒寄生物通过沉默抑制子而进行的自我保护原理,抑制子对于miRNA（microRNA）途径的影响以及病毒抑制子在生物技术方面的应用。     

乳腺增生动物模型的建立及健乳灵对其治疗效果的观察

将大鼠随机分成正常对照,模型对照和治疗组,用雌二醇和孕酮诱导大鼠发生乳腺增生,观察乳头高度、乳腺组织结构、测定体内生殖激素水平。结果：模型对照动物液中的垂体促乳素,促卵泡素和雌二醇的浓度显著高于正常对照,促黄体素和孕酮则明显降低;模型对照动物的第２、３对乳头高度显著增高;在治疗组中,结果显示健乳灵在一定程度上可以调整体内垂体－性腺的激素分泌活动;并对乳腺增生病大鼠的乳腺组织有明显的改良作用     

人类及部分实验动物MHC-DRB3.2基因核苷酸序列同源性分析

目的研究人类及部分实验动物DRB3.2基因核苷酸序列的同源性。方法利用PCR技术扩增得到牛的DRB3.2基因片段,并测定其核苷酸序列;从GenBank中下载人类、猕猴、绵羊、山羊、猪的相应基因片段;利用DNAMAN软件进行碱基组成分析、同源性分析和构建分子进化树。结果所分析的物种该基因片段大小为267bp,没有发现碱基的缺失以及插入现象;A、T、G、C四种碱基以及G+C的含量在不同物种之间相差较小。就某种动物来说,G的含量最高,T的含量最低,G+C的含量要明显高于A+T含量;人类与猕猴、绵羊、山羊、牛、猪的同源性分别为91.8%、82.8%、82.4%、81.3%、81.6%。结论不同物种MHC-DRB3.2基因核苷酸序列的同源性都比较高;在研究人类有些疾病时,猕猴是其它实验动物不可替代的;DRB3.2基因是研究生物进化和系统发育分析的一个理想遗传标记。     

运用小波分析对蛋白质进行亚细胞定位预测

基于传统的以20种氨基酸在蛋白质序列中的组分来预测蛋白质亚细胞定位的方法,运用了"离散小波变换"(Discrete Wavelet Transform,DWT)的数字信号处理技术,对蛋白质序列中氨基酸排序的特征进行提取,并与氨基酸百分组成相结合,对蛋白质亚细胞定位进行了预测.通过观察预测结果发现,引入氨基酸的排列顺序特征后,蛋白质亚细胞定位的预测正确率有了显著的提高.     

不同物种间胰岛素及其编码mRNA,DNA序列比较与分析

通过PSI-BLAST搜索与人类胰岛素原(含有86个氨基酸)相似的蛋白质序列，并进行比对，计算比对矩阵的相似得分和期望值，同时运用ClustalW算法对不同物种编码前胰岛素原mRNA及其翻译的蛋白质和DNA序列进行多重比对．结果发现，脊椎动物的胰岛素蛋白质一级结构(A链和B链)和mRNA非常相似，但部分动物C肽的部分序列有差异；系统进化分析表明，人和猴、小鼠和大鼠编码胰岛素的mRNA在进化上关系相近．各物种间编码相同氨基酸的核苷酸序列（CDS)相同，但编码胰岛素的DNA序列不同．各物种胰岛素原蛋白质序列中，A链和B链序列保守，C肽有一定的差异；DNA序列差异较大．     

人类乙型肝炎样病毒核心蛋白中第7位疏水性氨基酸重复肚段区域的突变可以抑制病毒核衣壳的组装

人类乙型肝炎病毒的核衣壳由核心蛋白的二聚体所组成．但是,核心蛋白亚单位与亚单位之间相互作用的机制至今尚不清楚．研究发现,在人类乙型肝炎样病毒──土拨鼠肝炎病毒（WHV）核心蛋白的氨基端,存在着4个保守的疏水氨基酸残基（氨基酸位置101～102）．它们分别是亮氨酸101,亮氨酸108,缬氨酸115和苯丙氨酸122．这4个疏水氨基酸残基以每隔6个氨基酸残基而重复出现1次．它们被称为“第7位疏水性氨基酸重复肽段（hhr）”．由于蛋白质中的疏水键往往在蛋白质的相互作用中起重要作用,因此就在培养细胞系统中研究WHV核心蛋白的hhr区域在…     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制：Ⅱ单克隆抗体的纯化及特性鉴定

在建立六株稳定分泌抗促黄体激素(LH)单克隆抗体的杂交瘤细胞株后,用羟基磷灰石(HAP)吸附层折技术从小鼠特异腹水中一步纯化抗LH单克隆抗体,抗体纯度可达85％—90％,在纯化抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱上基本显示IgG一条带,每ml腹水回收IgG量为3.6mg,并保留大部分抗体活性。特性鉴定结果表明,在六种抗体LH单克隆抗体中,AL-02和AL-06两种抗体与促卵泡激素(FSH)不产生交叉反应,是抗LH-β亚单位上的抗原决定簇的:其它四种抗体与FSH产生完全的交叉反应,是抗LH-α亚单位上抗原决定簇的。用測定抗体与抗原相对结合力的方法估算了四种抗LH单克隆抗体的相对亲和力,结果是AL-01抗体相对亲和力提高,其后依次是AL-03,AL-04和AL-02抗体。     

端粒酶核酶抑制肿瘤细胞生长的研究

已证明有84.7%的人类恶性肿瘤组织细胞中端粒酶表达异常增高.端粒酶的作用是合成染色体末端端粒重复序列维持染色体稳定及细胞永生化的关键因素.因此,端粒酶在肿瘤发生发展中起重要作用,是目前最广泛的肿瘤标志物.核酶是一种具有内切酶活性的RNA分子,只要满足一定的空间结构就能定点切割RNA底物.切割端粒酶的核酶(简称为端粒酶核酶)主要针对端粒酶的两个亚单位hTR和hTERT抑制两基因的表达,降低端粒酶的活性,抑制肿瘤细胞的生长.     

水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌

水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－＝ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一