AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究

用形成包涵体（ＯＯＣ＋）并能利用人工合成启动序列和多角体ＸＩＶ启动子表达外源基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的增强子ｈｒ５部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－Ｇ基因组中，得到两株高效表达ＨＢｓＡｇ基因又形成包涵体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋．对重组病毒的酶切鉴定、ＤＮＡ斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中．插入顺序中，ｈｒ５增强子是插入ＨＢｓＡｇ基因下游，多角体基因与ＨＢｓＡｇ基因方向相反．１２５Ⅰ－固相放射免疫检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＨＢｓＡｇ基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性．ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋表达的ＨＢｓＡ吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒ＴｎＮＰＶ—ＨＢｓ８５－ＯＣＣ＋的比较，分别提高了４０％和４６％．     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

935例HBsAg阳性血清检测PHSAR的临床意义

采用ＥＬＩＳＡ法检测９３５例乙肝病毒（ＨＢＶ）患者血清ＰＨＳＡＲ，并对其与有关ＨＢＶ标志物的关系进行了探讨．结果表明，ＰＨＳＡＲ检出率分别与ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗－ＨＢｃ有密切关系，尤以ＨＢｅＡｇ的存在更为相关，是乙肝病毒复制，具有高度传染性的指标之一．     

鸭乙肝病毒表面抗原特异性单抗的研制及应用

以纯化的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４融合,应用ＥＬＩＳＡ筛选出５Ｂ８和８Ｇ１１ ２株抗体分泌滴度较高的杂交瘤细胞,二者所分泌的单抗仅与ＤＨＢｓＡｇ发生反应,而与其它９种禽类常见的病毒均不发生反应,其亚类鉴定分别属于ＩｇＭ和ＩｇＧ２ａ。用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）阳性鸭血清中粗提的病毒悬液进行５Ｂ８株单抗介导的ＳＰＡ胶体金     

从虫体提纯HBsAg基因表达产物的新方法

感染含乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因的粉纹夜蛾重组核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－Ｈｈｓ８５－ＯＣＣ￣＋的粉纹夜蛾幼虫先经匀浆澄清处理后，再用单克隆抗体亲和柱层析的方法提纯ＨＢｓＡｇ蛋白．提纯的蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，出现３条电泳带，分子量分别为２４ＫＤ，２７ＫＤ和４５ＫＤ．用此法从虫体提纯ＨａｓＡｇ基因表达产物，具有简单、快速、高效的特点．     

HIV-1和HBV复合型DNA免疫的初步研究

近年的研究表明,在啮齿类和非人灵长类免疫带有编码病毒和细菌抗原基因的质粒ＤＮＡ可以激发体液和细胞免疫应答．在本实验中,将ＨＢＶ的Ｓ基因和ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０基因以融合形式插入到载体ｐｃＤＮＡ３中,其能表达ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０的融合蛋白,并将此质粒ＤＮＡ分别直接注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠和Ｓｗｉｓ小鼠．三次免疫后,用ＥＬＩＳＡ的方法初步检测ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０抗原特异的抗体免疫应答均为阳性．结果说明,带有ＨＢＶ和ＨＩＶ－１融合基因的质粒ＤＮＡ直接免疫小鼠后,均激发了小鼠产生相应的免疫应答反应,这个结果为研究和生产多价疫苗提供了新的思路     

乙肝患者在HBsAg消除后HBeAg持续存在

为了研究ＨＢｓＡｇ和ｅ抗原的消长规律，作者使用ＥＬＩＳＡ技术，对１８７名ＨＢＶ携带者的血清学指标进行了７年的随访观察。结果发现乙肝患者在ＨＢｓＡｇ消除后ＨＢｅＡｇ尚可长期持续存在，且ｅ抗原出现与ＨＢｓＡｇ无关。１观察对象１９９０年１月至１９９７年１２月我院肝炎门诊病人１８７名。要求：乙肝三系三项阳性患者（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ三项阳性），其中ＨＢｓＡｇ阳性、滴度在１：６４以上且携带该抗原半年以上，患者中年龄最大者４６岁，最小者１２岁，平均２６．５岁。病程最长者１５年，最短者６个月平均…     

关于半群分次环

设Ｈ是有单位元ｅ的半群,Ｇ是Ｈ的最大子群,Ｊ＾ｇ（Ａ）和Ｊ＾ｇ（Ｓ）分别是Ａ和Ｓ的分次Ｊ－根,证明了Ｊ＾ｇ（Ａ）＝Ｊ＾ｇ（Ｓ）讨论了左自内射性与半群环ＢＨ的分次左自内射性之间的关系。     

ODA—H2O2—HBsAg—HRP伏安酶联免疫分析测定人血清乙型肝炎表…

提出了一种偶合反应伏安酶联免疫分析测定人血清乙型肝炎表面抗体（ＨＢｓＡｂ）的新方法。该法将ＨＢｓＡｇ－ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化邻联茴香胺（ＯＤＡ）的反应与邻联茴香胺的氧化产物在电极上的反应相偶合，在ＢＲ缓冲溶液中，在－０．５６Ｖ（ＳＣＥ）左右产生灵敏的极谱波，根据测定标记在乙型肝炎表面抗原上的ＨＲＰ的量，求得发生免疫反应的乙型肝炎表面抗体的含量。本法对ＨＢｓＡｇ－ＨＲＰ及ＨＢｓＡｂ测定的灵敏度均高于     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。     

乙型肝炎患者血清中IgM类HBsAg免疫复合物的检测及意义

以羊IgG抗人IgM为包被抗体,以HRP-抗HBs为指示抗体,建立了一种较简便的检测IgM类HBsAg免疫复合物的捕捉法酶联免疫吸附试验.实验证明,该法特异性强,重复性好.用本法对乙型肝炎的6种临床类型检测表明,IgM类HBsAg免疫复合物的检出率与临床类型有关.其阳性率在无症状携带者、急性乙型肝炎、慢性迁延性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、重症乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化分别为3.2%、36.7%、28.6%、54.4%、55.6%和61.2%.同时还发现,慢性活动性乙型肝炎的IgM类HBsAg循环免疫复合物有较强的激活补体作用,提示乙型肝炎患者血清补体下降与IgM类HBsAg循环免疫复合物激活和消耗补体有关.     

慢性乙型肝炎肝纤维化程度的模糊聚类分析

在中日友好医院临床及病理确诊的45例慢性乙型肝炎病例中，随机抽取9例通过血清肝纤维化指标进行基于等价矩阵的模糊聚类，判定肝纤维化程度。并按2000年全国传染病防治方案制定的慢性乙型肝炎病理诊断标准进行纤维化分期。模糊聚类结果与肝穿病理纤维化程度基本一致。依此建立慢性乙型肝炎纤维化预报模型，采用3例待预报样本进行验证，证实本模型利用无损伤的方法对判定肝纤维化程度具有一定的实用性。     

TTV感染的检测及意义

目的：探讨本地区不同型别肝炎患者血清中TTV感染状况。方法：采用巢式PCR对97例不同型别肝炎患者血清中TTVDNA进行检测。结果：对97例不同肝炎患者血清中TTV检测,其阳性率慢性乙型肝炎为6.0%,慢性丙型肝炎为24.0%,非甲-庚型肝炎为18.1%。结论：采用巢式PCR对不同型别肝炎患者血清中TTVDNA进行检测。为本地区TTV肝炎的诊断和治疗提供实验诊断方法,具有一定的指导意义。     

人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP的免疫组化及ELISA分析

对人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP(HBsAg Binding Protein)进行了组成和结构分析.利用免疫组化的方法检测了人脑、肝、前列腺、肌肉、胃以及睾丸等组织的SBP的表达情况,并利用ELISA方法测定了慢性乙型肝炎病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP的含量并作统计学分析.免疫组化结果显示SBP存在于包括肝组织在内的多种组织中.ELISA结果表明,慢性乙肝病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP含量存在显著差异,推测SBP可能与人体对乙肝病毒的易感及耐受有关.     

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因（HBsAg）植物表达载体,通过冻融法将HBsAg 基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明：转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的研究进展

目的:介绍拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的进展概况。方法:查阅、分析、归纳有关文献。结果:拉米夫定能明显控制HBVDNA复制,血清谷丙转氨酶恢复正常,减少慢性乙型肝炎的反复复发。结论:拉米夫定是新一代核苷类抗乙肝病毒药物,可通过降低乙型肝炎病毒(HBV)依赖RNA的DNA多聚酶生物活性,明显抑制HBVDNA的合成,是治疗慢性乙型肝炎的新选择。     

慢性肝炎患者91例庚型肝炎病毒抗体测定

目的：阐明HGV在慢性乙肝和慢性丙肝病人中的感染情况。方法：甩ELISA法检测上述二类对象的度型肝炎病毒抗体（抗—HGV）。结果：35例慢性丙肝中有13例阳性,阳性率为37．1％。56例慢性乙肝中有5例阳性,阳性率为8．9％。结论：侵性肝炎合并HGV感染率较高,尤其是慢性丙肝。可能是HBV和HCV感染易慢性化的原因之一,但较单一HBV和HCV感染的临床表现无明显加重趋势。     

微小病毒TLMV的检测研究

目的 TLMV是一种新型与输血性肝炎相关的人类DNA病毒,检测中国慢性乙型肝炎患者体内是否存在TLMV感染.方法根据日本学者Shunji Mishiro提供的序列选择TLMV-CBD279和CBD231最保守区设计引物,用慢性乙型肝炎且TTV阳性患者血清制备DNA模板,进行PCR扩增;将阳性PCR产物连接至pGEM(r)T质粒,碱裂解法提取质粒DNA并纯化.以T7引物为起始全自动荧光测序仪测序.结果获得了162bp基因序列,该序列与日本株CBD231,CBD279同源性为72%.结论说明在中国慢性乙型肝炎患者体内存在TLMV感染.     

替比夫定治疗对阿德福韦酯应答不佳慢性乙型肝炎24个月疗效分析

目的：评估应用替比夫定对阿德福韦酯治疗应答不佳慢性乙型肝炎24个月疗效。方法66例对阿德福韦酯单药治疗应答不佳的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者随机分成2组,A组采用替比夫定（600 mg,1次·d-1,口服）,单药治疗,B 组在原阿德福韦酯治疗（10 mg,1次·d-1,口服）的基础上加用替比夫定治疗。治疗期间监测肝功能、HBV标志物、HBV DNA变化情况及耐药情况。观察24个月。结果治疗24个月,A组HBV DNA转阴率为78.8%,HBeAg血清学转换率为21.2%,而B组患者HBV DNA转阴率为97.0%,HBeAg血清学转换率为45.5%。两组比较差异有统计学意义。A组共有4例（12.1%）患者出现耐药,B组为0。无患者因出现严重不良反应而终止抗病毒治疗。结论阿德福韦酯抗病毒治疗应答不佳的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者联合替比夫定进一步治疗具有较好的疗效,而且安全性高,耐药率低。     

乙型肝炎病毒蛋白及COX-2在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用机制

目的探讨乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶-2(COX-2)在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用机制.方法取42例慢性乙肝患者行穿刺活检时乙型肝炎病毒ccc DNA为阳性乙肝相关性肝细胞癌组织;另取同期手术切除的11例ccc DNA为阴性的非乙型肝炎相关性肝癌组织.免疫组化法检测乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2、CD34的表达水平,Werdner法计算微血管密度;分析上述因子与乙肝相关性肝细胞癌组织微血管生成的相关性.RT-PCR和Western blot检测人肝癌细胞系(HepG2)和稳定转染乙型肝炎病毒X蛋白(HepG2-X)细胞中COX-2mRNA和蛋白表达情况;ELISA法检测细胞上清液中PGE2表达水平和不同浓度COX-2抑制剂塞来昔布作用后PGE2水平.结果乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中COX-2阳性率明显高于乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和非乙型肝炎相关性肝癌组织(P0.01).乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中早期癌症微血管密度明显低于进展期癌症组织,乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织中微血管密度明显低于阳性表达组织(P0.01);COX-2阳性表达组织中微血管密度明显高于COX-2阴性表达组织(P0.01);非乙型肝炎相关性肝癌组织中微血管密度明显低于乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2阳性表达组织(P0.01),与乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和COX-2阴性表达组织之间差异无统计学意义(P0.05);乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙型肝炎相关性人肝细胞癌组织微血管生成呈正相关.HepG2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体对照HepG2细胞,并且细胞培养上清液中PGE2水平明显增加;与HepG2细胞相比,塞来昔布对HepG2-X细胞分泌PGE2具有更强的抑制作用.结论乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙肝相关性肝细胞癌组织中高表达,促进了癌组织微血管生成;乙型肝炎病毒X蛋白可通过COX-2/PEG2信号通路促进了肝癌的发生和发展.