3D打印器官源脱细胞外基质血管支持补片重建腹壁的组织工程方法

以脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)和聚乳酸(polylactic acid, PLA)为材料制备3D打印血管支撑补片(又称支架),用于动物模型腹壁缺损的修复.优化了3D打印可植入补片的设计和实验工艺条件.对制备的3D打印补片的机械强度、表面形态、细胞毒性和生物相容性进行了测试,并与猪小肠黏膜下层(porcine small intestinal submucosa,PSIS)补片和PLA补片进行了比较.结果表明, 3D打印补片的缝合载荷、抗拉强度、亲水性和降解率均显著高于PSIS补片和PLA补片.同时,对3D打印补片的细胞相容性进行体外评价,结果表明细胞活力好且无毒.以大鼠作为动物模型,对3D打印补片的生物相容性和腹壁重建效果进行体内评价.结果表明,缺损区域修复良好,无明显感染、血清肿、血肿等情况发生.综上,证明了所制备的3D打印ADM-PLA-ADM补片比PSIS补片和PLA补片具有更好的组织再生性能, 3D打印补片可实现腹壁缺损的无张力闭合.因此, 3D打印ADM-PLA-ADM补片有望应用于腹壁重建.     

巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮动物移植实验效果的比较

目的:比较辐照巴马香猪无细胞真皮与辐照人无细胞真皮移植动物实验效果.方法:以机械去表皮法制备无细胞真皮与人无细胞真皮辐照(剂量30 KGy)处理后移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面进行比较.结果:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮在大鼠创面愈合过程相似,愈合后创面收缩率差异不显著.结论:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与辐照处理的人无细胞真皮移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面恢复效果无显著差异,可作为人无细胞真皮的替代品进一步用于烧伤治疗的研究.     

巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮动物移植实验效果的比较

目的：比较辐照巴马香猪无细胞真皮与辐照人无细胞真皮移植动物实验效果.方法：以机械去表皮法制备无细胞真皮与人无细胞真皮辐照（剂量30 KGy）处理后移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面进行比较.结果：辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮在大鼠创面愈合过程相似,愈合后创面收缩率差异不显著.结论：辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与辐照处理的人无细胞真皮移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面恢复效果无显著差异,可作为人无细胞真皮的替代品进一步用于烧伤治疗的研究.     

内皮细胞细胞外基质改性钛表面内皮细胞和血小板的生长行为

实验结合碱活化和钛表面原位构建人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的方法制备细胞外基质改性的粗糙钛片(Ti-OH-ECM),然后比较粗糙钛(Ti-OH)表面和光滑钛(Ti,对照组)表面构建ECM前后的表面形貌、亲疏水性变化、官能团表征、细胞相容性和血液相容性。结果表明,ECM在钛表面构建成功,粗糙钛表面接触角降低至9°,ECM改性后,粗糙钛片的接触角有显著的增高,具有统计学意义(P0.01);并且ECM在粗糙钛表面沉积的量显著大于对照组表面(P0.01);1 d和3 d的细胞荧光染色结果表明,粗糙钛表面抑制内皮细胞黏附,但是ECM改性后的粗糙钛表面内皮细胞黏附数量高于对照组改性后的表面,并且具有统计学意义(P0.05);与粗糙钛表面比较,ECM改性后的粗糙钛促进平滑肌细胞粘附及增殖;另外,2 h的血小板黏附结果表明,与对照组相比,粗糙钛的血小板黏附数量显著减少(P0.01),ECM改性后的粗糙钛表面进一步抑制血小板黏附及激活(P0.05)。因此,细胞外基质改性的碱活化钛为生物医疗器械提供了一定的研究基础。     

ICBP90介导PI3K/AKT通路阻断剂LY294002抑制Jurkat T细胞增殖

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路特异性抑制剂LY294002在JurkatT细胞增殖中的作用.方法:以急性T细胞白血病胞(Jurkat T 细胞)为模型,PD98059和阿霉素为阳性对照,在倒置显微镜下观察LY294002对Jurkat T细胞的集落形成的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测LY294002处理后Jurkat T细胞的增殖,流式细胞术检测LY294002处理后Jurkat T细胞周期的变化,Western blotting方法检测Jurkat T细胞中ICBP90蛋白的表达以确定其与LY294002抑制Jurkat T细胞增殖的关系.结果:LY294002能够显著抑制Jurkat T细胞的集落形成和增殖,使Jurkat T细胞停滞于G2/M 期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低,LY294002与阿霉素联合用药可产生一定的协同效应. 结论:LY294002通过下调Jur-katT细胞ICBP90蛋白的表达,抑制Jurkat T细胞增殖.     

血管代谢物在糖尿病心血管并发症早期诊断中的应用

探讨不同培养条件对糖尿病细胞模型的内皮细胞（VEC）和平滑肌细胞（VSMC）增殖、凋亡的影响,检测糖尿病模型中的VEC和VSMC的代谢产物,为糖尿病心血管并发症早期诊断的代谢性生物标记前体物的筛选提供实验依据．通过模拟糖尿病血液环境,分别建立糖尿病VEC和VSMC的细胞模型,采用M丌法和Ho—echst33258荧光染色法观察不同培养条件下细胞的形态和生长变化,并检测乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧簇（ROS）的活性．结果显示：高糖培养短期内诱导VEC和VSMC增殖,且VEC24h达到最大增殖速率,VSMC在48h达到最大增殖速率,但高糖长时程作用导致细胞凋亡,细胞形态变化显著;30mM高糖培养48h后,VEC细胞的LDH、ROS较对照组显著升高,凋亡率明显;而白藜芦醇亚甲胺（RMI）可翻转ROS及LDH的升高,减少细胞在模拟糖尿病内环境中受到的损伤,提示培养VEC24h及VSMC在48h时间点收集细胞代谢气体可作为质谱分析数据．糖尿病细胞模型中ROS、LDH显著升高,诱导细胞凋亡,暗示糖尿病严重患者血液的血糖、血酮严重失常,酸中毒明显,推测其代谢性前体物质可能为丙酮酸、LDH等,呼吸气体中丙酮及CO2可作为糖尿病心血管并发症早期诊断的候选物质．     

关于"基质"概念的研究进展及应用

基质存在于细胞内和细胞外(细胞间).细胞内基质也叫细胞液,由细胞膜包被;细胞外基质是细胞间质的重要组成部分,也叫细胞外液.两者在形态学特征上均为无定形胶胨状,结构组成上有相似之处.     

重组类人胶原蛋白Ⅱ膜的生物相容性

目的探讨用戊二醛交联得到的重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagenⅡ,RHLCⅡ)膜的生物相容性。方法用浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的戊二醛分别交联RHLCⅡ得到两组RHLCⅡ膜(0.005 mol/L组和0.01 mol/L组);把成纤维细胞接种到两组RHLCⅡ膜上,用倒置显微镜和扫描电子显微镜观察细胞贴附情况;用MTT法分析成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上的生长和增殖情况;通过细胞毒性实验评价两组RHLCⅡ膜的细胞毒性。结果当成纤维细胞培养到6 h时,均能贴附于两组RHLCⅡ膜上;培养到96 h时,两组RHLCⅡ膜上的成纤维细胞均融合成片并形成多层细胞;经MTT法分析,细胞接种后96 h,成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上均能实现增殖;0.01 mol/L组比0.005 mol/L组细胞毒性要大,但两组在各时间段,毒性评定均在0~1级,细胞毒性实验合格。结论戊二醛浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的RHLCⅡ膜具有良好的生物相容性。     

nHA/PCL复合材料对成骨细胞增殖的影响

研究了纳米羟基磷灰石/聚己内酯(nHA/PCL)复合材料对成骨细胞的增殖的影响.制备了3种不同的nHA/PCL材料浸提液(3种材料中nHA/PCL质量比分别为0∶100,20∶80和40∶60).采用四唑盐比色法(MTT)检测不同的nHA/PCL材料浸提液对成骨细胞增殖率的影响.应用流式细胞术检测复合材料对成骨细胞周期的影响.结果表明:与对照组相比,实验组细胞增殖率和细胞各时期细胞数量均无显著性差异(p>0.05);研究表明:nHA/PCL浸提液对成骨细胞的增殖无不良影响,具有良好的细胞的相容性,其中40%nHA/PCL具有促进成骨细胞增殖指数的作用.     

精原干细胞体外培养的方法改进

探讨精原干细胞体外培养优化方法,为进一步探讨其生物特征、生殖干细胞移植及生殖损伤及药物保护等研究提供实验基础.制备骨髓基质饲养层,将生后5 d~7 d雄性小鼠生精细胞接种在饲养层上,并于IMDM培养基及37 ℃下共培养,在倒置显微镜下观察细胞生长行为,并对培养后的细胞进行组织学、细胞化学、免疫组化、遗传学鉴定.精原干细胞能在以骨髓基质细胞饲养层上进行增殖和生长,且增殖后的表现出呈簇、团状生长,细胞间可表现出明显的胞质间桥,细胞核大,核/质比高,碱性磷酸酶及C-KIT受体阳性,染色体核型为20对(40条)等精原干细胞的生物学行为特征.原代培养的骨髓基质细胞作饲养层具有取材及制作简便等优点,且能在不添加外源性生长因子的前提下能通过自分泌足够的细胞生长因子,满足精原干细胞体外增殖和抑制分化的需要,是精原干细胞培养的一种良好的饲养层.IMDM培养基、血清及适宜的环境温度是精原干细胞体外培养的重要条件.     

脱细胞生物敷料对烫伤创面愈合的影响

目的研究脱细胞生物敷料对小型猪深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。方法巴马实验用小型猪24头,雌雄不限,体质量(15±3) kg通过铜锭制备大小为4 cm×6 cm的深Ⅱ度烫伤模型,随机分为两组,试验组使用脱细胞生物敷料,空白对照组使用脱脂棉纱布。术后1、2、3、4周统计创面愈合率和愈合时间,并进行临床观察、组织病理学观察及创面羟脯氨酸含量检测,分析创面愈合情况。结果试验过程中动物全部存活,且无创面感染情况发生,试验组术后创面干燥,2周结痂,3周脱痂并长出被毛;空白对照组术后1周创面表面局部有渗出,其余部位干燥,2周结痂,4周脱痂并长出被毛。创面愈合时间试验组为(20. 83±0. 75) d,空白对照组为(27. 33±0. 82) d。2周和3周时两组创面愈合率具有显著性差异。试验组术后3周皮肤各层结构清晰,烫伤面基本愈合,4周时皮肤各层结构完整;空白对照组皮肤各层结构和附件的形成与试验组相比皆滞后6 d左右。术后1周、2周和3周两组创面炎性细胞浸润情况和羟脯氨酸含量具有显著性差异。结论脱细胞生物敷料能够有效促进烫伤创面愈合,可缩短治疗周期。     

葛根黄酮对糖基化终产物致细胞损伤的修复

研究了糖基化终产物（AGEs）对血管内皮细胞（VEC）的作用，以及葛根黄酮对AGEs致VEC损伤的修复.以体外培养的新生小牛胸主动脉VEC为材料，检测了AGEs (4 g/L)作用于VEC 24 h后，细胞内一氧化氮（NO^-₂/ NO^-₃）、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽（GSH）和脂褐素（LPF）含量的变化；细胞乳酸脱氢酶（LDH）的泄漏量；AGEs对细胞生长增殖的影响，及细胞形态和超微结构的变化.结果显示AGEs (4g/L)可使细胞增殖率、LDH、MDA及LPF含量显著升高（P<0.01），NO^-₂/ NO^-₃和GSH含量显著降低(P<0.01).细胞形态收缩变形，胞内出现脂滴和空泡.同时加入葛根黄酮，可使以上指标及细胞形态均接近或恢复到正常水平.因此，葛根黄酮可作为防治糖尿病血管并发症的外源性氧自由基清除剂.     

类人胶原蛋白对BHK-21细胞生长的影响

目的研究类人胶原蛋白HLC（Human—like Collagen）对于细胞生长、细胞凋亡、细胞生长周期及细胞形态的影响。方法用体外细胞培养法，选用BHK-21细胞系为实验对象，进行MTT检测、LDH测定、流式细胞分析、形态学观察及统计学分析。结果MTT检测表明0．2，0．3g／LHLC对于细胞生长有显著的促进作用；HLC对于细胞培养液中LDH浓度无显著性影响；经0．1，0．2，0．3g／LHLC作用后的细胞凋亡百分数变化不大，进一步作周期分析，也无显著影响；形态学观察表明0．3g／LHLC对于细胞形态有加长作用。结论HLC可能通过影响细胞膜、增强细胞贴壁生长而促进细胞生长。     

猪树突状细胞的体外扩增

树突状细胞(DC)是一类专职的抗原提呈细胞,在激发机体初始免疫反应和调节T细胞介导的免疫反应中都发挥十分重要的作用,但至今对猪DC的了解较少.本研究从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150ng/mLpGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6 d后诱导出大量DC,通过显微镜观察可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状.猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定坚实的基础.     

儿茶素对溶血卵磷脂胆碱所致细胞损伤的保护作用

作者以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为材料,研究了溶血卵磷脂胆碱（LPC）和氧自由基（OFR）对血管内皮细胞（VEC）的损伤,及儿茶素对VEC的保护。结果显示：当VEC与LPC（6ug/ml）或黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶（X／XO）（10umol/L 200umol/L）共孵育24小时时,表现为细胞内乳酸脱氢酶（LDH）泄漏量增多,细胞内过氧化脂质丙二醛（MDA）含量升高,细胞生长减缓,存活率下降;当加入不同浓度的儿茶素后则可明显抑制LDH的泄量,降低MDA含量,细胞生长正常,存活率提高。表明LPC与X／XO对VEC有损伤作用,而儿茶素则能通过抗氧化途径抵抗LPC与X／XO至VEC的损伤。     

血管内皮细胞凋亡过程中几种癌基因表达的研究

为了研究细胞凋亡的分子调控机制 ,用光学显微技术、DNA凝胶电泳和Northernblot方法 ,研究了去除生长因子 (FGF和血清 )和蛇毒诱导的两个血管内皮细胞凋亡系统中 p53、c H ras、c myc和bcl 2基因的表达 .发现去除生长因子诱导的细胞凋亡过程中 ,p53基因表达显著增加 ,c H ras和c myc基因表达无变化 ;蛇毒诱导细胞凋亡过程中 ,p53基因表达显著增加 ,c H ras和c myc基因表达无变化 .在正常生长和凋亡细胞中均未检测到bcl 2基因的明显表达 .实验结果表明 :p53基因参与上述两种细胞凋亡诱导系统的分子调控 ;c H ras基因只参与去除生长因子诱导的细胞凋亡过程 ,而不参与蛇毒诱导的细胞凋亡过程 ;这两种细胞凋亡诱导系统均与c myc基因表达无关 ;未见bcl 2基因明显参与血管内皮细胞的凋亡过程 .     

手性固定相合成中原料YWG-NH_2与Spher-NH_2性能的比较

利用液相色谱手性固定相进行手性分离的研究越来越多，因此手性固定相的合成也就成了该项研究中必不可少的关键问题．在手性固定相的合成中氨丙基硅胶作为手性固定相的键合基体，其性质的好坏直接影响手性固定相的手性分离能力．分别利用国产和进口分装的氨丙基硅胶作基体，合成结构完全相同的手性固定相，结果表明进口的氨丙基硅胶合成的手性固定相的性能优于用国产氨丙基硅胶合成的手性固定相，并论述了可能产生这种差别的原因．     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。