土壤微生物DNA提取方法的研究

目的 研究土壤微生物DNA的提取方法.方法 选用3种常见有效的土壤微生物DNA提取方法与本实验设计的土壤微生物DNA提取方法对麦田土壤微生物DNA进行提取比较.结果 4种方法均能从麦田土壤中提取到片段长度大于22kb的DNA片段,不同方法提取的DNA浓度有一定的差异.提取得到的总DNA不需要纯化就可以用于PCR扩增,使用细菌16S rDNA的通用引物可以扩增得到相应的片段.结论 该法操作简便、提取快速、DNA纯度和得率较高.     

重组类人胶原蛋白Ⅱ仿生人工骨材料的制备

目的 采用重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagen Ⅱ,RHLCⅡ)制备仿生人工骨复合材料,并对复合材料进行研究.方法 采用相分离一冷冻干燥法制备RHLCⅡ复合材料;利用扫描电镜、透射电镜、X射线衍射仪、红外光谱仪和万能电子材料实验机对材料的理化性能进行表征;选择急性毒性实验、溶血实验、皮内实验和热原实验对材料的生物相容性进行评价.结果 RHLCⅡ复合材料在晶相组成、化学组成和晶体尺寸方面均类似于天然骨,抗压强度和弹性模量介于致密骨和牙本质之间;复合材料的急性毒性实验、溶血实验、皮内实验和热原实验均为阴性.结论 RHLCⅡ复合材料具有良好的理化性质和生物相容性,有望成为培养自体成骨细胞的理想支架材料.     

改进BP网络在重组大肠杆菌高密度发酵中的应用

目的 将改进BP网络应用于重组类人胶原蛋白工程菌高密度发酵过程分析.方法 通过添加动量项和可变学习速度的方法对传统BP网络算法进行改进.结果 确定了5-9-1的网络结构,选择15组发酵实验数据对其进行训练.改进的方法对网络的收敛起到明显效果.得到的发酵过程BP网络模型收敛性和预测性能较高,平均相对误差仅2.42%.结论 该模型较传统动力学模型误差更小,更接近实验过程.     

重组人生长激素在毕赤酵母中的表达研究

通过单因素分析和正交实验法优化高密度发酵培养基和诱导条件,根据优化结果指导发酵罐发酵.得到改良BSM培养基的最佳配比为甘油30g/L、酵母粉14g/L、K2SO4 13g/L、MgSO4·7H2O 11g/L、CaSO4 0.3g/L、PTM1 4.4mL、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝6.5);得到摇瓶培养最佳诱导条件为种龄24h,诱导时间30h,甲醇浓度2%,pH6.3～6.9.瑞士Bioengineering公司L1523型发酵罐发酵结果显示,细胞光密度(OD600)达到294,rHGH表达量最高达到0.54g/L.     

稀有人参皂苷对实验性白癜风模型的影响

探究稀有人参皂苷对实验性白癜风动物模型的治疗作用。MTT法检测人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3组合物对鼠黑素瘤细胞增殖活性的影响。采用两种化学脱色法(分别使用氢醌和过氧化氢)制备实验性白癜风动物模型,经不同剂量(1. 0 g/kg·d,2. 0 g/kg·d)的人参皂苷干预后,肉眼观察药物治疗实验性白癜风动物模型的疗效,并拍照记录。考察人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3组合物对白癜风动物模型血浆中单胺氧化酶(MAO)、胆碱酯酶(CHE)和血清酪氨酸酶(TYR)含量的影响。MTT实验结果表明该组合物对黑素瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用。经稀有人参皂苷干预后的白癜风动物模型血浆中MAO值降低,CHE活力降低,TYR含量增加。通过肉眼观察能明显地看到动物模型白癜风症状减轻甚至消失。稀有人参皂苷对实验性白癜风动物模型具有良好的治疗作用,为临床应用提供了实验依据。     

重组类人胶原蛋白Ⅰ的层析分离

目的研究重组类人胶原蛋白的基因工程下游工艺对阴离子交换树脂（DE52）和阳离子交换树脂（CM52）的吸附效果。方法将基因工程菌E．coil BL 21经超声破碎、硫酸铵盐析、超滤浓缩后，再进行批量层析进一步分离纯化。结果得到最佳实验条件：采用阴离子交换树脂，pH值为6．0。盐浓度为0．2mol／L，蛋白进样浓度为0．4％（质量分数）。结论在HCBI的纯化过程中，阴离子交换树脂（DE52）较阳离子交换树脂（CM52）的分离效果更优，最终产物的纯度达到95．98％，回收率为91．7％，纯化倍数为5．3。纯化的类人胶原蛋白Ⅰ经SDS—PAGE电泳测定为电泳纯，分子质量为90ku。     

气升式生物反应器内红霉素发酵的动力学分析

研究了气升式生物反应器内红霉素发酵的动力学行为，根据所归纳出的动力学方程，调整发酵过程中的补料策略，得出了比较优化的工艺和工程参数，如发酵液的C／N(碳源／氮源)比、氧摄取速度(OUR)等。根据此动力学模型，调整的优化发酵工艺使得菌体代谢周期缩短了13％，而红霉素发酵水平提高了10％。     

BHK-21细胞在生物材料溶液中黏附及增殖比较

目的比较BHK-21细胞在3种生物材料溶液中黏附及增殖情况,探讨以类人胶原蛋白为基础制备组织工程材料的可行性。方法将BHK-21细胞分别种植于类人胶原蛋白、壳聚糖、透明质酸以及共混溶液中,在倒置显微镜下观察细胞的黏附和生长情况,并利用MTT方法检测种植后1～5 d细胞的增殖情况。结果BHK-21细胞种植12 h,类人胶原蛋白、壳聚糖以及两者共混溶液能显著促进BHK的黏附(P<0.01);BHK-21细胞在类人胶原蛋白溶液及类人胶原蛋白与其他生物材料共混溶液中功能活跃,维持其形态且能持续增殖,其中类人胶原蛋白/壳聚糖共混溶液促细胞增殖能力最强。结论类人胶原蛋白能够维持BHK细胞的生长与繁殖,在组织工程领域是一种极有潜力的组织工程材料。     

重组类人胶原蛋白Ⅱ膜的生物相容性

目的探讨用戊二醛交联得到的重组类人胶原蛋白Ⅱ(recombinant human-like collagenⅡ,RHLCⅡ)膜的生物相容性。方法用浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的戊二醛分别交联RHLCⅡ得到两组RHLCⅡ膜(0.005 mol/L组和0.01 mol/L组);把成纤维细胞接种到两组RHLCⅡ膜上,用倒置显微镜和扫描电子显微镜观察细胞贴附情况;用MTT法分析成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上的生长和增殖情况;通过细胞毒性实验评价两组RHLCⅡ膜的细胞毒性。结果当成纤维细胞培养到6 h时,均能贴附于两组RHLCⅡ膜上;培养到96 h时,两组RHLCⅡ膜上的成纤维细胞均融合成片并形成多层细胞;经MTT法分析,细胞接种后96 h,成纤维细胞在两组RHLCⅡ膜上均能实现增殖;0.01 mol/L组比0.005 mol/L组细胞毒性要大,但两组在各时间段,毒性评定均在0~1级,细胞毒性实验合格。结论戊二醛浓度为0.005 mol/L和0.01 mol/L的RHLCⅡ膜具有良好的生物相容性。     

类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制

目的优化基因工程菌Escherichia coli BL 21生产人源型胶原蛋白的高密度发酵工艺。方法建立一套以溶解氧浓度和比生长速率为中心的控制策略,采用溶氧反馈或pH反馈调节补料速度。结果 OD600可达150,胶原蛋白的表达量为9g／L。结论 20％-30％饱和度的溶解氧和0．1- 0．2 h-1的比生长速率有利于细胞生长和产物表达,其与降低乙酸等有害代谢副产物的积累密切相关。