甘草根愈伤组织诱导与可溶性蛋白含量变化

利用胀果甘草无菌苗根作为外植体诱导愈伤组织,经过多次继代培养筛选出4种类型的愈伤组织,并以不同质量浓度的NaCl胁迫处理Ⅰ型愈伤组织.测定了在根愈伤组织诱导过程中,不同类型愈伤组织继代培养中和Ⅰ型愈伤组织在NaCl胁迫处理条件下的生长情况及可溶性蛋白含量的变化情况.结果显示,以苗龄10d的无菌苗根为外植体可以诱导产生愈伤组织,以MS培养基附加1.0mg/L 2,4-D和0.2mg/L6-BA时,根愈伤组织的诱导率最高,继代培养生长状况良好为Ⅰ型愈伤组织;根外植体两端开始形成愈伤组织时可溶性蛋白含量最高,为2.01mg/g;不同培养基上继代培养的根愈伤组织生长状态不同,可溶性蛋白含量也有不同,以Ⅰ型愈伤组织中可溶性蛋白含量最高;Ⅰ型愈伤组织在5g/L NaCl胁迫下,继代培养21d后,愈伤组织生长量明显提升,在14~21d愈伤组织可溶性蛋白含量明显提高.本研究表明甘草愈伤组织对低质量浓度的盐胁迫有一定的适应性,使其可溶性蛋白含量升高,在可溶性蛋白含量剧烈变化期间,愈伤组织生长量明显提高.     

胀果甘草细胞的悬浮培养

切取胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)无菌苗的子叶、下胚轴和根段外植体进行愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养,建立了胀果甘草细胞悬浮培养体系,测定了悬浮培养细胞的生长曲线,并且研究了接种量、条件培养和激素组合对胀果甘草悬浮细胞生长的影响.结果表明子叶来源的愈伤组织最适合作为胀果甘草细胞悬浮培养的起始培养物;悬浮培养的最佳接种量为 35 g/L;条件培养基的最佳用量为总培养体积的1/3;最适合胀果甘草悬浮细胞生长的培养基是附加了 NAA 1.0 mg/L + KT 0.5 mg/L 激素组合的 MS 培养基.     

胀果甘草愈伤组织生长和多糖合成的调控

为了研究培养基基本成分、碳源以及离子浓度对甘草愈伤组织生长和多糖合成的影响,以MS,6,7-V为基本培养基,改变碳源、PO43-及Ca2+浓度,分析胀果甘草愈伤组织生长及多糖产量.结果表明:MS培养基附加蔗糖最利于甘草愈伤组织生长,6,7-V培养基虽利于甘草多糖的合成但不利于愈伤组织生长从而影响多糖产量.当培养基中PO43-浓度为1.25mmol/L、Ca2+浓度为2.99mmol/L时,甘草愈伤组织生长量积累最高,同时对多糖的生物合成也最为有利.高浓度的PO43-和Ca2+有利于甘草多糖的合成,但不利于愈伤组织的生长.研究结果为利用生物工程手段进行甘草多糖的产业化生产提供参考数据.     

NaCl胁迫下枸杞愈伤组织可溶性蛋白含量的变化

以枸杞愈伤组织为材料,分别接种于对照及含100,200,400mmol／L NaCl的培养基上,培养1,3,5,7,11d．实验结果表明,随着盐浓度的升高．枸杞愈伤组织可溶性蛋白含量降低,且随着时间的延长呈先上升后下降的趋势,即随着盐浓度的升高,培养1,3,5d时可溶性蛋白含量上升,5d后开始下降;培养11d时在不同含盐培养基上加入外源ABA,愈伤组织可溶性蛋白含量升高,通过SDS-PAGE电泳实验发现,当NaCl浓度为400mmol／L时,在愈伤组织中诱导出一条40．5kD的新蛋白．     

缺氧胁迫小细胞团法选育高产黄酮苷悬浮细胞系

以银杏优良品种的种苗诱导愈伤组织,考察了B5,sH,MS,White4种培养基对银杏愈伤组织生长性状和黄酮苷合成能力的影响,采用缺氧胁迫小细胞团法从愈伤组织中筛选高产黄酮苷的细胞系,并对细胞系在悬浮培养时的条件进行了优化.结果表明TZG-1培养周期18d,生长指数为4.12,黄酮苷含量为1.25％,比愈伤组织提高了257.1％;Ms培养基有利于形成质地松软的愈伤组织,当培养基中NH4+与NO3-的浓度比为20.3/39.4或10.3/29.1,蔗糖质量浓度为30g/L或40g/L,pH值为5.6～6.0时,有利于细胞生长和黄酮苷合成.     

胀果甘草愈伤组织培养及甘草酸含量分析

将胀果甘草的根、胚轴、子叶分别接种到含有不同激素组合的MS培养基上 ,在光照或黑暗下培养 .将根接种到液体培养基中培养 .结果发现不同的激素组合对愈伤组织生长和甘草酸质量分数的影响是不同的 .首先 ,随着 2 ,4D质量浓度上升 ,愈伤组织生长状况下降 ,甘草酸质量分数却增多 ,2 ,4D质量浓度为 4 .0时愈伤组织中甘草酸质量分数比生药中的增加 18.9% .加入BA或KT后 ,甘草酸含量明显增多 ,结果显示愈伤组织的生长与甘草酸的质量分数不成正相关 .其次 ,光照培养的愈伤组织比黑暗培养的生长快 ,但甘草酸含量低于黑暗培养 .第三 ,悬浮培养条件下 ,离体根培养物产生大量须根 ,根培养物中甘草酸质量分数明显高于其他培养物 ,比生药增多 4 3.3% ,反映出不同培养物产生甘草酸的能力不同 ,其中以离体根更适于甘草酸的合成 .     

甘草愈伤组织培养及其代谢产物甘草酸的研究

以MS培养基为基础,分别以甘草根、胚轴、子叶为外植体进行培养,考察光照、2,4-D质量浓度、不同激素组合、pH等理化因子对愈伤组织生长的影响,对代谢产物甘草酸进行了HPLC的定量测定.实验表明其中以根的愈伤组织中甘草酸含量最高,为70.2 mg/g;黑暗条件比光照条件更有利于甘草酸合成;以激素组合为2,4-D4.0 mg/L KT0.5 mg/L,pH为5.4时甘草酸含量最高,在此条件下悬浮培养根培养物中甘草酸质量分数为81.6mg/g,比生药增多51.08%.     

红砂愈伤组织耐低温和盐胁迫的适应性

对荒漠植物红砂愈伤组织分别在不同低温(0℃,4℃)和不同浓度NaCl处理下细胞的相对活性、质膜透性和脂质过氧化程度、抗氧化物质黄酮类质量分数以及抗氧化系统酶活性的变化进行研究.结果表明:低温0℃,4℃处理对红砂生理变化的影响差别不大.与室温相比,红砂愈伤组织在0℃,4℃低温胁迫的48 h内敏感性较高,细胞质膜透性增大,细胞活性有所降低,H_2O_2、丙二醛(MDA)和具有抗氧化能力的花色素苷质量分数升高,抗氧化系统酶过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性逐渐升高,但活性均低于对照材料的,而总黄酮质量分数以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的变化随处理时间变化不太明显.低温处理48 h后这些生理指标都趋于稳定.同时,不同浓度NaCl处理下发现红砂愈伤组织在50 mmol/L NaCl中生长最快,总黄酮质量分数随着盐浓度增加而升高.这些结果表明红砂愈伤组织具有很强的适应低温和盐胁迫的调控能力.     

黄瓜组织培养与蛋白含量及抗氧化酶活性的变化

通过对黄瓜子叶组织培养,研究了黄瓜子叶外植体龄对愈伤组织诱导的影响及体内可溶性蛋白含量,CAT,POD,SOD几个生理指标的变化及其与愈伤组织诱导的关系.结果表明:接种在MS(MS+6-BA(1 mg/L)+AgNO3(2 mg/L))培养的3～5 d子叶外植体的愈伤组织诱导能力最强.子叶的抗氧化酶活性及蛋白含量与诱导愈伤组织能力之间存在明显相关性,CAT和SOD与愈伤组织诱导呈负相关,POD和蛋白含量与愈伤组织诱导呈正相关.     

发根农杆菌转化胀果甘草的研究

利用发根农杆菌R1601对药用植物胀果甘草(Glycyrrhiza inflat Bat)进行转化,诱导其产生发根.在发根诱导过程中,分别用不同菌液浓度、不同浸染时间对胀果甘草子叶、胚轴进行转化处理,统计、比较各条件下的发根率,为发根进行液体悬浮培养以及随后的规模性培养提供数据基础.结果表明,用稀释2倍的茵液浸染子叶8 min时,发根诱导率最高,为56.49%.     

银杏叶片愈伤组织培养及光暗条件对黄酮含量的影响

以银杏嫩叶为外植体,在添加不同种类和浓度激素的MS培养基上进行愈伤组织诱导研究,同时分析光暗条件对愈伤组织生长和黄酮含量的影响。愈伤组织生长后,用分光光度比色法分析测定银杏愈伤组织黄酮含量。实验结果:在光照条件下,添加激素6-BA1.0mg/L和NAA2.0 mg/L的MS培养基中,诱导形成的愈伤组织生长最好,黄酮含量较高。     

不同盐胁迫下胀果甘草(Glycyrrhiza inflates Bat.)Na~+吸收的共质体途径初步研究

本实验通过不同离子通道抑制剂对胀果甘草钠离子吸收的影响分析,探讨了其钠离子吸收的共质体途径,为其耐盐分子机制的研究提供基础。结果表明:在低盐浓度(50 mmol/L NaCl)和高盐浓度(150 mmol/L NaCl)下,Ca~(2+)(低亲和阳离子载体和无选择阳离子通道的抑制剂)均无显著的影响胀果甘草对Na~+的吸收;然而当加入钾离子通道抑制剂时,Ba~(2+)显著地降低了低盐胁迫(50 mmol/L NaCl)下胀果甘草对钠离子的吸收;TEA~+、Cs~+显著的降低了在高盐胁迫(150mmol/L NaCl)下胀果甘草对钠离子的吸收。由此得出,无选择阳离子通道NSCCs和低亲和阳离子载体LCT1不是钠离子流入的主要途径,钠离子通过2条低亲和性的Na~+吸收途径流入:途径1对Ba~(2+)敏感,对TEA~+、Cs~+不敏感,介导低盐浓度(50 mmol/L NaCl)下的Na~+吸收;途径2对TEA~+、Cs~+敏感,对Ba~(2+)不敏感,介导高盐浓度(150 mmol/L NaCl)下的Na~+吸收。     

L-半胱氨酸、L-色氨酸和L-天冬氨酸对浮萍愈伤组织再生影响的探索（英文）

以浮萍科浮萍属的L.minor为材料,研究了不同浓度(0、0.5、1.0、1.5及2.0 mmol/L)的L-半胱氨酸(L-Cys)、L-天冬氨酸(L-Asp)和L-色氨酸(L-Ser)对浮萍愈伤组织再生的影响,探究了外源L-Cys对愈伤内源L-Ser和L-Gly浓度的影响.结果表明,L-Asp对浮萍愈伤组织的生长具有抑制作用,L-Ser对愈伤组织的再生无明显影响,而L-Cys对浮萍愈伤组织的再生具有促进作用,促进作用最明显的浓度为1.5 mmol/L,再生率达88.33%.L-Cys处理浮萍愈伤组织后,内源丝氨酸含量从3.01 nmol/mg(鲜重)上升至5.50 nmol/mg(鲜重),较处理前上升明显.     

干旱胁迫下铁皮石斛愈伤组织生理特性研究

以铁皮石斛愈伤组织为材料,采用PEG-6000模拟干旱胁迫处理铁皮石斛愈伤组织,检测愈伤组织可溶性蛋白含量及SOD、POD和APX活性的变化动态。结果表明,不同浓度PEG胁迫下,铁皮石斛愈伤组织可溶性蛋白均高于对照;各浓度PEG胁迫1d后,SOD活性均高于对照,当PEG浓度为30%时,胁迫2d、3d后却低于对照;POD活性随着PEG浓度的增强先上升后下降,在25%PEG胁迫下达到峰值;当PEG浓度为30%时,APX活性随着时间的延长而降低,当PEG浓度低于30%时,APX活性呈上升趋势。铁皮石斛愈伤组织可通过可溶性蛋白含量的增加和保护酶的变化来适应一定程度的干旱胁迫。     

玉米品种嫩单10在NaCl胁迫下生理变化分析

以玉米嫩单10为材料,分别用0,25,50,75 mmol/L的NaCl对其幼苗进行胁迫处理,并在胁迫处理后的2,4,6d测定幼苗叶及根中的脯氨酸含量,幼苗叶中还原糖含量、蛋白质含量,结果显示:在同一胁迫时间里,幼苗叶及根中脯氨酸含量随NaCl浓度的增加而上升;幼苗叶中还原糖含量随NaCl浓度的增加出现上升趋势,蛋白质含量随NaCl浓度的升高出现下降趋势。表明玉米嫩单10幼苗对NaCl胁迫具有一定的顺应反应。     

灯盏花总黄酮和抗光氧化能力对外源茉莉酸的响应

 研究用不同浓度的外源茉莉酸处理灯盏花叶片,测定叶片黄酮和叶绿素含量及抗光氧化能力的变化.结果显示:茉莉酸处理后的3d内黄酮含量变化不大,第6天则显著升高;0.5,1.0,1.5mmol/L 3个浓度的茉莉酸处理组黄酮含量均高于对照,且1.5mmol/L处理组黄酮含量明显比0.5和1.0mmol/L处理组低.茉莉酸未对灯盏花光合作用造成损伤,但叶绿素b含量下降;类胡萝卜素含量都有所增加;叶绿素a在茉莉酸浓度为0.5mmol/L时增加,而浓度为1.0和1.5mmol/L时下降.0.5mmol/L处理组抗光氧化能力下降,1.0,1.5mmol/L处理组抗光氧化能力增强.因此,可以把外源茉莉酸应用于灯盏花的人工种植,提高灯盏花有效成分含量.     

茉莉酸甲酯,蔗糖和氮源对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量的影响

采用单因素和正交试验研究了氮源、蔗糖浓度和诱导子茉莉酸甲酯对蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮类物质积累的影响.结果表明:各因子影响黄酮积累量依次为:茉莉酸甲酯＞蔗糖＞水解酪蛋白＞氮源;蒙古黄芪愈伤组织生长和黄酮含量积累的最佳培养基组合为:MS+NAA 1.0 mg/L+ 6-BA 2.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L+蔗糖50.0 g/L+水解酪蛋白1.0g/L+ MeJA0.02 μmol/L,NH4+∶ NO3-为1∶1.在这种条件下,黄酮产量达到最高为9.78mg/L.     

甘蔗愈伤组织耐盐性研究:耐盐愈伤组织的筛选及脯氨酸、还原糖含量变化

在附加不同浓度NaCl及2.4-D2mg/L的MS培养基上,甘蔗愈伤组织表现出不同的生长效应。培养基中NaCl浓度低时(1％以下),甘蔗愈伤组织表现为适应性生长;而在高NaCl浓度时(2％以上),愈伤组织生长表现出盐害特征。脯氨酸、还原糖测定结果显示,在盐适应情况下,甘蔗愈伤组织中的脯氨酸含量较高,还原糖含量较低;在盐害情况下则相反。     

甘蔗愈伤组织耐盐性研究:耐盐愈伤组织的筛选及脯氨酸、还原糖含量变化

在附加不同浓度NaCl及2.4-D 2mg/L的MS培养基上,甘蔗愈伤组织表现出不同的生长效应。培养基中NaCl浓度低时(1%以下),甘蔗愈伤组织表现为适应性生长;而在高NaCl浓度时(2%以上),愈伤组织生长表现出盐害特征。脯氨酸、还原糖测定结果显示,在盐适应情况下,甘蔗愈伤组织中的脯氨酸含量较高,还原糖含量较低;在盐害情况下则相反。     

胀果甘草解剖结构对盐胁迫的响应及其适应研究

为揭示胀果甘草营养器官对盐胁迫的结构适应,本研究通过石蜡切片法和显微观察,研究了NaCl处理(100、200、300 mmol·L~(-1)) 30 d后胀果甘草幼苗幼嫩器官(幼根、幼茎、新叶)和成熟器官(老根、老茎、老叶)解剖结构的变化特征。结果表明:(1)盐胁迫下,胀果甘草新叶栅栏组织增厚,幼茎韧皮部比例显著上升,能提高叶片光合效率、增强上部茎的营养物质运输能力;幼根皮层细胞层数增多,皮层加厚,有助于提高根皮层对盐离子的过滤和区隔化效率;(2)相比对照,老叶薄壁细胞、老茎髓细胞体积增大并液泡化,能有效稀释盐离子;同时,盐胁迫促进老茎和老根的周皮提前发育,有助于增强茎的保水能力和维持根系在盐环境下的正常生长。综上,盐胁迫下,胀果甘草幼嫩器官和成熟器官解剖结构的变化差异体现了不同的盐适应性,幼嫩器官主要以增强光合、物质运输能力,加强根对盐离子截留为主;而成熟器官主要以保水和稀盐为主。