白眉蝮蛇毒降血压组份的分离纯化及其性质的初步研究

从东北长白山脉的白眉蝮蛇(A.H.Ussurfensis)蛇毒中得到一种聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的降压组份(Hypotensive cpmponent)简称HTC,该组份经过DEAE—Sephadex A_(50)和Sephadex G—75柱层析两步完成,HTC 不含碳水化合物,SDS—PAGE 电泳测得分子量为17500道尔顿,等电点为pH6.6,它具有精氨酸酯酶活性而没有出血活性,促凝,抗凝,纤溶等活性、也无磷脂酶A_2、蛋白质水解酶和L—氨基酸氧化酶的活性.按每公斤家兔体重静脉注入0.1mg HTC 其血压显著下降,数分钟后,血压基本上恢复正常.     

人I型精氨酸酶的聚乙二醇修饰条件探索

精氨酸醇，又名L-精氨酸尿素水解酶，是一种将精氨酸水解成鸟氨酸和尿素的水解酶，本身为内源性蛋白酶。在人体内尿素循环中起到重要作用。工业上可利用其水解活性以精氨酸生产鸟氨酸。另外，精氨酸酶还有着显著的抑制肿瘤细胞分裂的作用。但是，在临床应用中，存在以下缺点：体内循环半表期短，另被循环系统清除，需要多次给药等问题，给患者的日常生活带来很大的不使。而聚乙二醇（PolyethyleneGlycol，PEG）化学修饰能够降低蛋白免疫原性以及有效延长药物半衰期，是解决上述问题的有效途径之一。     

硫酸铵盐析在蕲蛇毒凝血酶样酶分离中的应用

探讨了硫酸铵沉降对蕲蛇毒中凝血酶样酶的初步分离效果的影响 ,确定出最佳处理条件 :2 .0 %的蕲蛇毒在pH 5 .0及 4 5 %饱和度的硫酸铵溶液中盐析沉降蕲蛇毒中非凝血酶样酶杂蛋白 ,上清液即为所分离的凝血酶样酶组分     

精氨酸-蔗糖-水的三组份扩散系数测定

本工作采用金属膜池法测定了精氨酸、蔗糖与水的三组份溶液在２５℃时的三组份扩散系数Ｄ１１、Ｄ１２、Ｄ２１和Ｄ２２。     

革兰氏阴性菌中蛋白质亚细胞定位预测

根据革兰氏阴性菌蛋白不同亚细胞位置、其一级结构中氨基酸含量、氨基酸的关联性及亲疏水性的不同，利用最小离散增量的方法，分别以20个氨基酸组份、400个氨基酸二联体组份及氨基酸亲疏水性在蛋白质上的分布为参数构成离散源，对革兰氏阴性菌蛋白的5类亚细胞定位进行预测，分别用self—consistency方法和Jack-knife方法预测，均取得了较高的预测成功率．     

小叶三点金不同萃取相对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】考察小叶三点金(Desmodium microphyllum)乙醇提取物不同萃取相对尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒主要酶类的抑制作用。【方法】采用不同极性溶剂对小叶三点金乙醇提取物进行萃取,检测各萃取相对尖吻蝮蛇毒中蛋白水解酶、磷脂酶A2、透明质酸酶和类凝血酶的抑制作用,再结合气相色谱-质谱法(GC-MS)对抑制作用最强的萃取相进行组分分析。【结果】乙酸乙酯萃取相能够明显抑制尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶和类凝血酶的活性,经GC-MS分析检测出26种成分,其中正十六烷酸、十八碳烯酸、豆甾醇和谷甾醇具有抑制蛇毒活性的作用。【结论】小叶三点金醇提物乙酸乙酯萃取相对尖吻蝮蛇毒中主要酶类具有明显抑制作用,能够作为有效部位用于抗蛇毒功效组分的筛选研究。
     

皖南山区尖吻蝮蛇毒新出血毒素的纯化及其性质的初步研究

用DEAE·Sephadex A-50,Sephadex G-75,DE_(52)纤维素和Sephadex G-100柱层析,从尖吻蝮蛇毒中纯化出一新的出血毒素(AaH—IV),是糖蛋白,有酪蛋白水解酶和纤溶酶活性,但无精氨酸酯酶等的一些酶活性.其分子量51,000,pI 是5.4.     

二甲基精氨酸-二甲胺水解酶在疾病中的表达和功能

非对称性-二甲基精氨酸(ADMA)抑制一氧化氮合酶(NOS),是内皮功能损伤、心血管疾病和慢性肾脏疾病的危险因素.二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(DDAH)可以代谢ADMA,主要分为两种.DDAH-1主要分布于肾小管、肝脏,从循环中摄取ADMA;DDAH-2主要存在于血管中,分布于内皮细胞胞膜交界处及胞内颗粒、血管平滑肌细胞肌纤维及核被膜中.DDAH的表达、调节和分布均具有特异性.可以特异地调节NO的产生.本文总结了DDAH在心血管疾病和肾脏疾病导致的内皮功能受损中所起的作用.     

黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒主要酶类的抑制作用

【目的】探究中草药黑老虎(Kadsura coccinea)醇提物对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒中主要酶类的抑制作用。【方法】用体积分数为75%的乙醇溶液浸泡黑老虎后再进行超声波处理得到醇提物；通过体外酶活抑制实验分别检测醇提物对尖吻蝮蛇毒中磷脂酶A2、蛋白水解酶、透明质酸酶、类凝血酶的抑制作用。【结果】黑老虎醇提物对尖吻蝮蛇毒中的蛋白水解酶、磷脂酶A2和透明质酸酶具有明显的抑制作用。当蛇毒与醇提物的质量比分别为1∶100，1∶10和 1∶5时，后者能抑制蛇毒中98%磷脂酶A2活性、79%蛋白水解酶活性和65.14%透明质酸酶活性。同时，醇提物能够明显抑制尖吻蝮蛇毒水解纤维蛋白原和类凝血酶的活性。【结论】研究结果证实了黑老虎醇提物能有效抑制尖吻蝮蛇毒中的主要酶类，为深入研究黑老虎药材的抗蛇毒机制提供了理论依据。     

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .     

黄精属植物种间蛋白质和蛋白水解酶的分析比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和复性电泳(G-PAGE)技术对五种黄精属植物茎和叶的蛋白谱带和蛋白水解酶谱进行了分析。结果表明:(1)茎和叶的蛋白质和蛋白水解酶种类有很大差异;(2)它们的茎中均含有66.2、54.6、38.5、28、18.6kD蛋白质和肠、55kD的蛋白水解酶;(3)蛋白质和蛋白水解酶可作为黄精属植物的分类依据之一。     

yC16基因在Escherichia coli中的表达及表达产物的纯化

ｙＣ１６（ｃＤＮＡ,２．９ｋｂ）是果蝇ｙｅｍａ基因的转录片段,为制备ｙＣ１６编码蛋白免疫原,本实验用ＧＳＴ融合基因表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ在Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ中合成该基因的蛋白,并与谷胱苷肽－ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合形成融合蛋白,结果由裂解细菌所得的融合蛋白为水溶性,并且可以在非变性的条件下,通过亲和层析作用在固定化的谷胱苷肽上加以纯化,然后再利用具有识别特异位点的蛋白水解酶－凝血酶或凝     

yC16基因在Escherichia coli中的表达及表达产物的纯化

yC16(cDNA, 2.9kb)是果蝇yema基因的转录片段.为制备yC16编码蛋白作为免疫原,本实验用GST融合基因表达载体pGEX-2T在Escherichia coli中合成该基因的蛋白,并与谷胱苷肽-s-转移酶(GST)融合形成融合蛋白.结果由裂解细菌所得到的融合蛋白为水溶性,并且可以在非变性的条件下,通过亲和层析作用在固定化的谷胱苷肽上加以纯化,然后再利用具有识别特异位点的蛋白水解酶--凝血酶或凝血因子Xa的切割作用,将融合蛋白中的GST成分除掉.实验结果表明,使用pGEX载体合成克隆基因多肽,是一种有效而可靠的方法,步骤简单.     

内含肽介导的鼠多瘤病毒样颗粒生产表达和纯化

鼠多瘤病毒样颗粒(VLPs)可由结构蛋白VP1自组装而成,可用于疫苗开发、基因治疗、药物传递和生物材料等方面.针对目前VP1生产中需要凝血酶去除谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签,生产成本较高、操作复杂的问题,利用内含肽(intein)自剪切的特征,将内含肽插入到VP1与GST标签之间进行融合表达,表达产物经亲和色谱纯化,并通过改变柱内pH值、温度诱导内含肽剪切,使VP1与GST-intein分离从而获得VP1蛋白,产量为4,mg/(L培养基).纯化的VP1可自组装成与天然鼠多瘤病毒样颗粒一致的VLPs.结果表明,内含肽介导鼠多瘤病毒样颗粒生产纯化流程简单易行,且无需凝血酶参与,大幅降低成本,为VLPs的高效制备奠定了基础.     

融合聚精氨酸九肽的小热休克蛋白 原核表达及蛋白纯化

目的构建小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,表达纯化融合蛋白.方法在小热休克蛋白表达载体的基础上利用点突变方法引入聚精氨酸九肽对应序列,转入BL21大肠杆菌感受态细胞进行原核表达,利用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化.结果成功构建了融合聚精氨酸九肽的HSP16. 5融合蛋白表达载体,并对其在大肠杆菌细胞中的原核表达进行条件优化,研究显示:在诱导剂IPTG浓度为0. 5 mmol、37℃条件下诱导4 h目的蛋白产量较高.结论此实验成功构建了小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白的原核表达载体,得到了高纯度的小热休克蛋白-聚精氨酸九肽融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础.     

赤豆(Phaseolus angularis)蛋白质的研究[I]α-和β-球蛋白的制备及其组成

豆类蛋白质的研究,早在十九世纪末已经开始。除熟知的大豆蛋白进行了系统的工作外,其他豆类蛋白亦有不少报导。近几年来,利用近代层析法对豆类蛋白进行了一些工作。1954年确定了黑豆蛋白含有十八种氨基酸。关于赤豆蛋白的研究,1922年Jones等以调节不同饱和度硫酸铵将赤豆球蛋白分为α—和β—两种。并用化学方法确定其中含有精氨酸,组氨酸、赖氢酸和胱氨酸。1949     

梭鱼血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳的研究

采用盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对梭鱼血清蛋白进行了分析。以5。7％浓度凝胶盘状电泳分离梭鱼血清蛋白得15—19带,其中雌鱼为17—19带,雄鱼为15—17带。血清蛋白图谱明显的区带有脂蛋白、球蛋白、运铁蛋白、白蛋白及前蛋白等组份。幼鱼的血清蛋白已出现某些差异。     

均匀设计法优选鹿茸酶解工艺的最佳酶配比

目的优选鹿茸酶解工艺条件。方法以鹿茸酶解液中总氮转化率为指标,采用均匀设计法筛选最佳酶配比。结果酶解工艺最佳酶配比为蛋白水解酶A浓度1.5%,蛋白水解酶B浓度1.2%,蛋白水解酶C浓度0.4%,鹿茸总氮转化率为70.3%。结论本试验结果可为鹿茸酶解工艺的确定提供依据。     

盐胁迫下水稻和黑麦幼苗蛋白质组份的变化

耐盐的779水稻幼苗中,盐胁迫后诱导出66kD/P15\5和26kD/p16.0的特异蛋白组份,并有多种蛋白质组份消失和含量减少现象,而在盐敏感的早花2号水稻中,虽然也有少数蛋白质组份被诱导产生,但没有检测到66kD和26kD两种蛋白质组份,并且双向SDS－PAGE谱型相对稳定,一般耐盐的黑麦幼苗中经盐胁迫后也诱导出26kD蛋白组份,因此,66kD,26kD两种蛋白组份可能与耐盐性有关。     

应用比浊法测定凝血酶样酶活性

传统常用目测法观察血浆凝固时间来测定凝血酶样酶的活性,因无法微观地检测凝固过程的起始而导致灵敏度低．应用比浊法检测凝血酶样酶活性,以东菱克栓酶为标准凝血酶样酶,在血浆凝固过程中,浊度随时间基本呈直线变化直至浊度变化最终趋于恒定,表明此时血浆已完全凝固．酶活与浊度一时间变化曲线的直线斜率之间存在严格的线性关系．线性范围为０．０５～０．６５ｕ／ｍＬ．结果表明,比浊法是一种改进的凝血酶样酶测活方法．