小鼠脑脊髓炎病毒GDⅦ株的繁殖及其血清学检查方法

MEV-GDⅦ株脑内接种小鼠5～7天收获的脑悬液,经胰酶处理可获得高滴度HA抗原。本病毒接种BHK-21细胞后5天有细胞病变,而且病毒抗原阳性细胞可达90％。据此建立了HI和玻片EIA法检测GDⅦ血清抗体的方法。已应用于实验小鼠和豚鼠的常规检查。     

多瘤病毒

<正> 1、引言多瘤病毒是已知最小的致癌病毒之一,是一种高度稳定的脱氧核糖核酸(DNA)病毒,它以隐性感染的方式存在于某些实验小鼠群和都市及乡村的一些野鼠之中。将携带病毒小鼠的器官或多瘤病毒诱发的肿瘤的多瘤病毒浸出液加到敏感细胞培养物上,在37℃条件下培养可明显地增加病毒的数量。若用这些组织培养上清液接种新生小鼠则可使被接种的小鼠发生多种组织学上不同的肿     

蛹虫草菌丝对高血脂调节作用的研究

探讨蛹虫草菌丝对高血脂小鼠调节血脂的作用,135只KM小鼠随机分为9组(n=15只/组):正常对照组、高脂模型组、阳性对照组、加热和不加热蛹虫草菌丝液组(低0.14 g/kg·bw/d、中0.28 g/kg·bw/d、高0.56 g/kg·bw/d). 除正常对照组灌胃等容积的蒸馏水外,其它组均每天早上灌胃高脂乳剂16.5 mL/kg,晚上灌胃给予不同的受试物(33.0 mL/kg),实验持续21 d. 每7 d称量小鼠体质量1次,实验第0天、7天、14天剪尾取血检测血清胆固醇(TC),实验第21天摘眼球取血后解剖小鼠,检测血清TC、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及肝指数. 结果表明:实验第21天,加热和不加热的蛹虫草菌丝液组和金水宝阳性对照组均显著降低高血脂小鼠血清TC和TG水平(P<0.05),并显著降低小鼠肝指数(P<0.01).     

鸡胚对小鼠生长和免疫力的影响

实验以 3 0龄小白鼠为研究对象 ,分别采用鸡胚尿囊液和生理盐水 (对照 )灌胃 3 0d .结果证明 ,鸡胚尿囊液具有明显的促进生长作用 ( p <0 .0 1) ,促进生长效果达 12 .1% .鸡胚尿囊液和胚体混悬液对小鼠具有很好的提升作用 .试验证明 :鸡胚尿囊液和胚体混悬液不仅可以增加小鼠吞噬细胞数量 ,提高其吞噬能力 ( 0 .4mL/ (只·日 )灌胃时 ,p <0 .0 1) ,而且可以提高T淋巴细胞的数量 ( 0 .2mL/只 ,0 .4mL/ (只·日 )灌胃时 ,p <0 .0 1) .就提高小鼠免疫能力而言 ,以 10d龄的鸡胚尿囊液和胚体悬液 ,剂量为0 .4mL/ (只·日 )效果最好 .有关鸡胚尿囊液在功效学方面的作用 ,有待进一步研究 .     

土家药山姜挥发油的安全性初步评价

以小鼠为实验对象,通过急性毒性试验和亚急性毒性试验,初步评价土家药山姜挥发油的安全性.急性毒性试验分为挥发油组和对照组,挥发油组以最大耐受量单次给药5 mL/kg.亚急性毒性试验分为挥发油低剂量组(给药剂量1.3 g/kg)、挥发油高剂量组(给药剂量2.6 g/kg)和对照组,灌胃给药,每天1次,连续15 d.给药后,观察小鼠的体征变化,记录体重和脏器系数,检测血浆中尿素氮、肌酐含量及血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力,进行组织病理学检查.结果表明,与对照组相比,给药后大部分小鼠体征正常,个别小鼠有竖毛等现象,小鼠的脏器系数、尿素氮含量、肌酐含量、谷丙转氨酶活力、谷草转氨酶活力无明显变化(P>0.05);与开始试验时的体重相比,结束试验时的小鼠体重未呈下降趋势;急性毒性试验中1只小鼠死亡;亚急性毒性试验中1只小鼠的谷丙转氨酶活力明显升高(135.30 U/L);1只小鼠肝组织有炎症,1只小鼠存在肝纤维化迹象.实验结果提示山姜挥发油急性毒性低,但在临床高剂量下连续用药可能出现一定的肝毒性,临床上使用应注意其安全性.     

密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.     

季节性流感病毒裂解疫苗在小鼠中的 安全性和免疫原性研究

目的 评价季节性流感病毒裂解疫苗在动物体内的安全性和免疫原性。 方法 按《 中国药典》 三部( 2015 版)方法进行 BALB / c 小鼠异常毒性试验。 免疫原性试验将 BALB / c 小鼠随机分为 2 组,试验组每只小鼠肌肉注射 0. 1 mL 测试疫苗,空白对照组注射 0. 1 mL PBS。 接种后连续观察 49 d,每天记录动物的活动、饮食及体质量情况。 分别于接种后 0、14、28、35 和 49 d,采血并分离血清,红细胞凝集抑制试验( hemagglutination inhibition,HI)检测血清 抗体水平。 结果 异常毒性试验结果提示该疫苗的安全性良好,对小鼠的生长无影响,符合《中国药典》 三部( 2015 版)判定标准。 免疫原性试验结果显示,BALB / c 小鼠免疫后 28 d,血清抗 A( H1N1) pam09 和 A( H3N2) HI 抗体阳 转率均达到了 100% ;免疫后 35 d,抗 B( Victoria 系) 的抗体阳转率达到 70% 。 BALB / c 小鼠抗 A( H1N1) pam09、A ( H3N2)和 B( Victoria 系)抗体水平均达到峰值。 结果表明,该季节性流感病毒裂解疫苗对小鼠进行一次性免疫, 即能达到良好的免疫效果。 结论 该流感病毒裂解疫苗在 BALB / c 小鼠中具有良好的安全性和免疫原性。     

新城疫病毒TL1株的分离鉴定及部分生物学特性研究

新城疫是引起很多禽类发病并致死的一种烈性传染病．本研究通过对内蒙古分离株TL1株应用SPF鸡胚传代、电镜形态学观察、HA及HI试验、毒力鉴定、血凝解脱及血凝素热稳定性试验、动物感染试验等进行了研究。发现TL1株属于新城疫病毒强毒株,血凝素热稳定性较差,属快速血凝解脱型．     

干燥寒冷环境对小鼠生物表征的影响

模拟新疆特有的干燥寒冷环境,以观察其对小鼠体重及一系列生物表征的影响。采用30只ICR小鼠随机分为对照组(15只)和干燥寒冷环境组(15只),每日称重并观察其各种生物表征,共28天。结果表明,①干燥寒冷环境组小鼠和对照组小鼠相比,第1￣6天和7￣12天出现明显差异,第13￣24天这种差异变得无统计学差异;②和正常对照组相比,干燥寒冷环境组小鼠出现一系列异常表现,主要体现在情志上,具体表现为打斗撕咬剧烈、异常性行为活动,有些小鼠在饲养笼内持续作逆时针转圈运动。表明干燥寒冷环境除引起小鼠各种生物表征的改变外,对小鼠的影响较特殊的表现在情志上。     

微注射MT-hGH融合基因后小鼠原核卵体外发育和移植的研究

将MT-hGH(小鼠金属巯因启动子--人生长激素基因)融合基因,用微注射的方法注入昆明白小鼠原核卵的雄原核中,观察注射外源基因对原核卵的存活,卵裂及2细胞胚胎体外发育的影响。实验结果表明,昆明白小鼠原核卵在雄原核内注射2p1 MT-hGH基因悬液后存活率为86.71％,其存活率与只穿刺雄原核不注射:注射培养液;注射TE缓衡液后存活率相近(分别为84.94％,84.4％和86.42％)。基因注射后原核卵存活率降低主要由注射针机械刺激引起的。原核卵在注射MT-hGH基因后注射胚卵裂率显著降低,以培养24h统计。注射培养液组活胚卵裂率为93.98％,丽注射基因组仅为87.96％(P<0.01)。注射MT-hGH基因组在体外培养条件下,2细胞到胚泡的发育率为40.66％,而注射培养液的对照组为64.09％(P<0.05)。注射基因组胚胎发育速度延缓,部分胚胎延缓12h。将基因注射后的原核卵经体外培养形成的198枚2细胞胚。45枚桑椹胚和161枚胚泡,移植给54只假孕受体,其中16只受体妊娠,产仔49只。目前存活25只。85日龄时。有6只小鼠体重为对照组平均体重的1.207～1.353倍,生长速度较快。经检测其中有5只呈阳性反应为转基因小鼠。     

水貂肠炎病毒疫苗免疫效力指标及动物模型研究

按正交及配对实验设计，将水貂病毒性肠炎（ＭＶＥ）细胞培养灭活矿油苗和铝胶苗接种于４８只水貂、１２只豚鼠、１２只家兔，检测三种动物免疫后６￣４０天的血清ＨＩ抗体水平和水貂免疫后１１￣３１天的ＳＮＩ，结果表明：（１）该两苗对水貂的体液免疫效力相同；（２）豚鼠、家兔、水貂接种疫苗后６￣４０天的ＨＩ抗体水平差异不显著，故豚鼠或家兔可作为水貂免后产生抗体水平的模型；（３）水貂免疫后１１￣３１天的ＨＩ抗体水平     

Efficient transfer and expression of human clotting factor IX cDNA in neonatal hemophilia B mice mediated by VSV-G pseudotyped retrovirus

The feasibility of in vivo gene therapy for hemophilia B by VSV-G pseudotyped retroviral vector was introduced. The novel packaging cell line 293GPG was used to produce VSV-G/G1NaBAIX pseudotyped virus with the highest titers up to 8.5×10⁸ cfu·mL^-1. In contrast to the conventional retrovirus, VSV-G pseudotyped virus was more resistant to inactivation by serum complements (P＜0.001). Our results also demonstrated that VSV-G pseudotyped virus was more stable in neonatal mice serum than in adult mice serum (P＜0.01). After intraperitoneal injection of different doses of virus, hFIX antigen was detected and lasted for more than 120 d, the highest level reached (72.5±6.1) ng·mL^-1. Moreover, the functional activity was improved to some extent in all hFIX-treated mice, the most remarkable improvement was observed in the mice treated with higher dose of virus whose clotting activity increased to (3.4±1.5)% and APTT (activated partial thromboplastin time) reduced to (43.2±7.2) s. The anti-hFIX antibody was not detected by the method of Bethesda, no germ line transmission and any side effects associated with gene transfer were found. Our results indicated that neonatal gene therapy for hemophilia B mice by VSV-G pseudotyped retrovirus is promising.     

广西地区恒河猴(Rhesus Monkey)B病毒相关抗体的检查研究

采用玻片免疫酶法(IEA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA),检查了来自广西不同来源恒河猴B病毒的相关抗体。结果表明:广西野生恒河猴受B病毒的感染较为普遍,来自龙虎山及扶绥保护区的猴,B病毒相关抗体阳性率分别是79.7%和75.3%。来自穿洞河及布柳河保护区的猴,B病毒相关抗体阳性率分别是26.1%和28.9%。大新保护区猴阳性率为57.1%。在不同组猴中,小群关养组猴相关抗体阳性率最高,野生猴次之,自繁猴最低。三组间,猴B病毒相关抗体阳性率的差异极显著(P<0.05),经ELISA检查确定为阴性的猴,用IEA检查出7.5%(15/200)的猴被判定为阳性猴。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

Transmission of the polyoma virus middle T gene as the oncogene of a murine retrovirus

Polyoma virus is a papovavirus that productively infects mouse cells. In cells of other species, such as rat cells, polyoma virus is virtually unable to replicate, and a small proportion of infected cells become stably transformed. The ability of polyoma virus to transform infected cells is determined by genes that encode the large, middle and small T antigens and which are found in the early region of the virus genome. We have inserted the transforming region of polyoma virus into a murine leukaemia virus (MLV) vector, to generate a replication-defective transforming retrovirus which for the first time allows efficient transformation of mouse cells by the polyoma virus middle T gene. During the life cycle of this recombinant virus the intervening sequence present in the original polyoma virus middle T gene was removed. The recombinant virus that we have constructed is analogous to other acutely transforming retroviruses, and demonstrates that the polyoma middle T gene is a dominant transforming oncogene.     

H5亚型禽流感病毒HA基因昆虫/杆状病毒系统的表达及对BALB/c小鼠的免疫保护

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1／96 H5N1亚型1．7kb HA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacA的蜜蜂蜂毒素分泌信号下游中,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTM DNA)共转染Sf9昆虫细胞。将重组杆状病毒感染HFive细胞,72h左右收获细胞,超声波裂解,SDS—PAGE结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得表达。蛋白胶薄层扫描分析显示:表达的HA蛋白占重组杆状病毒感染细胞总蛋白含量的17．1％。Western-blot 及血凝实验结果显示,表达的禽流感H5N1亚型病毒HA蛋白具有生物学活性。表达的H5 HA蛋白定量乳化后,皮下多点注射免疫SPF 级BALB/c雌性小鼠,免疫后产生了H5 HA特异抗体,并在三免前后达到并保持较高水平。用致死剂量的HPAIV H5N1攻击小鼠,免疫组小鼠提供了100％的保护力,而对照组小鼠先后发病且死亡:为研制禽流感H5N1亚型病毒亚单位疫苗,防制禽流感奠定了基础。     

注射H5N1亚型禽流感抗体鸡的血清抗体水平消长规律监测

为了解H5N1亚型禽流感纯化抗体(IgG)在鸡体内消长规律,用血凝抑制试验检测了不同注射时间分离的血清样品。结果表明IgG接种后第1至5天,血清抗体滴度恒定在24~26,第8天为23~24,第10天以后几乎检测不到抗体。上述数据表明注射滴度为29的抗体液1mL可有效保护肉鸡免受禽流感病毒的感染,有效期为8天。     

基于免疫进化算法的Bayesian网结构学习

利用免疫进化算法（IEA）, 借助遗传和接种疫苗操作将基于打分和基于约束的两类Bayesian网结构学习方法有机地结合在一起, 提出一种新的Bayesian网结构学习方法. 通过与基于遗传算法的Bayesian网结构学习方法EGA(Expectation & Genetic Algorithm）的对比试验表明, 所提出算法的收敛速度更快、 学习得到网络的精度更高.     

丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂的评价

对丙型肝炎病毒抗体免疫酶快速检测试剂(IEA)检测丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)的性能、结果等技术参数进行评价,为实验室的选用提供参考.采用IEA法、ELISA法和胶体金法对中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”和3297份血清或血浆标本同时测定,对IEA的敏感性、特异性、重复性和检测时间等结果进行评价.结果表明:IEA可通过中国生物制品检定所“第三代ELISAHCV-Ab诊断试剂国家参考品”检验;与ELISA法比较,IEA的检出率为99.06%,灵敏度与ELISA相当,胶体金的检出率为86.01%,灵敏度比ELISA低;IEA检测所需时间15～25min.IEA既有ELISA的敏感性、特异性,又有胶体金简便、快速的特点.适用于献血员及高危人群中HCV抗体的筛查和临床诊断HCV感染,以及门诊、急诊和基层医疗单位的现场检测.