香菇担孢子杂交

测定了担孢子存活率及萌发率,比较了单双核茵丝的培养特征、生长速度,并进行了单核茵丝的配对杂交、杂交菌株的初筛试验。结果表明,香菇担孢子的存活率与萌发率随冰箱(0～4℃)保存时间延长而明显降低;单双核茵丝的培养特征与生长速度有明显差别,两者较易区分。单核茵丝的配对杂交得到了一株具优良性状的菌株。此菌株的菇产量较其双亲高28.5%。     

产纤维素酶新菌株的筛选及其产酶特性研究

【目的】筛选分离新的纤维素酶产酶菌株,并对其生长特性和产酶特性进行研究。【方法】从堆肥样品中分离得到一株产纤维素酶菌株,定名为CP1,利用16SrRNA序列对比和Biolog微生物鉴定系统进行鉴定。通过测定菌株生长速率确定其最适生长条件。采用CMC发酵培养基进行纤维素酶的研究,确定其产酶曲线。测定粗酶液最适作用温度和pH值,热稳定性和金属离子对其影响。【结果】经鉴定该菌株为梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis),其最适生长温度为30℃,最适生长pH值为6。在含CMC-Na的培养基培养,该菌株的生长与产酶同步进行,培养48h菌株生长量达到最大,培养液的CMC酶活力同时达到最大值,为0.46U/mL。该菌株所产的纤维素酶既有酸性CMC酶活力,又有碱性CMC酶活力,并以碱性CMC酶为主,酸性CMC酶的活力只有碱性CMC酶的71.4%。其酸性CMC酶的最适作用pH值为6.0,碱性CMC酶的最适作用pH值为8.0。另外,该菌株所产碱性CMC酶活的最适作用温度为40~50℃,而且0.5%的Cu2+使其酶活降低45%。【结论】菌株CP1为首次报道的梭形芽孢杆菌产纤维素酶新菌株,具有独特的酸碱性环境下的纤维素酶活力。     

不同缓冲培养体系下三株白腐菌的生物学特性

研究了 5种不同缓冲培养体系对云芝 (Coriolussp .)S、栓菌 (Trametessp .)CD和平菇 (Pleurotussp .)BP的生长及其调节系统 pH值和产漆酶能力的影响 .结果发现 :pH对这三株白腐菌的生长、改变体系pH能力、漆酶分泌均有显著影响 .这三株白腐菌最适合的生长条件均为中、酸性 ,一定的 pH范围内菌株S具有较强的降低 pH的能力 ,可使培养体系 pH持续降低 ,随后有所回升 ,菌株S不分泌漆酶 ;菌株CD持续抬升体系pH ,可使起始 pH为 3.0左右的培养体系 pH在第 10d升到 8.2 ,其最适合产漆酶的 pH为 3.0 ,第 6d漆酶酶活可达 9.0U/mL ;菌株BP基本不改变体系的 pH ,最适合分泌漆酶的pH为 5 .0 ,第 6d漆酶酶活可达 192 .0U /mL .     

真菌漆酶高产菌株的筛选

利用在PDA培养基中添加愈创木酚和α-萘酚的平板法,对43株大型真菌进行产漆酶初筛,根据平板菌落周围产生的褐色和紫色氧化圈的显著程度初步筛选得到明显分泌漆酶的21个菌株.进一步将这21个菌株分别进行摇瓶发酵,用ABTS法检测发酵液中漆酶的活力,复筛出3个漆酶产量较高的菌株,分别为香菇L03、灵芝T1和糙皮侧耳5.33,其酶活分别为382.3、324.9和297. U·L-1.     

产耐碱性纤维素酶丝状真菌的筛选及鉴定

经过初筛和复筛从碱性土样中分离出的12株丝状真菌中获得1株能够产耐碱性纤维素酶的丝状真菌SDU3．87,经形态学初步鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)．生长条件的测定显示该茵生长pH范围较宽,在中性偏碱时生长最好,在pH8．0～10．0的碱性条件下长势良好．粗酶液的性质测定表明,该茵所产纤维素酶的pH稳定性较好,内切酶活在pH7．0最高,在pH9．5时仍能保持最高酶活力的40％以上．     

绿色木霉产纤维素酶降解各种废纸效果研究

绿色木霉3.3744菌株所产纤维素酶对草稿纸、复印纸、滤纸、包装材料和新闻纸等五种类型废纸有不同的降解效果。结果表明:包装材料作为底物时的纤维素酶酶活始终较高,因而最终降解效果也最好,酶解4小时后酶活仍为2.72U/mL。就酶解速度来说,以新闻纸为底物时最高,在酶解1小时后酶活力即达2.52U/mL。液体培养所得纤维素酶活力在2～3天时间达到最高,其中以打印纸和新闻纸作为碳源时纤维素酶活力最高,在三天后分别达到4.31U/mL和3.64U/mL。     

产漆酶菌株的筛选及产酶条件的优化

以愈创木酚培养基为底物,利用平板筛选法从土壤朽木中筛选能够产漆酶的菌株,通过测定漆酶活力进行复筛,筛选出一株产漆酶活力较高的白腐茵菌株。以漆酶活性为参考指标,确定葵花粉发酵产漆酶条件：发酵培养基中硫酸铵0．025％,初始pH值5．5,接种量8％,装液量50mL,愈创木酚0．10％,培养时间7d。     

姬菇和鲍鱼菇生长期间8种胞外酶活性变化比较

以棉籽壳为培养料,采用瓶栽方法,测定了姬菇和鲍鱼菇生长期间8种胞外酶活性变化,结果表明:姬菇和鲍鱼菇均具有完整的胞外纤维素酶系;姬菇和鲍鱼菇的胞外CMC酶、FP酶和HC酶活性变化趋势大致相同,在子实体生长发育期均有酶活性高峰出现;姬菇和鲍鱼菇的胞外漆酶、过氧化物酶、淀粉酶、果胶酶和β-葡萄糖苷酶活性变化趋势不同;姬菇的胞外漆酶与过氧化物酶在茵丝生长期活性较高,鲍鱼菇的胞外淀粉酶和果胶酶在原基期有高峰出现.     

孢薪菇漆酶的提取及其理化性质

从孢薪菇（Coprinus coimtav）、金针菇（Flammulina velutipes）、平菇（Pleurotus sapidus）、茶薪菇（Agrocybe cylindracea）、黑木耳（Hirneola auricular-judae）和香菇（Lentinula edodes）子实体中提取漆酶，用分光光度法测定酶活，筛选出漆酶酶活最高的孢薪菇。实验结果表明，孢薪菇漆酶是一种对热较稳定的高温酶，其最适pH3.0，最适温度60℃；Pb^2 、K^ 对酶活有较大的激活作用，而Fe^3 、Fe^2 则对酶活有较强的抑制作用。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶菌株的筛选

采用牛津杯平板透明圈法对研究室保藏的17株黑曲霉菌株进行了β-葡萄糖苷酶产生菌初筛,得到5株透明圈相对明显的菌株,经固态发酵产酶复筛及相关纤维素酶活力的检测,选出一株β-葡萄糖苷酶酶活力高、且纤维素酶活力也较高的菌株niger-2,其β-葡萄糖苷酶酶活力为78.75 U/g、纤维素酶(CMC)活力为312.15 U/g...     

灭活酵母细胞原生质体融合技术的研究

报道了将单一亲株灭活的原生质体融合方法.融合体细胞形态大小、同化和发酵淀粉的能力均与双亲株不同,多数融合体的DNA含量是二亲株之和,推测为三倍体.融合体的细胞生物量比亲株高,发酵酒精能力增强,具有一定的生产应用价值.     

云芝漆酶理化性质及动力学研究

主要研究pH值、金属离子、温度对云芝漆酶活性和稳定性的影响,以及该酶底物浓度效应和Km值测定.实验结果表明:Cu2+、Co2+对漆酶有激活作用,而Ag+则有抑制作用;该酶最适pH为4.8,在pH4~4.8表现出较强的稳定性;最适反应温度为40℃,低于50℃时有较好的热稳定性;Km值为4.2×10-3mol/L.     

短小芽孢杆菌LC01的鉴定及其芽孢漆酶性质的研究

【目的】对前期获得的1株具有较高漆酶活性的细菌菌株LC01进行鉴定及相关酶学性质研究,以开发具有较好工业应用特性的细菌漆酶。【方法】通过形态观察和生理生化实验,结合16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,测定其芽孢漆酶在不同条件下的催化性质及染料降解能力。【结果】经鉴定菌株LC01为短小芽孢杆菌,该菌株的芽孢漆酶氧化底物2,2'-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)、丁香醛连氮和2,6-二甲氧基苯酚的最适pH分别为3.0、6.6和8.6,以丁香醛连氮为底物的最适催化温度为80 ℃,在pH 9.0放置10 d或50 ℃处理10 h后均有较高活性。在pH 9.0时,芽孢漆酶-介体系统能有效脱色不同结构的染料。对染料活性黑5和靛红反应1 h后脱色率达90%以上,对RB亮蓝的脱色6 h后也达到了90%。【结论】短小芽孢杆菌LC01的芽孢漆酶能有效脱色染料且在碱性和高温条件下具有良好稳定性,表明其在多种工业领域具有较好的应用前景。     

一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及其酶学特性研究

 采用CMC平板筛选和刚果红染色等方法,从湖南科技大学校园腐烂木芙蓉根部土壤中分离1株产纤维素酶菌株CXB001,经生理生化测试、16S rDNA分子进化树分析,鉴定菌株为Bacillus velezensis。对该菌株的生物特性研究表明,其最适生长温度为37 ℃,在10~50 ℃,pH 5.0 ~11.0中能生长,在pH 6.0~9.0,34~40 ℃,1.5% ~3.5% NaCl 的培养条件下,最适产酶。CXB001所产纤维素酶最适反应温度为50 ℃,最适反应pH为5.0;在20 ℃、pH 5.0~ 7.0具有较好的稳定性。Co ²⁺对纤维素酶具有激活作用,Mg²⁺,Fe²⁺对纤维素酶具有抑制作用。     

不同来源重组漆酶的酶学特性

以来源于变色栓菌的同工酶LacA、LacB、LacC,杂色云芝的同工酶Lcc1、Lcc2,以及细菌ARA等6种重组漆酶为研究对象,比较了它们的最适反应温度、最适反应pH、温度稳定性、pH稳定性、动力学常数K_m,以及Cu²⁺对漆酶酶活的影响等酶学特性。结果表明:以邻联甲苯胺为底物时,LacA、LacB、LacC、Lcc1、Lcc2、ARA的最适反应温度分别为60、60、70、60、55和75 ℃; 以愈创木酚为底物时,6种漆酶的最适反应pH分别为5.0、5.0、4.5、5.0、4.5、7.0。LacA在催化ABTS、愈创木酚、邻联甲苯胺、丁香醛连氮以及2,6-二甲基苯酚时,其最适反应温度分别为55、70、60、20、65 ℃。此外,真菌漆酶在30～60 ℃,pH为2.5～7.0范围内都有较好的稳定性,细菌来源的漆酶在80 ℃下保持60 min,在pH=7.0时保持6 h仍具有较高的酶活力。Cu²⁺对细菌漆酶的激活作用要明显高于真菌漆酶。同时,以ABTS为底物时,K_m值最小,且不同来源漆酶的K_m值相差不大。因此,6种不同来源的重组漆酶在催化同一种底物时,酶学特性存在着差异性,同一种重组漆酶在催化不同底物时,其酶学特性也有较大差异。     

高温胁迫下葡匐翦股颖耐热突变体“粤选1号”能量水平研究

研究草坪草匍匐翦股颖耐热突变体“粤选1号”在高温胁迫下光反应的能量供应对光合作用暗反应的影响,结果表明:高温胁迫导致亲本叶片的光合速率、光合放氧速率、叶绿体ATPase活性、叶片ATP和ADP含量及其能荷值迅速下降, 而“粤选1号”在整个高温胁迫中,保持着较高的光合速率、光合放氧速率和ATPase活性,维持着较高的ATP和ADP含量及能荷值.表明“粤选1号”耐热性获得可能与“粤选1号”具有更多的能量供应有关.     

固定化漆酶在染料脱色中的应用

为了使解淀粉芽孢杆菌LC03的芽孢漆酶对染料废水有更好的脱色作用,将其固定于海藻酸钙的凝胶中,测定其最适温度和最适pH及操作稳定性,并对RBBR、靛红(IC)、活性黑(RB5)、结晶紫(CV)等4种单染料进行脱色; 通过加入漆酶介体,研究固定化漆酶-介体系统对单染料及模拟染料废水脱色的影响。结果表明:固定化漆酶最适温度65 ℃,最适pH为6.2,重复利用10次酶活还在80%以上; 固定化小球对染料CV脱色作用尤为明显,脱色1 h后脱色率就达到80%以上,对其他3种染料也有一定的脱色作用; 漆酶介体对染料的脱色均有促进作用,对染料IC、RBBR和RB5的促进作用尤为明显,且随着介体浓度的升高脱色率增大; 固定化小球提高了漆酶的重复利用率,增加了漆酶的稳定性,在酸性、碱性、中性条件下,对单染料和模拟染料废水都有很好的脱色效果。     

好氧堆肥中高温纤维素分解菌的筛选及性状研究

从规模化好氧堆肥的高温阶段筛选获得6株具有较高纤维素降解能力的高温菌。这些菌株的生长速率、温度稳定性以及纤维素酶活性检测结果表明,它们能在45～65℃的温度下生长,最适生长温度为50～60℃;在普通细菌培养基和以羧甲基纤维素钠（CMC）为唯一碳源的限制性培养基上均能够快速启动并旺盛生长,分别在培养14h和36h左右达到最大活菌数。纤维素酶活性检测结果表明,获得的菌株均具有较高的 C_x 酶活和滤纸崩解能力,能够在2～3d内快速启动滤纸条崩解,并显著降低滤纸条中纤维素含量。     

固定化漆酶催化去除水中2,4-二氯苯酚

采用壳聚糖固定化漆酶催化去除水中的2,4－二氯苯酚,探讨了影响反应的不同因素,并与自由漆酶催化反应的条件进行了对比。结果表明,固定酶催化降解反应的最佳pH值在5.5左右,相对于自由漆酶,其最适pH 值向酸性偏移;降解反应的最适温度范围在30～45 ℃之间,较自由漆酶的反应温度范围增大;载体壳聚糖的吸附作用对降解反应和氯酚的去除率影响不大,氯酚的去除主要是漆酶催化氧化反应的结果;连续重复使用固定化漆酶去除模拟废水中的2,4-DCP,在重复操作6次之后,其降解效率仍能保持60%以上。     

重组血红密孔菌漆酶在染料脱色中的应用

为考察由毕赤酵母表达的重组血红密孔菌漆酶对染料的脱色能力,采用单因素分析方法研究了不同条件下重组漆酶对活性亮蓝、活性黑以及靛红这3种典型合成染料的脱色情况,并且利用优化后的反应条件对由3种染料组成的混合染料进行了脱色处理。结果表明:在无介体时重组漆酶对染料的脱色效果较差,3种染料中丁香醛是促进重组漆酶脱色的最适介体,重组漆酶介体系统对单染料的脱色最适pH为5.0,温度为50 ℃; 在最优反应条件下,重组漆酶对混合染料的脱色率达93%,表明该重组漆酶在染料废水处理中具有较好的应用前景。