Se-scFv-B3对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

用H2O2损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型,考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H2O2诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响.结果表明,Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,恢复线粒体膜电位,下调Caspase-3活力并降低细胞内活性氧的含量.表明Se-scFv-B3可以保护心肌细胞抵制H2O2诱导的氧化应激损伤.     

Se-scFv-B3对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

用H₂O₂损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型, 考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H₂O₂诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响. 结果表明, Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率, 减少细胞凋亡, 恢复线粒体膜电位, 下调Caspase-3活力并降低细胞内活性氧的含量. 表明Se-scFv-B3可以保护心肌细胞抵制H₂O₂诱导的氧化应激损伤.     

白藜芦醇对大鼠急性脊髓损伤后MPO和NOS活性的影响

为探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织中髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,将120只SD大鼠随机区组分成4组:假手术组、损伤组、白藜芦醇(Res)组和甲基强的松龙(MPSS)组.假手术组切除椎板但不损伤脊髓,术后腹腔注射等量生理盐水,其余三组采用Allen's法以10 g×5 cm制作大鼠脊髓损伤模型,术后立即分别给予等量生理盐水Res(100 mg/kg)和MPSS(100 mg/kg)腹腔注射.术后8 h、12 h、24 h、72 h、168 h取损伤脊髓标本,利用分光光度计测定MPO,NOS吸光度来检测其活性变化.结果SCI后脊髓组织中各时间点MPO和NOS活性均增加(P<0.01),损伤后3 d达高峰;Res组和MPSS组在伤后各时间点MPO和NOS活性均小于损伤组(P<0.05);Res组和MPSS组比较,72 h、168 h时间点MPO活性无统计学意义;24 h、72 h、168 h时间点NOS活性无统计学意义.说明白藜芦醇能抑制脊髓损伤后中性粒细胞浸润,抑制NOS的活性,减轻继发性脊髓损伤,对SCI具有保护和治疗作用.     

雌激素对缺氧/复氧心肌钙离子的影响

雌激素对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,但其保护机制尚未完全阐明.缺氧/复氧可引起心肌细胞损伤,其中发生钙超载是心肌损伤的一个重要因素.进行了雌激素对缺氧/复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响研究.结果显示:心肌细胞缺氧/复氧后细胞内钙离子浓度明显升高,呈复氧时间依赖性增加.雌激素有抑制缺氧/复氧心肌细胞内钙离子浓度升高...     

非心肌细胞对心肌细胞损伤的修复功能

制备Spraque-Dawley乳鼠心肌细胞悬液,其中约有40%属于非心肌细胞,统称为非心肌细胞.在离体培养的条件下,采用化学与物理因子对心肌细胞造成人工损伤,发现非心肌细胞对心肌细胞的损伤具有修复作用.     

香青兰总黄酮抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用的研究

为研究香青兰总黄酮对体外培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。采用体外原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R损伤模型,实验分为正常组、模型组、香青兰总黄酮高、中、低剂量组及丹参滴丸阳性药物对照组。采用MTT法测定香青兰总黄酮对心肌细胞的毒性作用;比色法测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量;HE染色法检测细胞形态;免疫组化法测定Bcl-2、Bax蛋白表达。结果表明,香青兰总黄酮各给药组均能降低心肌细胞损伤程度,与模型组比较,香青兰总黄酮高、中剂量组均能够明显降低MDA含量(P0.01,P0.05),降低LDH释放量(P0.01,P0.05),增加Bcl-2表达,减少Bax表达;香青兰总黄酮高剂量组可以提高SOD活性(P0.01),降低CK释放量(P0.05)。香青兰总黄酮对大鼠心肌细胞H/R损伤有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基和调节凋亡蛋白的表达有关。     

piRNA-102526参与缺氧/复氧诱导心肌细胞焦亡作用及机制研究

为探究piRNA-102526与心肌细胞焦亡的关系，体外构建小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧模型，设置3 h、6 h、9 h、12 h、24 h缺氧时间梯度及6 h复氧条件，检测小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡水平。利用qRT-PCR检测piRNA-102526表达水平，Western Blotting检测焦亡相关蛋白(GSDMD、Caspase-1、IL-1β、ASC)表达，PI染色和LDH活性检测细胞死亡。研究结果显示，小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧6 h/复氧6 h,细胞焦亡相关蛋白表达水平最高。抑制piRNA-102526表达，小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡加剧，过表达piRNA-102526,小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡减少。这表明，piRNA-102526能通过Caspase-1参与经典焦亡通路，调节小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡过程。     

FGF-2对大鼠心肌细胞保护作用的机制

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)在内质网(ER)应激中对心肌的保护作用.方法:建立SD大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,使用衣霉素(TM)建立SD大鼠心肌细胞内质网应激模型.观察对照组与FGF-2及牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)治疗组细胞凋亡情况,并使用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组心肌细胞活力.Western blot和实时荧光定量核酸扩增(q-RTPCR)检测各组内质网应激相关分子的表达.结果:缺氧/复氧可引起心肌细胞内质网应激增加,与缺氧/复氧组相比,FGF-2预处理组及TUDCA预处理组内质网应激减弱;FGF-2和TUDCA均能改善缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡及活力减弱;FGF-2能够抑制TM诱导的内质网应激;与TM处理组相比,FGF-2预处理组心肌细胞凋亡减弱,细胞活力改善.结论:缺氧/复氧及TM均可以通过内质网应激诱导心肌细胞损伤,而FGF-2可以通过抑制内质网应激而保护心肌细胞.     

非心肌细胞对心肌细胞损伤的修复功能

制备Spraque-Dawley乳鼠心肌细胞悬液,其中约有40％属于非心肌细胞,统称为非心肌细胞。在离体培养的条件下,采用化学与物理因子对心肌细胞造成人工损伤,发现非心肌细胞对心肌细胞的损伤具有修复作用。     

非心肌细胞对受损心肌细胞LDH的影响

当心肌细胞受到损伤的时候,心肌酶——LDH(乳酸脱氢酶)会从细胞中泄漏出来。其受损程度越强,泄漏量也越大。作者曾发现心脏的非心肌细胞,对心肌细胞的损伤有明显的保护作用。为此,本文通过对心肌细胞、非心肌细胞以及混合细胞的培养液,分别进行连续的测定,发现当心肌细胞受到损伤的时候,非心肌细胞能使心肌细胞LDH的泄漏量明显地降低,从而证实了非心肌细胞对心肌细胞具有保护作用。实验方法 1.细胞悬液制备取出生2～3天的S.D乳鼠,剪成1～2mm~3组织块,以D-Hanks液洗涤,加入0.1％胰蛋白酶(Difco)液。在37℃的条件下用磁力搅拌,连续消化7次,每次15分钟,将后6次的消化液离心,1000 rpm 10分     

大脑皮质微血管内皮细胞培养及其缺氧性损害模型

建立改良的体外培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞缺氧模型．取1～5d Wistar乳鼠脑皮质获得的脑微血管内皮细胞（BMEC）进行体外培养，缺氧组置入一个经改造的保鲜盒内，密闭并通入混合气体（95％N2和5％CO2）12h，检测缺氧细胞的形态结构、细胞死亡率及培养液中乳酸脱氢酶漏出量．结果显示缺氧BMEC形态结构损伤，细胞死亡率增加，细胞乳酸脱氢酶漏出量显著增加（p〈0．01）．该模型可使脑血管内皮细胞受到损伤，证实该模型具有一定的可靠性、操作简便，可重复性强，为体外研究脑血管疾病提供帮助．     

低氧对食管癌ECa9706细胞生长及顺铂敏感性的影响

着重探讨低氧对食管癌ECa9706细胞生长及顺铂敏感性的影响.ECa9706细胞分别培养于顺铂干预的常氧和低氧(1%O2)环境下,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,流式细胞法检测细胞凋亡和细胞周期.结果显示:与常氧环境下培养相比,低氧下细胞形态变长、变大,细胞自第7d后生长缓慢.常氧下顺铂作用细胞48h的IC50为(1.180±0.056)μM,低氧下为(2.675±0.063)μM.培养48h后,常氧对照组及常氧高浓度顺铂组(1.18μM)阻滞细胞周期于G1期,低氧下各组细胞周期阻滞于S期.低氧导致顺铂诱导的细胞凋亡率较常氧下降低.表明:低氧环境影响了细胞的形态、增殖及细胞周期,低氧下细胞对顺铂的细胞毒作用敏感性降低.     

用大鼠心肌条件培养基建立来源于C57BL/6J小鼠的ES细胞系

报道一种新的建立C57BL/6J小鼠ES细胞系的方法。采用大鼠心肌条件培养基,在不使用饲养层细胞和白血病抑制因子(LIF)的情况下,从C57BL/6J品系小鼠中建成1个ES细胞系即MESPU 41,成系率为1.0%。MESPU 41细胞为XX型,核型正常率高达89%,表现出XX型ES细胞系少有的稳定性。进行体内分化实验时MESPU 41细胞能发生广泛分化形成畸胎瘤。嵌合体制作实验证实MESPU 41细胞具有嵌合能力,能参与胚胎的发育。采用RT-PCR方法,检测出大鼠心肌细胞有LIF mRNA的表达,这可能与其条件培养基保持ES细胞未分化状态并使X染色体稳定有关。同时,还对大鼠心肌细胞进行了永生化的尝试,共得到了4个永生化克隆,这将进一步简化ES细胞建系和培养工作,为进一步研究ES细胞在体外培养过程中的稳定性开创了新的起点。     

糖氧剥夺对大鼠脂肪干细胞自噬和成脂的影响

目的 研究大鼠脂肪干细胞( adipose derived stem cells,ADSC)及糖氧剥夺下,细胞自噬和对诱导分化成脂的影响。 方法常规制备 ADSC, 设 置 对 照 组 ( G 组 ) 、 少 糖 组 ( SG 组 ) 、 缺 氧 组 ( G + CoCl2 组 ) 、 缺氧少糖组( SG+CoCl2 组)和自噬阳性对照组( EBSS 组) 。 设置不同培养时间,MTT 检测各组 ADSC 存活情况;Western blot 分析细胞自噬及成脂诱导油红“ O”染色与比色。 结果 不同培养时间,ADSC 细胞均可增殖。 培养 24 h,各组细胞之间无差别( P>0. 05) ,但培养 48 h 和 72 h,G 组细胞增殖明显高于其它三组( SG 组、G + CoCl2 组和 SG+CoCl2 组) ,P<0.05;Western blot 分 析, EBSS 组、G 组 和 SG 组 的自噬相关蛋白 Ⅰ 型 ( LC3-Ⅰ ) 明显弱于自噬相关蛋白Ⅱ 型( LC3-Ⅱ ) ,且 G+CoCl2 组和 SG+CoCl2 组的 LC3-Ⅰ 明显高于 EBSS 组;成脂诱导实验中,G 组油红“ O” 比色值最高,与其它组比较均有统计学差异( P<0. 05) 。 结论 ADSC 具有较强的细胞自噬作用,推测在缺糖缺氧条件下,通过抑制细胞自噬,降低 ADSC 存活率以及诱导分化成脂率。     

羟基红花黄色素A抗心肌缺血-再灌注损伤作用与钙超载相关性研究

目的通过外科手术方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抗心肌缺血-再灌注损伤作用与钙超载相关性.方法采用培养的SD大鼠心肌细胞缺氧再灌注损伤模型,实验分为5组:假手术组(Sham,1),缺血-再灌注1 h组(1 h,2),缺血-再灌注24 h组(24 h,3),缺血-再灌注1 h+HSYA组(1 h+,4),缺血-再灌注24 h+HSYA组(24 h+,5).比较缺血-再灌注大鼠心肌细胞内钙离子浓度的变化,并进行心肌细胞膜钙ATP酶MCA和SERCA的表达检测.结果与正常对照组(Sham)比较,缺血-再灌注组(1 h,24 h)细胞内钙离子浓度明显升高,且以再灌注24 h更明显(P0.05);与再灌注组(1 h,24 h)比较,HSYA治疗后组(1 h+,24h+)钙离子浓度明显降低(P0.05);1 h+和24 h+组肌浆网钙离子ATP酶SERCA表达与Sham组比较显著降低(P0.05),而与1 h和24 h组比较显著升高(P0.01).结论心肌缺血-再灌注损伤与钙超载有关,HSYA抗心肌缺血-再灌注引起的钙超载由SERCA调控,而非PMCA调控.     

心肌肽素在心肌细胞氧化应激中的作用

研究心肌肽素对过氧化氢所致心肌细胞氧应激模型中所起的作用。采用原代培养乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2 h诱导心肌细胞造成氧化应激模型,细胞损伤前分别给予不同浓度的心肌肽素进行干预。使用RT-PCR检测Caspase-3表达变化,MTT比色法检测原代乳鼠心肌细胞的活力,黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性。过氧化氢组心肌细胞活力低于对照组,超氧化物歧化酶活性下降(P<0.05),caspase-3 mRNA表达升高;心肌肽素组细胞活力、超氧化物歧化酶活性高于过氧化氢组,而caspase-3 mRNA表达水平较过氧化氢组降低(P<0.05),不同浓度心肌肽素之间无明显差别(P>0.05)。心肌肽素对过氧化氢造成的心肌细胞损伤作用有抵抗作用且这种抵抗作用与其抑制凋亡作用有关。     

黄瓜香水提物对自由基损伤心肌细胞的作用

目的观察黄瓜香水提物对自由基损伤的心肌细胞的作用.方法体外培养心肌细胞,以不同浓度的黄瓜香水提物进行干预,测定心肌细胞搏动频率及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用MTT法观察黄瓜香水提物对心肌细胞存活率的影响.结果自由基对心肌细胞造成损伤,不同浓度的黄瓜香水提物可减少LDH漏出,增加细胞存活率(P<0.05).结论黄瓜香对自由基损伤的心肌细胞具有保护作用.     

在体大鼠肝细胞内酸性磷酸酶和单胺氧化酶的超声生物效应

用频率为1.06MHz,强度为30W/cm~2的连续聚焦超声直接辐照在体大鼠肝脏3min,术后常规饲养,分别于辐照后1d、7d和15d宰杀取材,做石蜡切片和冰冻切片。观察辐照后肝细胞形态结构和酸性磷酸酶、单胺氧化酶活性变化。结果表明:辐照后的肝组织出现坏死区、重损伤区、轻损伤区,各区细胞的形态结构均发生了不同程度的变化。两种酶反应在坏死区为阴性,重损伤区呈弱阳性,轻损伤区呈强阳性,而未损伤区呈中等阳性反应。本文以此为线索,讨论了超声损伤机制和酶在肝细胞的继发性损伤和修复过程中的作用。     

重组Nkx2．5腺病毒的构建及心肌细胞感染实验

利用AdEasy腺病毒表达系统构建了Nkx2．5重组腺病毒．Nkx2．5基因克隆入pAdTrackcmv质粒,pAdTtrackcmv—Nkx2．5经Pme I线性化后转化含pAdEasy-1的BJ5183菌进行同源重组,以构建pAdEsay-Nkx2．5重组质粒．pAdEsay—Nkx2．5转染293A细胞进行病毒包装．以Ad-Nkx2．5重组腺病毒感染Hela及乳鼠心肌细胞,检测了Nkx2．5蛋白表达及对下游ANF和β-MHC基因的表达调控;并采用感染病毒的H9c2心肌细胞经H2O2处理建立细胞凋亡模型,采用噻唑蓝法和荧光染色法检测了细胞存活率和凋亡细胞的形态变化．结果显示,Nkx2．5过表达能抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡．     

ATP敏感性钾通道与心肌低氧损伤

ATP敏感性钾通道是一种受细胞内ATP浓度，NDPs，KCOs,SUs等多种因素调节启闭的钾通道。在低氧条件下，ATP敏感性钾通道被激活，引起动作电位时程缩短和细胞外钾离子蓄积，减少钙离子内流，对心肌有一定的保护作用；但过度的钾离子外流，对心肌则有损害，甚于诱发心律失常。提示：ATP敏感性钾通道的开放，可能是低氧引起心肌损伤的一种内源性机制。