不同生理状态下原生动物草丛土毛虫大核DNA的多态性比较

对草丛土毛虫（Territricha stramenticola）营养细胞大核DNA和休眠包囊大核DNA进行了RAPD比较分析．在所选用的32条随机引物中,2条没有扩增带,其余30条引物一共扩增出134条片段,以营养细胞大核DNA为模板扩增出54条片段,以休眠包囊大核DNA为模板扩增出80条片段,两者有20条共享片段,共享度为30％．结果表明：草丛土毛虫在形成包囊的过程中,大核DNA的结构可能发生了较大的变化,这些变化可能与其在包囊形成过程中的形态结构和代谢活动的改变以及休眠状态下生理活动的改变密切相关．     

包囊游仆虫休眠细胞中大核和线粒体DNA的多态性

为了探索纤毛虫休眠细胞中两套遗传系统的作用特征，对包囊游仆虫（Euplotes encysticus）休眠细胞与营养细胞大核DNA和线粒体DNA进行了RAPD比较.结果显示，在所选用的35条随机引物中，包囊游仆虫大核DNA共扩增出220条片段，其中以休眠细胞大核DNA为模板扩增出18条特有片段，以营养细胞大核DNA为模板扩增出44条特有片段，两者存在28%的差异.在所选用的32条随机引物中，线粒体DNA共扩增出154条片段，其中以休眠细胞线粒体DNA为模板扩增出19条特有片段，以营养细胞线粒体DNA为模板扩增出25条特有片段，两者有29%的差异.这些结果表明，包囊游仆虫休眠细胞与营养细胞的大核DNA结构存着一定的差异；两者的线粒体DNA结构也存在差异.因此，包囊游仆虫在休眠细胞形成过程中，大核DNA、线粒体DNA结构可能都发生了一定的变化，并且这些变化可能与休眠细胞形成过程中的形态结构和代谢活动等剧烈变化以及休眠状态下的生理生化变化密切相关.所得结果为揭示纤毛虫细胞结构的分化与细胞遗传物质的作用关系提供了基础资料.     

从微量血中快速制备线粒体DNA片段

目的　建立并鉴定用于从微量血中快速制备线粒体DNA片段的技术 .方法　采用微量血样品 ,改进提取线粒体DNA的方法 ;以不同的方法提取的血DNA为模板 ,同时扩增nDNA上的基因片段和mtDNA上的基因片段 ,PCR相对定量分析比较各种方法提取的mtDNA片段的纯度 ;结果　用华美公司生产的ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和作者的方法都得到了mtDNA ,而用作者的方法获得的mtDNA的纯度较高 ;结论　由于线粒体DNA与核DNA存在有同源片段 ,ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和常规酶解法提取DNA不适合用于对mtDNA的鉴定 ,作者的方法简便快捷地排除了核DNA的污染 ,非常适合于对mtDNA进行PCR分析 .     

应用RAPD技术构建绞股蓝DNA指纹图谱

以不同类型绞股蓝(Gynostemma Pentaphyllum,(Thunb)Makino)DNA为模板,进行RAPD反应条件的优化及RAPD结果分析.最终筛选的RAPD反应条件为:20μL PCR反应体系中包括了10×buffer2.0μL,Mg2 2.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,引物0.5 mmol/L,Taq酶1U,模板DNA 50 ng.反应程序为94℃3 min→(94℃30 s→38℃40 s→72℃1 min)45个循环→72℃10min→4℃保持,并从66条随机引物中筛选出5条带型丰富、适合于绞股蓝分析的随机引物.以这5条随机引物对不同类型绞股蓝进行RAPD扩增,识别其特征性多态位点,建立分子标记检索表.     

水稻光温敏雄性不育基因连锁标记的分离与鉴定

两系法杂交稻是一种利用水稻杂种优势的重要途径，主要依据水稻光温敏雄性不育系在不同条件下的育性转换用于配制杂交种．以培矮64S(PTGMS)与明恢63杂种自交的F2代为供试材料，采用随机放大多态性DNA(RAPD)技术分离与培矮64S的PTGMS基因连锁的分子标记．在F2代2个分别代表可育和不育的群体以及亲本株系中，采用100个RAPD引物扩放基因组DNA筛选多态性DNA片段．RAPD引物S8产生的DNA片段中，除重复顺序外，有一个长度为0．85kb片段为单拷贝．分子杂交表明，这一单拷贝标记与培矮64S的PTGMS基因连锁．     

龙眼基因组DNA提取及RAPD反应体系优化的研究

采用改良CTAB法提取龙眼幼叶基因组DNA,并以其为模板对影响RAPD扩增反应的主要因子采用单因素递进分析方法进行优化,建立了龙眼基因组DNA最佳RAPD反应体系,即在25μL的反应体积中,含20 ng模板, 1．0 U Taq DNA聚合酶,2．0 mmol／L MgCl2,各0．20 mmol／L dNTP,0．20μmol／L引物．     

应用RAPD和AFLP标记的方法对甜(辣)椒和番茄品种的多态性分析

应用RAPD和AFLP的DNA指纹图谱方法分析25个甜(辣)椒和22个番茄品种的真实性,并进一步比较RAPD和AFLP的DNA指纹图谱在鉴定亲缘关系较近的品种之间的真实性时的有效性。对于甜(辣)椒品种,AFLP方法中,2个引物组合扩增反应的多态性片段即能将25个品种完全分开。虽然,每个样品的AFLP的扩增产物中多态性片段的百分率为9％,低于RAPD的35％多态性片段的百分率。但是,AFLP的信息量远远大于RAPD的信息量,它的每对引物组合扩增的平均多态标记为5．1,而RAPD仅为2．2。所以,在甜(辣)椒的指纹图谱中,AFLP的有效率是RAPD的2倍。对于番茄品种,每个样品的AFLP的扩增产物中多态性片段的百分率为5．5％,大大低于RAPD的单引物61％多态性片段和双引物58％多态性片段的百分率。它的每对引物组合扩增反应的平均多态标记为2．6,而RAPD中,单引物扩增的平均多态标记为4．2,双引物扩增的平均多态标记为4．4。一个单引物和一个双引物的RAPD扩增反应的多态性片段即能将22个番茄品种中的21个完全分开。所以,在番茄的指纹图谱中,RAPD的有效率是AFLP的2倍。因此,在应用分子标记辅助鉴定品种的真实性时,不同的作物所适用的方法是不同的。     

RAPD技术在绿脓杆菌DNA分析中的应用

RAPD技术是近几年发展起来的克隆识别技术,以一条含17个碱基的随机引物对10株绿脓杆菌的DNA进行PCR扩增,经电泳,得到了8种DNA指纹图谱,重复实验,结果稳定,证明该技术适用于DNA多态性分析及分子流行病学研究。     

籼型光敏核不育水稻的RAPD分析

以籼型光敏核不育水稻８９０２ｓ及其可育近等基因系材料８９０２的核ＤＮＡ为模板，进行ＲＡＰＤ分析，从检测过的１５个引物中发现引物ＯＰＡ－０４在可育品系和不育品系中扩增出１个１０００ｂｐ的差异带，并初步认为此差异与育性相关     

黄瓜随机扩增多态DNA(RAPD)研究初报

以异丙醇沉淀法提取的10个黄瓜亲本叶片的总DNA为模板,进行28个10-mer随机引物的RAPD分析,共产生252条带,其中10个引物共产生出21条多态性带,其它18个引物无多态性指纹     

Mitochondrial DNA analysis of Bronze Age horses recovered from Chifeng region, Inner Mongolia, China

In this study, mitochondrial DNA (mtDNA) analysis was carried out on 9 Bronze Age horses recovered from Dashanqian and Jinggouzi archaeological sites in Chifeng region, Inner Mongolia. China to explore the origin of Chinese domestic horses. Both mtDNA 16S rRNA gene and control region (D-loop) fragments of ancient horses were amplified and sequenced. The analysis of the highly conservative 16S rRNA gene sequences indicated that the burial environment of Chifeng region is suitable for the preservation of ancient DNA (aDNA). Combing 465 mtDNA D-loop sequences representing different breeds from East Asia, Central Asia, Near East and Europe, we constructed a phylogenetic network to investigate the relationship between ancient and modern horses. The phylogenetic network showed that the 9 horses were distributed into different modern horse clusters which were closely related to them representing a certain geographical distribution. Our results showed that the maternal genetic line of the ancient horses in Chifeng region was highly diversified, which contributed to the gene pool of modern domestic horses and suggested a complex origin of domestic horses in China.     

Mitochondrial DNA analysis of Bronze Age horses recovered from Chifeng region, Inner Mongolia, China

In this study, mitochondrial DNA (mtDNA) analysis was carried out on 9 Bronze Age horses recovered from Dashanqian and Jinggouzi archaeological sites in Chifeng region, Inner Mongolia. China to explore the origin of Chinese domestic horses. Both mtDNA 16S rRNA gene and control region (D-loop) fragments of ancient horses were amplified and sequenced. The analysis of the highly conservative 16S rRNA gene sequences indicated that the burial environment of Chifeng region is suitable for the preservation of ancient DNA (aDNA). Combing 465 mtDNA D-loop sequences representing different breeds from East Asia, Central Asia, Near East and Europe, we constructed a phylogenetic network to investigate the relationship between ancient and modern horses. The phylogenetic network showed that the 9 horses were distributed into different modern horse clusters which were closely related to them representing a certain geographical distribution. Our results showed that the maternal genetic line of the ancient horses in Chifeng region was highly diversified, which contributed to the gene pool of modern domestic horses and suggested a complex origin of domestic horses in China.     

红莲型水稻不育系与保持系线粒体DNA酶切分析

为研究红莲型水稻细胞质雄性不育的分子基础，我们提取纯化了红莲型水稻丛广４１Ａ和丛广４１Ｂ的线粒体ＤＮＡ，采用限制性内切酶酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）方法比较了红莲型不育系和保持系线粒体ＤＮＡ酶切图谱，发现两者之间存在一定的差异，部分支持了细胞质雄性不育与线粒体ＤＮＡ有关的结论。     

冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA的比较

为研究纤毛虫休眠状态下线粒体的行为特征及功能与纤毛虫形成包裹的关系，采用RAPD 技术对冠突伪尾柱虫休眠与营养细胞线粒体DNA进行了比较。结果表明，在选用的15条随机引物中，有5条引物的扩增产物完全相同，其余10条引物的扩增产物各有差异。15条引物共扩增出84条片段，其中共享片段为28条，共享度为66.7％。这说明休眠细胞线粒体DNA 与营养细胞线粒体在很大程度上是一致的，但仍存在一定差异，据此推测细胞在形成包囊的过程中，某些线粒体DNA结构可能发生了改变，这些改变可能与线粒体在包囊内的行为特征及功能有关。     

5种白蚁基因组DNA随机扩增多态性研究

采用RAPD（Random amplified polymorphic DNA)技术对尖唇异白蚁（Heterotermes aculabialis)、黄肢散白蚁（Reticulitermes flaviceps)、扩头散白蚁（R.ampliceps)、细颚木鼻白蚁（Stylotermes angustignathus)和陇南树白蚁（Glyptotermes longnanensis)等5种白蚁的基因组DNA多态性进行了初步分析。在所用的20个随机引物中有4个引物能扩增出稳定的带型,5种白蚁6个群体共扩增出43条带,均为多态性片段;同一种类不同群体和同一群体不同品级间存在一定程度的多态性,但种间扩增片段差异显著大于种内差异。以UPGMA方法将扩增片段分布和共享度数据矩阵进行聚类分析,所得结果支持我国异白蚁属与散白蚁属合并的观点。     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系,应用RAPD技术,从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点,并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

6种接骨木DNA条形码分析

由于接骨木属植物种间变异小,性状不稳定等原因,其分类一直难以确定.以6种接骨木属植物的总DNA为模板,利用PCR技术扩增8个DNA条形码片段,并进行序列分析.结果表明:接骨木属叶绿体基因来源的条形码rbc L,rpo C1,Mat K,Rpo B,ycf 5序列完全一致,为高度保守序列;psb A-trn H序列虽然进化较快,但其测序结果准确性差,不适于接骨木品种鉴别.6种接骨木核基因来源的ITS条形码进化上也较为保守,根据该条形码可将接骨木区分为2类.核基因来源的ITS2条形码的扩增效率高,种间区分效果好,是较合适的接骨木属植物分子标记之一.应用ITS2条形码可将6种接骨木区分为4类:接骨木;宽叶接骨木;毛接骨木;东北接骨木、钩齿接骨木和朝鲜接骨木.     

凤尾菇线粒体DNA片段的克隆与同源性分析

将Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切的凤尾菇线粒体ＤＮＡ插入质粒载体的ｐＢＳ＾＋的ＢａｍＨＩ位点，然后以凤尾基线粒体ＤＮＡ为探针与重组质粒ＤＮＡ进行斑点杂交，筛选到６个阳性克隆，选取其中２个阳性克隆的插入片段分别与来６个属的１３个食用菌品种的线粒体ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，其结果显示两探针能与所有测定的侧耳属品种的线粒体ＤＮＡ杂交，并具多态性，但与其它属线粒体ＤＮＡ只有不同程度的杂交，两探针中Ｈ４的杂交范     

白菜型油菜核育性相关基因片段的克隆与序列分析

通过ＲＡＰＤ标记,所获得的与育性基因紧密连锁的基因片段进行克隆与序列分析,结果表明,该育性基因片段为与油菜小孢子发育早期ＢＰ４调控基因５８％同源,并含有一ＭＡＰＤＳ盒高度同源的保邓列。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明该基因为单拷贝基因。