大蒜种质资源遗传多样性的分子标记研究

本研究利用RAPD和ISSR两种分子标记技术．对中国10个不同地区的大蒜品种进行了种质资源遗传多样性研究．从30个RAPD引物当中．筛选出11个具有多态性的引物．共扩增出多态性带224条．多态性条带比率为41．18％．从12个ISSR引物中筛选出5个具多态性的ISSR引物．共扩增出多态性带121条．多态性条带比率为50．21％．对RAPD和ISSR两种标记分别运用Nei指数法．计算出10个大蒜品种的平均遗传距离为0．28和0．32．根据这两种标记的结果．采用UPGMA进行聚类分析，得到与生物学分类地位基本一致的结果．结果表明，在实验稳定性上．ISSR优于RAPD．且ISSR比RAPD能检测到更多的遗传变异．RAPD和ISSR两种标记可用于大蒜种质遗传多样性的研究．     

湘扁豆系列RAPD指纹图谱的构建

采用RAPD标记技术对在湖南省主要种植的湘扁豆系列和地方共11个扁豆品种构建指纹图谱,在种子检验中用于鉴别种子真伪,从48条引物中筛选出多态性好、带型稳定的引物12条,检出等位基因17个,片段大小约在100bp至3000bp之间,并利用其中三条引物结果的扩增,建立了湘扁豆系列品种的RAPD指纹图谱及相应的数字指纹,可以区别各个品种．     

松属树种种苗鉴定中AFLP指纹技术的研究

AFLP(扩增片段长度多态性)标记技术是高效而可靠的标记技术之一，特别对于那些基因组序列信息很少的物种更为有效。笔对基因组较大的松属树种的AFLP实验程序进行了优化，提供了松树树种AFLP分析中DNA酶切、引物连接、预扩增及选择性扩增的优化实验程序。结果显示．预扩增反应中利用选择碱基数不同的预扩增引物(E/M 1，E／M-2)制备的模板对后续的选择性扩增结果没有显影响；在选择性扩增反应中，对碱基数目选择进行了细致的优化．分别测试了15个E-3M-3引物组合，6个E 4/M 3引物组合及15个E 3/M 4引物组合。对于有相同选择碱基数的引物．扩增结果随选择碱基的组合不同而有较大差异。据总的扩增结果发现，选择碱基增加时．扩增谱带数明显减少，谱带清晰度增加，即当选择碱基增加到E引物末端时(M十4／E 3)，大多数引物组合的扩增谱带数要比选择碱基增加到M引物末端(E 3/M 4)的引物组合扩出的谱带数少且带型清晰。总体来看，E 4/M 3的引物组合比较适合于松属树种的AFLP分析。笔还利用单株树种子的胚乳组织对AFLP标记的遗传方式进行了研究，在所用的两个引物组合获得的标记中，约有30％左右的分离标记．分离标记中偏分离比例约为6％。另外．选用3个松属树种对选出的14个AFLP引物组合进行的验证显示，这些组合在不同种间均获得了较好的扩增结果．说明在不同松属树种中筛选出的引物组合可以为其它松属树种AFLP分析引物组合的选择提供借鉴。     

我国部分家鸭和野鸭遗传多样性及亲缘关系的AFLP分析

利用AFLP技术分析我国8种常见家鸭和2种野鸭基因组DNA的多态性，在选取的17对引物中，有9对能得到重复性好的多态性扩增条带．每对引物扩增带数在44-83之间．共得到513个标记位点，其中498个为多态位点，多态位点比率达97．1％；根据AFLP图谱计算了不同样品间的遗传距离（D）和相似性系数（GS）．家鸭品种间的遗传距离在0．331～0．589范围内，绿头鸭、斑嘴鸭与家鸭品种（系）间的遗传距离分别在0．298～0．520和0．316～0．522之间．方差分析表明两组数据不存在显著差异（p〉0．05），由此得知绿头鸭和斑嘴鸭在家鸭品种的形成过程中都作出了贡献．并根据D值绘制了它们的聚类图谱．     

桂花品种的ISSR-PCR分析

利用ISSR—PCR方法对桂花的54个品种进行了基因组多态性分析,从70个ISSR引物中筛选出13个多态性引物用于正式扩增,共扩增出90条DNA片段,其中多态性DNA带79条,占总扩增片段的87.8％,平均每个引物扩增的DNA带的数目为6.92条。依据扩增结果,应用RAPD Distans软件进行Nei相似性系数和遗传距离计算,利用UPGMA法构建聚类树状图。结果表明:ISSR分析中产生了一些品种特有的指纹图谱,因此ISSR技术在桂花品种和品种群(品系)的鉴定和阐明遗传关系中有很大的应用潜力。利用DNA扩增结果进行聚类分析,把供试桂花的54个品种分为7个大类,并对品种进行了处理及种下品种群的遗传关系进行了探讨。     

桂花品种的ISSR-PCR分析

<正>利用ISSR—PCR方法对桂花的54个品种进行了基因组多态性分析,从70个ISSR引物中筛选出13个多态性引物用于正式扩增,共扩增出90条DNA片段,其中多态性DNA带79条,占总扩增片段的87.8％,平均每个引物扩增的DNA带的数目为6.92条。依据扩增结果,应用RAPD Distans软件进行Nei相似性系数和遗传距离计算,利用UPGMA法构建聚类树状图。结果表明:ISSR分析中产生了一些品种特有的指纹图谱,因此ISSR技术在桂花品种和品种群(品系)的鉴定和阐明遗传关系中有很大的应用潜力。利用DNA扩增结果进行聚类分析,把供试桂花的54个品种分为7个大类,并对品种进行了处理及种下品种群的遗传关系进行了探讨。     

RAPD 在油用向日葵自交系鉴定和遗传分析中的应用

利用RAPD标记对8个油用向日葵自交系进行了鉴定和遗传分析。从40个UBC引物中筛选出12个能产生稳定遗传多态性的引物，利用其中3个引物提供的RAPD标记可将8个自交系逐一加以鉴别。12个引物对8个自交系共扩增出41条带，其中39条（占95.1％）具有多态性，每个引物可扩增出1～7条带，平均为3.4条带。不同自交系之间的RAPD遗传距离在0.13～0.85之间，平均为0.42。按UPGMA方法可将8个自交系聚为2大类、4个亚类。     

番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆

以番茄耐冷性近等基因系为试材,从耐冷及冷敏感植株中提取DNA构建耐冷DNA池及冷敏感DNA池,采用RAPD技术,从280个随机引物中筛选出一个在两池间具有多态性的引物OPF14,用轮回亲本及回交后代的单株DNA进行验证,证明了该引物扩增出的特异性片段是一个与番茄耐冷性相连锁的RAPD标记.从琼脂糖凝胶回收OPF14扩增出的多态性条带与载体pGEMR-T-Easy连接,并转入大肠杆菌DH5-a,对克隆片段测序表明实际大小为792bp,这为转化成稳定的SCAR标记奠定了基础.     

蜡梅品种的RAPD分析

从200个随机引物中筛选出16个多态性稳定的引物,对38个蜡梅品种进行遗传多样性和亲缘关系RAPD分析.共扩增出154条DNA片段,其中,多态性DNA带98条,占总扩增片段的63.6%.应用Popgene32软件进行Nei相似性系数和遗传距离计算,并利用UPGMA法构建聚类树状图,把供试的38个蜡梅品种分为7个大类,聚类结果与形态分类结果基本一致.结果表明,RAPD标记可用于蜡梅品种鉴定和亲缘关系探讨.     

大蒜种质资源遗传多样性的分子标记研究

本研究利用RAPD和ISSR两种分子标记技术,对中国10个不同地区的大蒜品种进行了种质资源遗传多样性研究.从30个RAPD引物当中,筛选出11个具有多态性的引物,共扩增出多态性带224条,多态性条带比率为41.18%,从12个ISSR引物中筛选出5个具多态性的ISSR引物,共扩增出多态性带121条,多态性条带比率为50.21%.对RAPD和ISSR两种标记分别运用Nei指数法,计算出10个大蒜品种的平均遗传距离为0.28和0.32.根据这两种标记的结果,采用UPGMA进行聚类分析,得到与生物学分类地位基本一致的结果.结果表明,在实验稳定性上,ISSR优于RAPD,且ISSR比RAPD能检测到更多的遗传变异,RAPD和ISSR两种标记可用于大蒜种质遗传多样性的研究.     

应用RAPD技术对新疆布顿大麦遗传多样性的研究

利用RAPD分子标记，通过40条10碱基随机引流，对32份新疆布顿大麦进行了遗传多样性评价。在40个10碱基随机引物中，有22个引物（占55％）的扩增产物具有多态性，每条多态性引物能产生1－7条多态性DNA带纹。40个引物共扩增227条带，其中95条（占41．9％）具有多态性，平均每条引物能产生1．7条多态性DNA带纹。基于RAPD技术计算了32份布屯大麦间的遗传相似系数（GS）变化值为0．427－0．848，平均值为0．681，利用不完全加权算术平均数（UPGMA），采用1－GS矩阵对其进行遗传聚类，结果表明，RAPD标记将32份参试材料区分为3类（或亚类），来源于新疆北部的20份材料有17份材料（占85％）聚入Ib亚类，而第Ia亚类则主要来自于新疆中部的一些材料。研究表明，RAPD标记揭示的新疆布顿大麦间的遗传多样性与其地理来源紧密相关。     

利用RAPD标记鉴定芥菜(Brasica juncea Cos.)品种(英文)

从６０种１０ｂｐ随机引物中筛选出７种引物,对８个芥菜变种的１６个品种（每个变种有２个品种）进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）鉴定,能快速、灵敏、较为简便获得了１６个芥菜品种的基因组ＤＮＡ指纹图谱．结果表明,不同引物在１６个品种上都有其特征ＤＮＡ带,一般只有１条,少数有２条．在同１个变种的２个品种之间存在着丰富的ＲＡＰＤ标记,通过比较２个品种各自独具的ＲＡＰＤ标记,就可明确地将２个品种区分．在所用的７种引物中,没有１种能同时将８对芥菜品种全部区分开,但用２种或２种以上的引物就完全可以将８对芥菜品种全部区分开．     

宿州辣椒地方品种分子遗传多样性分析

利用优化的辣椒SRAP—PCR反应体系,研究宿州辣椒地方品种的遗传多样性．从30个引物组合中筛选出条带清晰、多态性好的15个引物组合,共扩增出62条谱带．其中,多态性谱带有40条,多态率为64．5％;不同引物扩增的条带为3～7条,谱带大小范围为100～1000bp．供试品种的遗传相似系数为0．52～1．00之间,当遗传距离D=0．52时,可将27份材料分为两大类．结果表明,宿州辣椒种质资源遗传多样性丰富．     

石刁柏雄性连锁的AFLP及SCAR标记的建立

目的:对石刁柏雌雄株基因组差异进行分析,筛选雄性或雌性连锁的分子标记.方法:利用限制性片段长度多态性技术,设计了多个引物组合,分别对石刁柏雌雄株基因组进行扩增.结果:在使用的72个引物组合中,引物组合E-AAG+M-CAT从雄性基因组中扩增出了一个雄性连锁的标记(MLDA555),该序列长度为555bp,AT含量为59%.Blast检索未发现相似序列.根据该片段序列设计的引物将该标记转化为雄性连锁的大小为523bp的稳定的SCAR标记,经过不同基因型雄性个体的验证证明该标记广泛存在于不同基因型石刁柏雄性个体中.结论:通过AFLP扩增筛选得到了石刁柏雄性连锁的AFLP和SCAR标记,为石刁柏性别决定机制的理解及石刁柏的分子标记辅助育种提供理论资料和技术支持.     

怀地黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析

采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个,分别对16个单株基因组DNA进行PCR扩增.3个RAPD引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%.2个ISSR引物共扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%.结果表明,怀地黄85-5品种内存在遗传差异,但遗传多样性比地黄品种间的低.     

家兔RAPD图谱及双引物的运用研究

运用单引物获得了较理想的五个家兔个体的ＲＡＰＤ图谱，并探讨了双引物的运用。结果表明：ＲＡＰＤ可用于家兔品种（系）鉴定，具有较大运用潜力。双引物能比单引物扩增出更多的具有多态性的条带，双引物的运用是提高多态性的有效而且很经济的手段。     

马氏珠母贝与解氏珠母贝的随机扩增多态DNA分析

用OPM组20种碱基随机引物对采自海南洋浦的马氏珠母贝（Pincada martensii）和解氏珠母贝（P.chemmitri）天然群体进行RAPD分析,其中6种引物扩增有效,这6种引物对马氏珠母贝和解氏珠母贝的总扩增带数分别为52条和58条。每一引物的扩增带数为3～16条,同一引物对两种贝类的扩增带数不同（OPM19B除外）,对两贝类的扩增带型也有较大差异。群体内的各个个体（实验个体为10个）RAPD扩增带谱全部呈多态,表明在同一群体中,各个体存在着明显的个体特征带,由于样品数量及引物数均少,2种贝类各自种群的共同特征尚未能确定。     

3个山茶花变异品种的形态鉴定和RAPD分析

采用形态观察和描述方法,结合RAPD分子标记技术,对山茶花(Cam ellia japonicaL.)3个栽培变异新品种“华美红”、“花绯爪芙蓉”和“玉丹”的形态特征和遗传差异进行了分析,并与其相应的原品种“美国大红”、“绯爪芙蓉”和“粉丹”进行了比较.结果表明,3个山茶花变异品种在形态特征上,特别是在花型、花色上与原品种具有显著的差别,并且后代性状表现稳定.在RAPD扩增中,筛选出了3个有效引物,共扩增出29条带,其中15条具有多态性,特别是引物S1和S4,其多态性带对于每个品种都有差异,能较好地说明变异品种与原品种间的遗传关系.     

SRAP分子标记分析芫花遗传多样性

采用SRAP分子标记对芫花的遗传多样性进行了分析.结果每对引物组合产生8～20条比较清晰的扩增带.10对引物组合共产生473条扩增带.平均每对引物组合产生47.3条.10对引物组合共产生多态性带92条,每对引物组合产生7～14条,平均为9.2条.每对引物组合产生的多态性带的比例为10.9%～29.1%,平均为19.44%.结果表明,SRAP标记多态性还是较高的,可以用于分析芫花的遗传多样性.