底物限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

柠檬酸对 CHO 细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

杂交瘤细胞流加培养过程中不同拟稳态下的代谢动力学分析

采用流加培养方式,实现了杂交瘤细胞在营养物富裕、葡萄糖限制和谷氨酰胺限制3种条件下的拟稳态培养。代谢动力学分析表明:葡萄糖限制时,葡萄糖比消耗速率(qGluc)降低到1.1×10-9mmol/(cell·d),相比营养物富裕时降低了40%以上;乳酸生成量降到最低。谷氨酰胺限制时,谷氨酰胺的最小比消耗速率(qGln)约为0.28×10-9mmol/(cell·d),相比营养物富裕时降低了56%以上;氨的比生成速率降低到0.23×10-9mmol/(cell·d),营养物富裕时为0.93×10-9mmol/(cell·d);丙氨酸的生成降到最低。3种拟稳态下单抗的比生成速率都在29×10-9~37×10-9mg/(cell·d)。本文的流加培养设计方法为快速认识细胞的代谢规律,设计相应的培养基和调控策略,实现细胞高密度和产物高浓度的培养过程提供了指导。     

生物反应器培养CHO细胞的生长与代谢研究

 在搅拌式生物反应器中,应用批培养、流加培养和灌流培养3种方法对CHO-k1细胞进行了培养.3种方法最大活细胞密度分别达到了2.0×10⁶,2.7×10⁶和9.6×10⁶mL^-1.对培养过程中葡萄糖和氨基酸及代谢产物氨和乳酸的动态变化进行了检测和分析.结果表明,CHO细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取以及氨和乳酸的产生与培养液中葡萄糖和谷氨酰胺的浓度正相关,培养过程中控制葡萄糖和谷氨酰胺的加入量能够明显降低氨和乳酸的产生,提高代谢效率,增加细胞产量.     

葡萄糖限制的流加培养中杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成

研究了葡萄糖限制的流加培养和批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。与批培养相比，流加培养的培养周期长，细胞密度、单抗浓度高。随着葡萄糖浓度的下降，葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率也下降，葡萄糖转化成乳酸的比例从60％～70％下降到0，葡萄糖更多地参与三羧酸循环，提高了葡萄糖的有效利用率和ATP的生成效率。     

杂交瘤细胞的无血清低蛋白培养

实现了杂交瘤细胞的体外无血清低蛋白培养。考察了血清浓度、基础培养基和接种密度对细胞生长的影响。在含5%血清培养基、1%血清培养基和无血清低蛋白培养基中适应生长的细胞,μ分别为0.68、0.45、0.44d-1,qGlc分别为13.4×10-9、13.1×10-9、19.2×10-9mmol/(cell·分别为39.4×10-9、44.1×10-9、37.7×10-9mg/(cell·d),YMAb/Xv分别为52.6×10-9、d),qMAb57.8×10-9、54.4×10-9mg/cell,YLac/Glc分别为2.0、1.95、2.0mmol/mmol。无血清培养中葡萄糖代谢途径不变,参与细胞维持代谢的葡萄糖比例增大。血清浓度降低,延迟期变长,最大活细胞密度下降。基础培养基影响细胞的最大活细胞密度,不影响生长速率。无血清培养基中细胞的接种密度选择在0.2×106～0.3×106cells/mL。     

杂交瘤细胞流加培养中葡萄糖浓度的控制

通过 Wu T3杂交瘤细胞的流加培养 ,当葡萄糖浓度分别控制在 0 .2、0 .5、1 .0和 1 .5g/L时 ,葡萄糖的平均比消耗速率为 1 .1 4× 1 0 -11、1 .47× 1 0 -11、1 .78× 1 0 -11和 2 .2 4× 1 0 -11g/( cell· h) ,乳酸的平均比生成速率为 6.0× 1 0 -12 、8.3× 1 0 -12 、1 1 .6× 1 0 -12 和 1 6.6× 1 0 -12 g/( cell· h)。葡萄糖转化成乳酸的比例为 52 %、57%、64%和 74%。结果表明 ,在 Wu T3细胞的流加培养中 ,当葡萄糖浓度在 0 .2～ 1 .5g/L时 ,葡萄糖浓度越低 ,葡萄糖的比消耗速率和乳酸的比生成速率越低 ,葡萄糖转化成乳酸的比例越低 ,从而提高了葡萄糖的有效利用率 ,减少副产物的生成。     

脐血单个核细胞的搅拌悬浮培养

研究了悬浮培养中接种密度、换液和优化培养中所用细胞因子组合对造血细胞扩增的影响。结果表明,较高的接种密度(1.0×106cells/mL)比低接种密度(0.5×106cells/mL)更有利于总细胞、粒巨噬集落形成单位(CFU-GM)和巨核细胞集落形成单位(CFU-Mk)的扩增。换液能及时补充葡萄糖和移出培养中产生的乳酸,从而不对细胞生长造成影响,而且可以成功地控制pH不超出造血细胞正常生长所需pH范围。在SCF、IL-3和IL-6组合基础上添加Flt-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)能比原来的SCF、IL-3和IL-6组合更能促进总细胞、CFU-GM和CFU-Mk的扩增。     

温度对重组BHK细胞生长、代谢和vWF蛋白表达的影响

通过重组幼仓鼠肾细胞(BHK细胞)在不同温度下的批培养和脉冲培养,研究了温度对重组BHK细胞生长、代谢以及血管性血友病因子(vWF)蛋白表达的影响。相对于37℃,升高和降低温度的培养都降低了细胞的生长速率和密度,降温的作用更明显,主要表现为延长了细胞生长的迟滞期。在不同温度的脉冲培养中,细胞的比生长速率变化不大,表明进入对数生长期后,细胞生长对一定范围的温度变化不敏感。培养温度对细胞群体中处于S期的细胞比例影响不大,但在33℃和39℃下培养,细胞群体中处于G0/G1期的细胞比例有明显升高,处于G2/M期的细胞比例下降。当培养温度降低到33℃时,细胞群体中发生凋亡的细胞数随着温度升高而增加。温度的降低能显著提高单个细胞的vWF蛋白表达能力,在33℃下培养,vWF平均比生产速率提高了45%。     

贴壁及悬浮培养的Trex-293细胞生长及其重组腺病毒制备产率的比较分析

为了提高病毒产率并避免制备的重组腺病毒产物中残留的动物血清,将贴壁生长的Trex-293细胞用无动物血清的CD293培养基在搅拌式培养瓶中悬浮培养。分析比较其生长特征及不同条件下的病毒产率。结果表明悬浮培养的细胞生长为稳定状态的时间比贴壁培养时稍长,但每次以(4—6)×105cells/mL密度传代。(3—4)d后基本达到2×106cells/mL,21 d达3×106cells/mL以上,比贴壁细胞密度约高3倍。培养初期,悬浮细胞存活率稍低,培养14 d开始维持90%以上,细胞倍增时间约32 h。而贴壁细胞存活率是基本维持在95%以上。重组腺病毒以200,500和1 000 VP/cell的比例感染悬浮细胞所获产率均值各为18 000,14 000和990 VP/cell,而1 000 VP/cell的比例感染贴壁细胞所获产率均值为10 500 VP/cell。结论为Trex-293细胞用无动物血清的培养基在搅拌式培养瓶中可悬浮培养,当重组腺病毒感染比例为200 VP/cell,感染后48 h,细胞存活率50%时收获有利于提高病毒产率,且高于感染贴壁细胞所获产率。     

高校图书馆文化建设之我论

图书馆文化建设对于图书馆内聚人心、外树形象、提高服务质量、创新图书馆事业至关重要。介绍了图书馆文化的基本内涵,阐述了图书馆文化建设的经验。     

安全文化建设初探

阐述了安全文化的定义、作用及其组成,分析了对安全文化建设的认识上存在的误区,探讨了企业在建设和推行安全文化时应采取的措施。     

丰富文化建设载体 打造和谐企业文化

从物质文化建设、道德文化建设、安全文化建设、管理文化建设、精神文化建设等方面介绍了平朔煤炭公司生活服务公司丰富文化活动载体、不断健全和完善文化建设的经验.     

图书馆文化在校园文化中的作用与构建举措

图书馆文化是校园文化的组成部分,在校园文化建设中发挥着积极的作用。在积极倡导构建和谐校园文化的今天,必须高度重视图书馆文化的功能,通过各方面的举措搞好图书馆文化建设,从而推动校园文化的和谐发展。     

出版物的文化形态及评介

本文对出版物的多元文化形态存在方式作了简要的评介 ,并举例说明了文化形态的差异对社会产生的影响。本文以为从历史观点看 ,出版物的文化形态是一个开放而非封闭的体系。在当今中国 ,出版物的文化形态可以在其领域内互动 ,从而更有效地发展其理论个性。     

把握先进文化前进方向，加强高校校园文化建设

高校校园文化建设,是高校精神文明建设的重要组成部分,是高校实施“人才工程”的有力保障。文章从建设有序的校园文化,建设有中国特色的校园文化,建设适应人才培养需要的校园文化三个层面,阐述了校园文化的内涵,总结了校园文化对教育发展的重要作用与意义。     

东莞园区文化建设的探索

园区文化的发展体现了城市文化的更新与进步。东莞园区文化正处于蓬勃发展过程中,在创新文化上,重视创新理念,创新了金融制度和发展了创新产业;在生态文化建设上,强调生态城市理念,制定了相关生态保护机制和发展了相关生态产业;在社区文化上,加强了社区设施建设,开展了丰富多彩的文化娱乐活动。在取得上述成就的同时,东莞园区文化也存在一些不足之处,需要进一步进行探索和创新,以促进园区文化和东莞文化的进一步发展。     

汉英心理文化差异对比

语言是文化环境中的产物,又是文化的载体,作为记录文明历史和人类思想的工具,每一种语言都有独特的文化特色,汉语和英语产生于不同的文化环境,所以承载的文化也不相同,因此两种语言在表达方式上有不少差异.本文从中国文化和西方文化即人文文化和科学文化在思维方式上的差别进行探讨.这对中英两大语言的沟通以及两大民族的文化融合具有比较重要的意义.     

马克思主义文化生产力新探索

文化生产力是指文化作用于生产力并在促进生产力变革、解放、发展中的巨大作用。马克思主义文化生产力是指马克思主义文化对改造主观世界、客观世界的实践活动的推动力。解放、发展马克思主义文化生产力,增进社会和谐,促进各项改革的顺利进行,必须提高创新马克思主义理论的能力,增强马克思主义文化产品自身的影响力、渗透力和引导力,提高马克思主义文化"产品"自身与各种文化传播介质相融合的能力;必须繁荣马克思主义文化,壮大马克思主义文化产业。     

关于长春城市文化的思考

长春在200多年的城市发展中,绘就了独特的文化运作轨迹,尤其在长春解放后60多年的发展历程中,长春构建了以汽车、影视、校园和雕塑文化为主体特征的现代城市文化。在全球化趋势中,长春现代城市文化建设面临着诸多机遇与挑战,采取何种文化策略对建设创新型城市、加速长春现代城市和谐文化的发展有着重要的现实意义。