表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养,细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养,最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时,在培养的96h,蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%,SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

柠檬酸对 CHO 细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

CPUY013对胰腺癌Capan2的生长抑制与诱导凋亡作用

探讨CPUY013对体外培养人胰腺癌细胞Capan2生长抑制及诱导凋亡作用.采用MTT法、克隆原形成法检测CPUY013对Capan2细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪分析CPUY013对细胞周期的影响,Western Blot法检测TopoⅠ、野生型p53、caspase-3、bcl-2和bax蛋白表达的变化.MTT法、集落形成试验结果显示,CPUY013对体外培养的人胰腺癌细胞Capan2有明显的生长抑制作用,处理72 h的IC50值为7.3×10^-7mol/L（MTT法）,CPUY013在8.0×10^-8mol/L浓度可以明显抑制Ca-pan2细胞的集落形成,抑制率为69.6%.同时,CPUY013可剂量依赖地降低Capan2细胞G1期细胞的比例,升高S期细胞的比例,呈现明显的S期阻滞.CPUY013可下调TopoⅠ蛋白的表达,上调细胞中p53、caspase-3、bax蛋白表达,下调bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖性.CPUY013对Capan2细胞具有明显的生长抑制作用,阻滞细胞周期进程,诱导Capan2细胞凋亡,其可能与降低细胞内TopoⅠ蛋白表达,增加p53、caspase-3、bax蛋白表达,降低bcl-2蛋白表达有关.     

JAL1杂交瘤细胞的批量培养研究

研究了不同葡萄糖、谷氨酰胺浓度下JAL1细胞的生长、糖耗、乳酸及氨的生成、单抗合成等代谢过程及该株细胞的基本代谢规律，同时对该株细胞生长和单抗生产的动力学方面进行了研究，在细胞培养箱中，采用方瓶批量培养杂交瘤细胞，培养条件为pH7.0-7.5，温度37℃，5％CO2。实验表明，在不同浓度葡萄糖、谷氨酰胺的培养液中，细胞的活性细胞密度、总细胞密度、细胞活性上均有不同，相应地，对细胞的最大比生长速率、葡萄糖最大比消耗速率、乳酸最大比生成速率以及单抗最大比合成速率也有不同程度的影响。实验结果还表明，该株细胞的单抗分泌是属于负生长耦联型的。     

氨对重组中国仓鼠卵巢细胞生长及人红细胞生成素表达的影响

氨对重组中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的生长具有明显的抑制作用，并遵循二级抑制模型，抑制常数Ka为41．5（mmol/L)^2，即当氨浓度为6．45mmol/L时，细胞的比生长速率下降到最大比生长速率的50％，在重组CHO细胞的批培养过程中，细胞密度和红细胞生成素浓度随着起始氨浓度的提高而下降，但存在一最适的氨浓度，在此浓度下，单位重组CHO细胞的EPO比生成速率最大。     

青龙衣中胡桃醌对A-549细胞周期及凋亡影响

探讨青龙衣中胡桃醌（Juglone）对体外培养的人肺癌细胞A-549生长抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响.采用MTT法检测青龙衣中胡桃醌对A-549细胞的生长抑制作用,采用激光共聚焦扫描显微镜观察凋亡形态,流式细胞仪分析胡桃醌对A-549细胞周期的影响.MTT法试验结果显示,胡桃醌对体外培养的人肺癌细胞A-549具有明显的生长抑制作用,处理24、48、72 h的IC50值为分别为3.4×10^-5、1.8×10^-5、2.6×10^-6mol/L.凋亡形态观察结果显示,胡桃醌能诱导A-549细胞的凋亡,同时胡桃醌能剂量依赖性的降低A-549细胞的G1期细胞的比例,升高G2期和S期细胞比例,呈G2期和S期阻滞作用.胡桃醌对A-549细胞具有明显的生长抑制作用,阻止周期进程,诱导A-549细胞凋亡.     

BHK21细胞悬浮培养的驯化和质量评价

目的:将贴壁培养型BHK21细胞驯化成适合口蹄疫疫苗生产的无血清全悬浮培养型细胞.方法:引进贴壁培养型BHK21细胞,通过改变培养液和降低血清的方法进行悬浮培养的驯化,对驯化得到的悬浮培养型细胞进行生物学检定.结果:引进的BHK21细胞低血清驯化培养22代可悬浮生长,用无血清培养基培养10代后形态趋于稳定生长变快.贴壁和悬浮细胞均有致瘤性,对口蹄疫病毒敏感,适应生物反应器高密度培养,且没有外源物污染.结论:驯化的BHK21细胞可用于口蹄疫疫苗的研究和生产.     

BHK21细胞在新型微载体培养系统生长条件优化

目的：使用BelloCell-500AP生物反应器和BioNOC-II微载体,对BHK21细胞在此新型高密度培养生物反应器中的生长特性进行研究。方法：首先将1.5×108个BHK21细胞悬液加入含有微载体的生物反应器内,按生物反应器厂家推荐参数进行培养,每天取载体计数观察BHK21的生长特性。然后调整细胞浓度和微载体培养系统运行参数。结果：BHK21细胞经过6 d培养载体中细胞总数达到峰值,细胞密度是起始接入数量的31倍为4.41×109个;经过培养过程参数优化,确定适于BHK21细胞高密度培养参数。试验成...     

丁酸钠对重组CHO细胞生长及产物EPO表达的影响

在CHO－S－SFM II无血清培养基中维持培养重组CHO细胞,考查添加丁酸钠对细胞生长,糖代谢及产物EPO表达的影响,丁酸钠浓度达到2mmol/L时完全抑制了细胞的生长,同时,丁酸钠的添加也降低了葡萄糖比消耗速率（30％左右）,在本培养系统中,丁酸钠并不能促进产物的表达,但有助于维持EPO表达的稳定性。     

生物量对黄花蒿悬浮培养细胞生长的影响

黄花蒿细胞悬浮培养过程中，分别以１０、３０、６０、８０ｇ／Ｌ的接种量进行细胞生长的对比实验．在所述培养条件下的最适起始细胞浓度为鲜重６０ｇ／Ｌ培养基．起始培养的细胞浓度直接影响细胞的生长周期增殖倍数．起始浓度越高，细胞生长周期越短，但细胞的增殖倍数越小．起始细胞浓度对黄花蒿悬浮培养细胞对数生长期的比生长速率影响不大．     

干细胞研究进展

由于干细胞具有自我更新和多向分化潜能的功能,使得人们用干细胞治疗多种疾病成为可能.就干细胞的研究概况、研究技术、干细胞技术的市场前景以及干细胞研究面临的问题等作一概述.     

细胞工程的研究进展及前景展望

简介了细胞工程的概念及基本操作,论述了其在若干重要领域研究取得的重大进展,并展望了其发展前景。     

间质干细胞来源、鉴定、可塑性和应用前景(综述)

间质干细胞(MSCs)存在于骨髓、肌肉、骨、软骨等部位，可分化为中胚层的细胞，如成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等，亦可分化为内胚层、外胚层的细胞，如神经细胞、肝脏细胞、肾脏细胞等，同时由于来源广、易于分离扩增和基因转染，在临床、科研上有很大的潜在应用价值。     

橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制研究

本文通过MTT法和流式细胞术研究橙皮苷对人食管癌Eca9706细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响,结果显示:不同浓度橙皮苷能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.01),IC50为84μg/mL;22、43、84μg/mL的橙皮苷作用于Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例分别为25.16%、30.13%、31.05%,比对照组明显升高(P<0.002);细胞凋亡率分别为6.23%、8.19%、10.62%,与对照组相比细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).以上结果说明,橙皮苷通过干预细胞周期和凋亡抑制食管癌Eca9706细胞增殖.     

泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡

为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,利用小RNA干扰技术,通过慢病毒包装,侵染前列腺癌细胞DU145,达到下调Nedd4表达的目的.MTT检测表明,下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖;DAPI染色发现,下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感.这些结果都说明,下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖,而且可以促进细胞凋亡.     

小鼠胚肝基质细胞在体外培养中的动态演化

胚肝基质细胞是研究胚肝造血调控的重要工具，本实验对小鼠胚肝基质细胞在体外培养过程中的生长、细胞类型组成及其组成比例的演变过程进行了观察．实验显示小鼠原代培养初期基质细胞是由平滑肌样上皮细胞、巨噬细胞以及成纤维样细胞、树突状细胞、内皮细胞构成的，经过多次传代后，巨噬细胞等类型的细胞逐渐丢失，平滑肌样上皮细胞和成纤维样细胞成为主体，表明体外培养的小鼠胚肝基质细胞在4代以内都能较真实的反映体内造血微环境的构成，适用于胚肝造血研究．此为进一步研究胚肝基质细胞在胚胎期造血过程中的作用奠定了工作基础．     

新生大鼠神经干细胞分离培养及缺氧损伤模型的建立

目的建立缺氧损伤模型,观察缺氧损伤对神经干细胞分化的影响。方法用MTT,LDH等方法比较95%N2,5%CO2比率的缺氧气体分别培养1,2,4,6,8 h神经干细胞的变化。结果三天内的大鼠海马存在大量神经干细胞,可分化为神经元、胶质细胞等神经细胞类型,95%N2,5%CO2比率的缺氧气体培养6 h后神经干细胞OD值由缺氧前0.369±0.352降至0.270±0.229,LDH 漏出量由缺氧前10.374±0.390 unit/ml.min增加到14.710±1.337 unit/ml.min,差异显著。结论证实了新生大鼠海马内提取的细胞为神经干细胞,神经干细胞缺氧培养6 h可以建立神经干细胞缺氧损伤模型,但短时间缺氧培养对细胞分化类型无明显改变。     

合欢花水提物对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

采用MTT法检测合欢花水提物对C6细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测该水提物对C6细胞的诱导凋亡作用.结果表明:合欢花水提物能抑制C6细胞的增殖,且具有剂量和时间依赖性,其在24 h、48 h、72 h时对C6细胞的半数抑制率(LD50)分别为:305 μg/mL、50 μg/mL、15 μg/mL.流式细胞术结果显示:200 tμg/mL、300μg/mL合欢花水提物均可诱导C6细胞发生早期凋亡,与对照组细胞相比,早期凋亡率分别由对照组的0.7％增加到了4.3％、14.3％.提示合欢花水提物抑制C6细胞增殖机理与诱导细胞凋亡途径有关.     

细胞芯片制备仪的研制及应用

目的 研制快速、简单、方便的细胞芯片制备仪,并验证其功能.方法 制备仪由相互配合的阵列管固定板和内芯固定板组成,在阵列管固定板上按行列方式设有多根带微孔的阵列管,在内芯固定板上设有多根与阵列管固定板上各阵列管对位配合的阵列管内芯.工作中通过阵列管及内芯间形成的空腔结构,将细胞样本通过琼脂糖包埋于空腔内,使之在带微孔的阵列管空间进行脱水、透明、浸蜡等处理,进而制成细胞芯片石蜡包埋块,再经过切片、染色后即可完成细胞芯片的制备.结果 细胞芯片制备仪能够迅速制备出27种细胞的细胞芯片,肉眼观点阵完整,分布均一,经HE切片及免疫组化染色证实,染色效果良好,结果可靠.结论 细胞芯片制备仪构造简单,操作方便,能够迅速成型制备出多种不同细胞类型的细胞芯片,适用于推广使用.     

两种细小病毒MVM宿主细胞的比较研究

ＭＶＭ属自主性细小病毒，对相当多种类的体内外生长的肿瘤细胞和转化细胞有抑制作用，本文对ＮＢＫ细胞的软琼脂克隆形成率和以体进行了分析，确认ＮＢＫ细胞为转化细胞，且对ＭＶＭ敏感。在此基础上，比较了两种细小病毒ＭＶＭ宿主细胞ＮＢＫ和Ａ９的细胞存活率、单位体积培养液中的细胞产量和病毒产量，认为Ａ９细胞更适合于作为细小病毒ＭＶＭ的宿主细胞进行病毒的制备和生产。