无花果曲霉植酸酶发酵及酶动力学

目的：研究野生型无花果曲霉植酸酶的动力学性质。方法：通过限制培养基中的无机磷,无花果曲霉发酵获得植酸酶。纯化后,对酶的动力学性质进行了研究。结果：该酶作用底物植酸钠的Km值为64．7μmol/L,对于植酸钠,植酸酶的最适反应pH为5．5温度为50℃。结论：无花果曲霉植酸酶在pH3.5－8．040℃以下比较稳定;不同的金属离子螯合剂对酶活性影响不一样,Ca^2 对酶活力有轻微的激活作用,Al^3 几乎无影响,Mg^2 、Fe^2 、Cu^2 对酶活力有抑制作用,Co^2 、Hg^2 、EDTA有较强的抑制作用。     

酵母双杂交系统筛选与HCMV pUL23蛋白相互作用的蛋白质

将UL23基因的ORF序列克隆到酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒pGBKT7-UL23,用酵母双杂交技术筛选人胚肾cDNA文库中与人巨细胞病毒pUL23相互作用的宿主蛋白分子,再通过回复酵母双杂交再次确认两者之间的相互作用.结果表明:酵母双杂交,回复酵母双杂交试验证明宿主蛋白分子elF3e(eukaryotic trans-lation initiation factor 3,subunit E interacting protein)能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用.宿主蛋白分子elF3e能够与人巨细胞病毒UL23蛋白相互作用,这为进一步研究pUL23蛋白在HCMV生活周期中的作用机制提供依据.     

重组大肠杆菌高密度发酵表达胰高血糖素样肽-1衍生物(GP62)的培养基优化

对重组E.coli BL21 (DE3)高密度表达胰高血糖素样肽-1衍生物(GP62)的发酵培养基进行了优化.通过单因素实验与正交实验相结合的方法,依次对基础培养基,发酵培养基中碳源、氮源、无机盐等成份进行优化.在2YT培养基基础上,获得优化的发酵培养基2YT-GP62.在5L全自动发酵罐中利用终浓度0.5 mmol/...     

大蒜细胞培养及超氧化物歧化酶产生的研究

经8℃低温下贮藏一个月的大蒜,在添加0. 1mg/1KT 和2mg/12,4-D 的 MS 培养基中培养,产生大量的愈伤组织,间隔20天继代培养,愈伤组织能够脱分化地持续增殖。培养中,随愈伤组织的增长,细胞内超氧化物歧化酶含量亦随之提高。培养15天,比活达到33. 7U/mg 蛋白,比天然贮藏大蒜中的含量提高了56％。     

工程菌JM—109—pTrcHis2A—phyA表达植酸酶的研究

目的：将来源于黑曲霉的植酸酶基因重组于大肠杆菌表达载体pTrcHis2A中,导入大肠杆菌JM109中,构建工程菌JM－109－pTrcHis2A-phyA。方法：基因重组,以及克隆和外源基因诱导表达 技术。结果：该工程菌能够有效地表达真核植酸酶基因,并且添加诱导剂IPTG,能使植酸酶的表达量成倍提高。结论：该表达系统被用做研究黑曲霉植酸酶体外改良的工具。     

大蒜细胞悬浮培养中细胞生长与产酶的研究

当大蒜细胞培养在ＭＳ液体培养基中，细胞生长迅速，脱分化的细胞仍具有合成和积累ＳＯＤ的能力．培养１５天，大蒜细胞生长和ＳＯＤ酶积累都达到高峰期，细胞合成量鲜重为１２０．８ｇ／Ｌ，细胞单位酶活力为每克细胞５．２２×１０－７ｍｏｌ／ｓ，细胞生长最适温度为２８℃，最适ｐＨ值为５．８。植物生长调节物质（２，４—Ｄ、ＫＴ）对大蒜培养细胞生长和ＳＯＤ酶积累都有显著的影响，其浓度有一个最佳值。适当地提高培养基中物质的浓度，有利于促进大蒜细胞的生长和胞内ＳＯＤ酶的积累。培养基中添加一些刺激剂，可大大地提高大蒜细胞内ＳＯＤ酶的产量。     

桥序列在构建人工核酶M1GS中的作用

目的：为检验连接的Gs序列是否会影响M1RNA高级结构而导致M1RNA活性改变,对核酶的催化机制进行探讨。方法：通过软件模拟对M1GS进行结构分析,筛选了一段独立折叠的桥序列连接M1RNA与GS,并通过体外切割实验检验有桥和无桥序列的核酶的活性。结果：有桥序列的M1GS具备体外特异切割底物的核酶活性,而无桥序列的M1GS核酶未表现体外切割活性。结论：证实桥序列对维持M1RNA高级结构和保持人工核酶M1GS的体外切割活性具有重要作用。     

核酶M1GS-T6对HCMV UL97基因RNA片段体外切割作用

目的:研究M1GS核酶对HCMV UL97mRNA的体外切割作用.方法:针对HCMV UL97 mRNA T6位点设计与之互补的引导序列(Guide Sequence,GS),将其共价结合至大肠杆菌核酶P催化亚基(M1 RNA)的3'末端,构建M1GS-T6核酶,并用其对UL97基因亚克隆片段转录产物进行体外靶向切割实验.结果:核酶M1GS-T6具备特异性切割靶分子UL97 mRNA的能力.结论:核酶M1GS-T6具备特异性切割活性,为进一步研究HCMV病毒基因功能和治疗提供了新的途径.     

生物量对黄花蒿悬浮培养细胞生长的影响

黄花蒿细胞悬浮培养过程中，分别以１０、３０、６０、８０ｇ／Ｌ的接种量进行细胞生长的对比实验．在所述培养条件下的最适起始细胞浓度为鲜重６０ｇ／Ｌ培养基．起始培养的细胞浓度直接影响细胞的生长周期增殖倍数．起始浓度越高，细胞生长周期越短，但细胞的增殖倍数越小．起始细胞浓度对黄花蒿悬浮培养细胞对数生长期的比生长速率影响不大．