无花果曲霉植酸酶发酵及酶动力学

目的：研究野生型无花果曲霉植酸酶的动力学性质。方法：通过限制培养基中的无机磷,无花果曲霉发酵获得植酸酶。纯化后,对酶的动力学性质进行了研究。结果：该酶作用底物植酸钠的Km值为64．7μmol/L,对于植酸钠,植酸酶的最适反应pH为5．5温度为50℃。结论：无花果曲霉植酸酶在pH3.5－8．040℃以下比较稳定;不同的金属离子螯合剂对酶活性影响不一样,Ca^2 对酶活力有轻微的激活作用,Al^3 几乎无影响,Mg^2 、Fe^2 、Cu^2 对酶活力有抑制作用,Co^2 、Hg^2 、EDTA有较强的抑制作用。     

丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立

以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体, 建立了一种新的HCV体外细胞培养系统. 采用RT-PCR, 荧光定量RT-PCR, 链特异性RT-PCR, 免疫印迹, 免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率, 结果显示, 该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达, 并组装成直径约47 nm的HCV病毒体, 病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记; 该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL, 远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数, 也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度. 检测结果证明, 转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7, 并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体, 病毒滴度达106基因拷贝/mL.     

工程菌JM—109—pTrcHis2A—phyA表达植酸酶的研究

目的：将来源于黑曲霉的植酸酶基因重组于大肠杆菌表达载体pTrcHis2A中,导入大肠杆菌JM109中,构建工程菌JM－109－pTrcHis2A-phyA。方法：基因重组,以及克隆和外源基因诱导表达 技术。结果：该工程菌能够有效地表达真核植酸酶基因,并且添加诱导剂IPTG,能使植酸酶的表达量成倍提高。结论：该表达系统被用做研究黑曲霉植酸酶体外改良的工具。