猪血管脱细胞细胞外基质制备的初步探讨

采用高渗、低渗溶液,结合去污剂—酶联合处理猪腹主动脉,进行组织学检查,从而制备血管脱细胞细胞外基质。结果表明:经该法处理的猪血管细胞全部脱除,细胞外基质保持完好,未见胶原纤维、弹性纤维有断裂现象。作者认为,高渗、低渗溶液结合去污剂—酶联合处理,是制备血管脱细胞细胞外基质理想的方法。     

酶法制备天然脱细胞血管支架

从不同类型的脱细胞方法中选取了4种有代表性的方法,分别是去垢剂处理法、酶法、去垢剂和酶共同处理法以及快速冻融法.之后分别对制备所得各组支架从HE染色、DAPI染色、DNA残留率和力学性能分析四个方面进行分析.力学性能及DNA残留率均采用平均值±标准差的方式表示,并进行t检验,取P<0.05.结果显示酶法制备脱细胞天然血管支架的方法对细胞的去除效果最显著,同时,产生了有规则的细胞质基质的孔隙以供新的细胞生长迁移,虽然力学性能有一定下降,但是通过进一步的处理,可以形成一种良好的组织工程血管支架.     

不同方法处理的角膜脱细胞基质组织学生物特性的比较

目的:比较不同的角膜脱细胞基质方法,旨在选择最适合的脱细胞基质方法,制备成为组织工程角膜支架材料和角膜替代物的脱细胞基质.方法:分别用胰酶-曲拉通法、SDS-戊二醛法、胰酶-冷冻法等方法对角膜进行脱细胞处理,并对脱细胞彻底的基质进行力学特性、透光率的分析.结果:用胰酶-冷冻法获得的兔角膜全层和分层基质脱细胞最彻底,基质的结构未见明显破坏,脱细胞基质在生物力学特性上与正常角膜接近,透光率低于新鲜角膜.结论:用胰酶-冷冻法获得的脱细胞基质与自然角膜接近,可作为组织工程角膜支架材料和角膜替代物.     

牛松质骨脱细胞骨细胞外基质的制备

为寻找适合骨移植的骨组织替代物．脱细胞骨细胞外基质（Acellular bone extracellular matrix,ABECM）制备最佳方法。方法：根据析因设计原理用不同浓度曲拉通X-100液分别与高渗和低渗液联合后对牛肱骨上端松质骨组织进行适当的脱细胞处理．制成脱细胞牛松质骨,再进行HE染色,Massion染色及扫描电镜观察,寻求最佳的曲拉通X-100的浓度,脱细胞时间及最佳的制备脱细胞牛松质骨的方法。结果表明：10％氯化钠与0．5％曲拉通X-100联合处理48小时的脱细胞牛松质骨未见细胞成分,细胞外基质基本结构未被破坏。由此可见本方法可以成功的制备ABECM,曲拉通X-100是制备ABECM良好试剂,ABECM是一种新型的理想的骨替代物,有广泛的应用前景。     

12月龄ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化

目的探讨12月龄ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主要动脉病理学变化。方法12月龄雌雄各半动脉粥样硬化小鼠6只,选取主动脉根部、颈动脉、腹主动脉及肾动脉进行冰冻切片,油红染色,光学显微镜观察血管病理变化,采集图像。结果6例小鼠主动脉根部及肾动脉血管均可见油红染色,4例小鼠腹主动脉血管可见油红O染色,而6例小鼠颈动脉均不见油红O染色斑块。结论北京大学医学部实验动物部饲育的ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠是研究动脉粥样硬化的良好动物模型。     

脱细胞猪皮基质材料的体内外降解研究

细胞外基质(ECM)作为一种特殊的天然生物衍生材料,为细胞提供了生物物理机械性支持,并且可为组织的再生提供良好的微环境.通过使用Ⅰ型胶原酶以及植入动物实验对脱细胞猪皮基质材料进行体内外降解研究,分析脱细胞猪皮基质材料的降解规律以及力学性能.结果显示:脱细胞猪皮基质材料在Ⅰ型胶原酶中20 h降解率为(78±2.7)%,拉伸强度为789±14 kPa;24 h降解率为(92±2.3)%,样品已碎裂成小块儿;28 h样品已基本降解完全.植入动物实验显示样品植入24周后可完全降解,表明猪皮细胞外基质具有良好的可降解性能,为其可控性降解研究提供相关依据.     

树鼩胸主动脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

目的 体外分离、培养树鼩(Tupaia belangeri)胸主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs),并对培养细胞进行初步鉴定, 为新型实验动物树鼩的应用研究提供体外模型。方法 无菌取幼龄树鼩胸主动脉,采用组织块培养法和胰蛋白酶、胶原酶连续消化法分别进行树鼩胸主动脉血管内皮细胞分离,经完全培养液培养,倒置显微镜观察细胞形态,并用抗Ⅷ因子抗体进行荧光染色鉴定细胞。结果 经组织块培养法分离培养的血管内皮细胞,3 d有细胞贴壁,7 d后细胞从组织块中大量长出,15 d汇合为单层;酶消化法所得细胞12 h即贴壁,3～7 d生长较快,12 d汇合成单层,镜下观察发现细胞呈典型的铺路石状;两种方法分离所得原代细胞经体外培养传代,6代内,细胞生长均良好;利用血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子进行免疫荧光鉴定后确定为阳性。结论 本研究采用简便的方法成功分离到了树鼩胸主动脉血管内皮细胞,为血管内皮细胞相关研究提供了实验模型。     

绵羊原代睾丸细胞培养及形态学观察

用胰酶消化法分离培养绵羊睾丸细胞,分别对原代细胞24、48、72、96h的细胞形态用倒置显微镜和电子显微镜进行观察,并对1、3、5、12月龄的绵羊的睾丸细胞活力进行生长速度和传代能力进行研究。结果表明,培养前期细胞多呈三角形活多角形,后期细长呈梭形,并且睾丸的年龄越小,生长速度越快,传代次数越多,细胞活力越强。     

左心辅助泵内皮细胞化的实验研究

培养了猪主动脉血管内皮细胞，用预衬细胞外基质结合作用ｂＦＧＦ的方法实现静置条件下ＰＵ材料的内皮细胞化，并观察内皮化材料在ＬＶＡＰ泵腔内模拟流体条件下内皮细胞的贴壁率和丢失率以及细胞形态变化。结果显示：用预衬基质结合使用ｂＦＧＦ的方法，静置条件下可以实现ＰＵ材料内皮化，镜下观察细胞形态良好，在ＬＶＡＰ泵腔内模拟流体条件下中１和２ｈ后，细胞贴壁率７４．４２％和５９．７０％，丢失率分别为２５．５８％和４     

酶脱支处理对颗粒态缓慢消化淀粉形成的影响

以玉米淀粉为原料,研究了低于淀粉糊化温度条件下酶脱支处理对直链淀粉溶出及缓慢消化淀粉形成的影响。选取不同条件产物,采用Guraya法测定酶脱支处理后的缓慢消化淀粉含量的变化,从而研究酶脱支处理过程上清液中溶出的直链淀粉与沉淀淀粉颗粒态缓慢消化淀粉含量之间的关系。并利用扫描电子显微镜、X-射线衍射仪、差示扫描量热仪等进一步研究酶脱支淀粉的颗粒形貌、结晶特性、热焓特性。结果表明,直链淀粉溶出量与缓慢消化淀粉形成具有相关性;低于糊化温度下通过酶脱支制备缓慢消化淀粉能提高淀粉颗粒表面的疏松度;相对于结晶的数量,结晶的质量对淀粉消化性影响更大;酶脱支处理后,淀粉糊化的起始温度、峰值温度、终止温度均有所增加,糊化温度区间变小,糊化焓降低。     

Hippocampal Neuron-Derived Extracellular Matrix Coated Nanofibrous Scaffold for Neural Tissue Engineering

The aim of this study is to prepare poly-L-lactide( PLLA) electrospun nanofibrous scaffolds coated with hippocampal neuron-derived extracellular matrix( N-ECM)and construct a novel neural tissue engineering scaffold.Neonatal rat hippocampal neurons were seeded on PLLA nanofibers,and then decellularized to derive a cell-free extracellular matrix loaded N-ECM/PLLA modified scaffolds. The morphology and ingredients of N-ECM/PLLA were observed by scanning electron microscopy( SEM) and immunofluorescence staining respectively, and the cytocompatibility of the composite scaffolds was characterized by cell count kit-8( CCK-8) assay. The N-ECM was clearly identified loading on scaffolds when being imaged via SEM and immunofluorescence staining results showed that the N-ECM was made up of fibronectin and laminin. Most importantly, compared with tissue culture polystyrene and pure scaffolds, N-ECM/PLLA scaffolds could effectively facilitate the proliferation of rat adrenal neuroma cells( PC12 cells),indicating their better cell compatibilities. Based on the combination of N-ECM and PLLA biomaterials,the present study has fabricated a unique and versatile neural tissue engineering scaffold,offering a new thought for future neural tissue engineering.     

基于CT图像的胸主动脉瘤模型数值模拟

三维重建基于CT的胸主动脉瘤有限元模型并进行血流动力学数值模拟,为分析胸主动脉瘤的血流动力学机理及其临床治疗提供理论依据。依据临床胸主动脉瘤患者CT数据,结合MIMICS 11数字化影像处理软件,获取胸主动脉瘤的优化表面模型。随后导入ANSYS ICEMCFD 11.0进行胸主动脉瘤模型的有限元网格划分。最后在ANSYSCFX11.0中完成胸主动脉瘤的血流动力学分析。建立临床上适用于胸主动脉瘤患者血流动力学分析的有限元模型。获得了个性化胸主动脉瘤模型中血液流场的流线、速度矢量、血管壁面压力和血管壁面切应力的分布和变化。模型具有数字化、个性化特征,可用于胸主动脉瘤血液动力学计算和分析临床胸主动脉瘤患者动脉瘤的破裂机理。     

环颈雉食管和气管的血液供应研究

用血管铸型法和大体解剖学方法对 5只环颈雉的食管和气管的血供进行了解剖学观察 ,结果表明 :分布于食管的动脉有颈总动脉食管支、食管升动脉、颈升皮动脉食管支和食管降动脉 .分布于嗉囊的动脉有嗉囊左、右前动脉和嗉囊左、右后动脉 .分布于气管的动脉有自颈总动脉分出的气管支、气管升动脉和气管降动脉 .分布于肺外支气管的动脉有由颈总动脉发出的支气管支 .回流食管和气管颈段前部的静脉汇入下颌静脉 ;回流食管和气管颈段中后部血液的静脉汇入食管气管静脉干 ;回流食管胸段前部和气管胸段大部血液的静脉汇入食管气管静脉干 ;食管胸段中后部和气管胸段后部以及支气管血液的静脉直接汇入颈静脉根部 .嗉囊左后静脉汇入食管气管静脉干 ,嗉囊左、右前静脉和右后静脉直接注入左颈静脉     

两种冻结食品在电场作用下的解冻试验探讨

利用冰解冻的高压脉冲电场的试验基础,进一步以试验方式研究了在一定电场和脉冲频率下对冻豆腐和肉丁两种食品的解冻过程.结果发现,与冰的加速作用相似,高压脉冲电场对两种冻结食品的解冻具有加速作用.试验因素中以电场强度的影响比较明显,E=0～28kV/m的电场强度越大,解冻加速作用越明显,食品失水量、表面和截面形态也有明显变化,但是3种电场脉冲频率(7,10,20kHz)的影响却不明显.     

冷冻保存对人类附睾精子功能的影响

目的：了解人类附睾精子经历冷冻保存后的精子功能变化。方法：应用精子功能检测方法。结果：１１ 例先天性双侧输精管缺如患者附睾精子标本冷冻保存后,每例冷冻标本均见活动精子,但精子活动率显著降低,精子活动能力减弱。精子膜完整率显著下降,头膜损伤－ 尾膜完整的精子率（ Ⅲ型精子） 显著升高,精子体外存活时间显著缩短。精子顶体蛋白酶活性降低。去透明带地鼠卵穿透试验检验精子体外授精能力失败的标本,采用显微注射技术可使精子辅助授精。结论：（１） 冷冻保存对附睾精子功能有显著的影响,造成精子功能减弱;（２） 冷冻精子仅用单一尾膜肿胀试验筛选,有可能拾取到的是尾膜完整,但头膜损伤的精子;（３） 建立显微授精技术可有效地对冷冻附睾精子辅助受精。     

Atomic force microscopic view of the fine topography on the tobacco stigma surface during its response to pollination

During compatible pollination in tobacco, an extracellular matrix （ECM） is secreted from the stigma surface; however, it is unknown whether the pattern of secretion across the stigma depends on the pollen source. In fact, technical limitations have prevented clear observation of ECM secretion. Here, we report the detailed topographic changes on the stigma surface that accompanies intraspecies and interspecies pollination in tobacco using contact mode atomic force microscopy （AFM）. Our results, which show the dynamics and time course of ECM secretion after pollination, indicate that a certain pattern of secretion already exists on the stigma prior to pollination. Intraspecies induced a two-step response, characterized by topographical changes on the stigma surface several hours after pollination, which was distinct from the pattern of ECM secretion induced by interspecies pollination. This difference was confirmed by root-mean-square analysis, which assessed the roughness of the stigma surface. Our findings indicate that compatible pollination not only induces ECM secretion from the stigma, but also results in a specific distribution of the ECM. Thus, this study demonstrates the powerful potential of AFM in studying the pollen-stigma interaction.     

大鼠颈总动脉球囊拉伤模型的制作研究

目的 通过对大鼠颈总动脉球囊拉伤模型制作技术的创新和探索，不断优化策略提高动物模型的成活率 和成材率，形成稳定的造模技术，为经皮冠状动脉腔内成形术术后并发症的预防和治疗提供实验基础。方法 将25只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为三组,分别为大球囊组（球囊直径2.0 mm）11只、小球囊组（球囊直径 1.5 mm） 11只、假手术组3只，大球囊组和小球囊组应用不同大小的球囊进行模型制作，术后14 d通过伊凡氏蓝 染色进行验证，动脉拉伤后颈总动脉内膜成功着色者为造模成功。结果小球囊组造模成功10例（成功率 90.9%，10/11），大球囊组造模成功5例（成功率45.5%，5/11），两组造模成功率差异具有统计学意义，两组内膜 损伤面积无显著差异。结论 应用1. 5 mm球囊可以实现对内膜的有效损伤，且造模成功率较2. 0 mm球囊显著升高。     

急性腹主动脉闭塞合并双肾动脉闭塞1例临床分析

目的探讨急性腹主动脉闭塞合并双肾动脉闭塞的病因与抢救措施.方法对突然出现腰腹痛和双下肢疼痛伴麻木4 h的患者行腹主动脉造影,造影证实该患者为腹主动脉合并双肾动脉完全闭塞,行介入治疗和清栓术治疗.结果清除部分血栓,患者恢复血流5 min后发生高血钾,引发心脏骤停死亡.结论急性腹主动脉闭塞合并双肾动脉闭塞死亡率高,主要死因是心脏毒性物质的吸收、高血钾、酸中毒、肾衰竭致心脏骤停,抢救成功的关键是尽早开通患者闭塞血管.     

耦合效应下联络通道解冻规律研究

结合上海长江隧道一号联络通道工程,在温度应力耦合控制方程的基础上,分别考虑自然解冻和人工强制解冻条件下对流散热、混凝土初衬、二衬水化热等影响因素,分析了土体内部温度场、冻土厚度的发展变化以及由于冻土的解冻产生的融沉效应.通过分析发现自然解冻条件下经过大约44 d冻土完全融化,衬砌混凝土的水化热对冻土的解冻影响较大;不考虑混凝土水化热的作用,至50 d冻土仅能解冻23%;由于冻土的融沉效应,联络通道区域整体沉降,通道中心竖向位移为-2 cm;采用强制解冻冻土解冻较快,仅需4.3d就可完全解冻,与冻结过程相反,双排管之间最先解冻,然后是内侧冻土,最后是外侧冻土.     

miR-18a对于成肌细胞胶原蛋白表达的影响

细胞外基质是骨骼肌微环境的重要组成,基质中胶原蛋白的过量表达,会导致骨骼肌纤维化,因此研究miR-18a对于成肌细胞胶原蛋白表达的影响具有重要意义。本研究利用实时荧光定量PCR、细胞划痕、组织切片HE染色等方法检测了肌肉损伤修复模型中miR-18a及胶原蛋白基因的表达变化以及在成肌细胞C2C12中过表达miR-18a模拟物后对胶原蛋白基因表达、细胞迁移和成肌细胞转分化的影响。结果表明,miR-18a及胶原蛋白的表达量会响应骨骼肌的损伤修复过程。在成肌细胞中,miR-18a的过表达会抑制胶原蛋白相关基因的表达。但miR-18a的过表达并不影响成肌细胞的迁移和向骨的转分化。因此miR-18a对于细胞外基质相关基因的研究,可以为骨骼肌损伤修复的治疗提供理论依据。