蚌蛙蛭抗凝血蛋白的分离及抗凝血特性

以超速离子和肝素琼脂糖亲和层析从蚌蛙蛭（Ｂａｔｒａｃｏｂｄｅｌｌａｋａｓｍｉａｎａ）的粗提取液中分离到２种抗凝血蛋白，抗凝血活性测定证明，这２种蛋白具有显著抑制凝血酶的活性而不具有抑制凝血因子Ｘａ的活性，亲和层析的蛋白洗脱峰与抑制凝血酶的活力峰相吻合，因此，蚌蛙蛭的抗凝血蛋白是属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白，这为进一步研究蚌蛙蛭抗凝血蛋白的抗凝血机理及其应用打下了基础。     

盐源山蛭抗凝血蛋白的分离及抗凝血特性分析

以肝素琼脂糖亲和层析和超速离心分离了盐源山蛭的抗凝血蛋白,抗凝血活性试验证明,该蛋白不抑制凝血因子Ｘａ的活性,而显著抑制凝血酶的活性,亲和层析的蛋白洗脱峰与抗凝血酶的活力峰相吻合,因此,盐源山蛭抗凝血蛋白属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白。     

几种水蛭抗凝血物质提取及活性分析

 研究3种提取方法对菲牛蛭不同处理品的抗凝作用,采用筛选的最佳提取方法分析了5种水蛭各处理品的抗凝血酶活性,并比较了3个不同地理分布野生菲牛蛭和2个不同饵料饲喂菲牛蛭各处理品的抗凝血酶活性。结果表明：丙酮浸提法在菲牛蛭各处理品中均具有最高的提取得率,所测抗凝血酶活性显著高于其他方法（P<0.05）;5种水蛭抗凝血酶活性测定结果显示非吸血蛭类的湿体匀浆液和干体无或微弱的抗凝活性,而吸血蛭类（日本医蛭和菲牛蛭）具有较高抗凝活性,且菲牛蛭的抗凝活性显著高于日本医蛭(P<0.01);不同地理分布野生菲牛蛭和不同饵料饲养菲牛蛭的湿体匀浆液、干体粉末和唾液腺分泌物抗凝活性均无显著差异（P>0.05）。研究表明菲牛蛭具有较强的体外抗凝血酶活性,且人工养殖对菲牛蛭的抗凝活性未产生不利影响。     

宽体金线蛭鲜品和干品提取物体外抗凝血活性研究

目的：研究宽体金线蛭鲜品和干品提取物的体外抗凝血活性.方法：不同浓度的两种提取物分别作用于大鼠血浆后,检测其对血浆PT、APTT、FIB及粘度的影响.结果：宽体金线蛭的2种提取物对血浆PT、APTT、FIB均有不同程度的影响,并呈现明显量效关系,对血浆粘度的影响不明显.结论：2种宽体金线蛭的提取物具有明显的抗凝活性,体外初步实验表明：鲜品宽体金线蛭的抗凝血活性略强于干品.     

抗凝血蛋白药物的研究进展

除了血液中的抗凝因子外，自然界中还存在大量具有抗凝活性的生物大分子，如水蛭素、蚯蚓纤溶酶等．基础研究证实这些抗凝刑的作用一般是通过三方面得以实现：一是抑制凝血酶及凝血酶活化因子活性；二是水解血纤维蛋白或纤溶酶原；三是抑制血小板凝聚．由于这些活性物质具有高效的抗凝、溶栓作用，它们极有可能发展成治疗血栓性疾病的药物．     

葛仙米多糖硫酸酯抗凝血活性研究

以取代度为0、0.51、1.01的葛仙米多糖硫酸酯为原料,探讨了各样品的抗凝血活性.结果表明:葛仙米多糖硫酸酯能显著延长人活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT),且具有一定的剂量效应关系,但对凝血酶原时间(PT)的作用不明显.说明其主要是通过抑制内源性凝血过程及共同凝血途径发挥抗凝血作用,对外源凝血途径影响较弱.     

提取技术对酸性黑木耳多糖抗凝血活性的影响

为明确超声波、微波、高剪切3种物理辅助提取技术对酸性黑木耳多糖抗凝血活性的影响,试验以抑制纤维蛋白原(FIB)转化纤维蛋白抑制率、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT) 4个指标为依据进行抗凝血实验,并通过对不同技术提取的酸性黑木耳多糖的结构及理化性质的测定,初步分析与抗凝血活性的相关性.结果表明,酸性黑木耳多糖对FIB的转化有明显的抑制作用,且可显著延长兔血浆的APTT值及TT值(p 0. 05),但对PT值影响不显著(p 0. 05),说明酸性黑木耳多糖是通过内源性途径和共同途径来实现抗凝血作用.对每种提取技术得到的酸性黑木耳多糖进行抗凝血活性比较研究发现,微波辅助15 min得到的多糖(W-Ac-AAP)具有最佳的抗凝血活性,当多糖的浓度为4. 0 g/L时,其APTT值为(125. 03±1. 64) s,TT值为(70. 39±0. 87) s;当多糖的浓度为2. 0 g/L时,其抑制FIB转化纤维蛋白的能力可达(0. 76±0. 05) g/L. 4种多糖在蛋白质含量、硫酸根含量上有显著性差异(p 0. 05),其中以抗凝血活性最佳的W-Ac-AAP的蛋白质含量最低,而硫酸根含量最高,具有最低抗凝血活性的普通碱提多糖(Ac-AAP)的硫酸根含量最低,说明多糖的抗凝血活性可能与硫酸根含量之间存在一定相关性.本研究可为开发天然植物抗凝血药物的处理方式提供理论参考.     

桑叶多糖的分离纯化及其抗凝血活性的研究

为了研究桑叶多糖不同组分在体外的抗凝血活性,采用水提醇沉法提取桑叶粗多糖,聚酰胺进行脱色和脱蛋白。用DEAE sepharose CL-6B 和 sepharose CL-6B 对桑叶多糖进行纯化,得到5种水溶性多糖组分(MPS-1、MPS-2a、MPS-2b、MPS-2c和 MPS-3)。单糖检测结果表明：桑叶多糖主要是由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和甘露糖等组成。体外抗凝血活性检测显示5种桑叶多糖组分均能延长活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)、而对凝血酶原时间(prothrombin time,PT)影响不显著,说明它们是通过影响内源性途径或共同途径而发挥抗凝血作用;与对照相比,MPS-2b在试验浓度范围内对 APTT 和 TT 的效果达到极显著,表明 MPS-2b 有潜力开发成抗凝血活性物质。     

纤维素硫酸钠的取代度与抗凝血活性的关系

纤维素硫酸钠(Na-CSMC)具有突出的抗凝血活性,为了研究硫酸酯基取代度(Ds)与其抗凝血活性的构效关系,需要构建具有不同Ds值的纤维素硫酸钠类似物化学库．文中采用酸水解和柱层析分离的方法,获得了同一相对分子质量下具有不同Ds值的Na-CSMC样品,研究了Na-CSMC的硫酸酯取代度对其抗凝血效果和对凝血因子抑制作用的影响规律．结果表明,在一定范围内,随着Ds值增大,Na-CSMC对活化部分凝血活酶时间(tAPPT)和凝血酶时间(trr)的延长作用增强,对凝血因子Ⅱa和Xa的抑制作用提高．     

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多肽

以DEAE－C52离子交换层析和SephadexG50凝胶过滤成功地从盐源出蛭（Haemendipsa yanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽，获得了蛋白质质量浓度为1.17mg.mL^-1，抗凝血酶比活性为152.78U.mg^-1的抗凝血多肽，证明了DEAE－C52离子交换层析和SephadexG50凝胶过滤是分离盐源山蛭抗凝血多肽的有效方法。     

基于小热休克蛋白-细胞穿膜肽蛋白纳米粒的siRNA递送系统

利用大肠杆菌表达系统原核表达并纯化小热休克蛋白-细胞穿膜肽融合蛋白（Hsp-Tat）; 用动态光散射和透射电镜成像分析Hsp-Tat纳米粒的粒径和形貌; 用噻唑蓝（MTT）法和活/死细胞染色法研究蛋白纳米粒的细胞相容性; 用凝胶阻滞实验检测纳米粒的小干扰RNA（siRNA）复合特性; 用激光共聚焦荧光显微镜成像研究蛋白纳米粒的siRNA胞内递送能力. 实验结果表明： 亲和层析得到高纯度的Hsp-Tat融合蛋白, 融合蛋白可自组装成40.2 nm空心球形结构; 蛋白纳米粒在HEK-293T细胞上显示出良好的细胞相容性; Hsp-Tat NP与siRNA形成的复合物可阻止siRNA在琼脂糖凝胶中迁移; Hsp-Tat 纳米粒能将Cy3-siRNA转运至细胞内, 可作为一种安全高效的非病毒核酸递送载体.        

野木瓜水溶性多糖的提取分离及鉴定

本文对纤维素酶法从野木瓜中提取水溶性粗多糖的工艺进行系统的研究,通过正交试验确定了最佳酶法提取条件：提取温度50℃,pH值4.0,提取时间2.5h, 酶用量3%。粗多糖经蛋白酶与Sevage法相结合脱蛋白、大孔树脂脱色及水浴透析,得到野木瓜水溶性精多糖CCP, 再经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱,得一种洗脱组分CCP1。纸层析和Sepharose Cl-6B色谱柱分析表明CCP1为多糖纯品;用苯酚-硫酸比色法测定该多糖的糖含量为97.3%;紫外光谱分析未见蛋白质（280nm）与核酸（260nm）的特征吸收峰;红外光谱分析具有典型多糖吸收峰。结果表明,CCP1是初次从该植物中提取分离出来新的均一多糖组分。     

Myotoxic activity of a Gln-49 phospholipase A_2 from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom

A novel myotoxic protein phospholipase A2(PLA2), denoted as Gln49-PLA2, has been isolated from snake venom of Agkistrodon blomhoffii ussurensis, which has weak lethal effect and apparent anticoagulant activity, but lacks the PLA2 and hemorrha-genic activity. Gln49-PLA2 obviously increases of plasma creatine-kinase (CK) upon intramuscular injection in mice, suggesting that it may induce a dose-dependent myonecrosis. Histological studies also reveal morphological changes in mouse skeletal muscles, including extensive myonecrosis, hemorrhage and neutrophil infiltration in the treated animals. The myotoxic ability induced by Gln49-PLA2 can be partially inhibited by heparin.     

重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性

从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占...     

基因工程法制备15N标记的蛋白质样品

为了用多维核磁共振方法解析蛋白质溶液构象奠定基础,在用基因工程法使天花粉蛋白在大肠杆菌中获得高效表达的基础上,用１５Ｎ标记了这种蛋白质并通过亲和层析方法进行纯化得到电泳纯的蛋白样品;测定了此蛋白对中期妊娠小鼠的止孕效应;在核磁共振波谱仪上测得了此蛋白的１Ｈ－１５Ｎ异核相关谱（ＨＳＱＣ）。结果表明,上述方法可以用于制备１５Ｎ标记的蛋白质样品。     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

黑豆中抗真菌蛋白的纯化及活性鉴定

利用硫酸铵分级沉降、亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从黑豆种子中分离出一种抗菌蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准蛋白迁移率与分子量对数的关系,计算出该抗菌蛋白的分子量为93.3 kDa,还原和非还原状态下均显示单一区带,说明该抗真菌蛋白为单倍体蛋白.抑菌试验结果表明,此纯化的蛋白对植物致病菌瓜果腐霉病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、葡萄灰霉病菌和菜豆根腐病菌等5种真菌的生长具有不同的抑制作用.     

酵母培养液中胰蛋白酶初探

利用鸡卵黏蛋白对于胰蛋白酶有天然抑制性的特点,从鸡蛋清中分离纯化了鸡卵黏蛋白,将其偶联至Sepharose 4B制作成亲和层析介质,用于从不同种类酵母,处于不同时间段的培养液中,分离纯化得到了具有胰蛋白酶活性的物质。由此初步证明了酵母培养液中确有可能存在胰蛋白酶。因此,利用酵母工程菌生产蛋白质的时候,若加入一定量的胰蛋白酶抑制剂,有可能提高目的蛋白的产率。     

Myotoxic activity of a Gln-49 phospholipase A2 from Agkistrodon blomhoffii ussurensis snake venom

A novel myotoxic protein phospholipase A₂ (PLA₂), denoted as Gln49-PLA₂, has been isolated from snake venom of Agkistrodon blomhoffii ussurensis, which has weak lethal effect and apparent anticoagulant activity, but lacks the PLA₂ and hemorrhagenic activity. Gln49-PLA₂ obviously increases of plasma creatine-kinase (CK) upon intramuscular injection in mice, suggesting that it may induce a dose-dependent myonecrosis. Histological studies also reveal morphological changes in mouse skeletal muscles, including extensive myonecrosis, hemorrhage and neutrophil infiltration in the treated animals. The myotoxic ability induced by Gln49-PLA₂ can be partially inhibited by heparin.