用^15N示踪标记法测定人工诱发黄瓜根瘤固氮酶活性

报道了用＾１５Ｎ示踪标记法对人工诱发黄大氮酶活性的测定结果，将长有人工诱发根瘤的黄瓜根系暴露在＾１５Ｎ２的气体中，部分根系浸在无氮培养液内，标记４８ｈ后，质谱分析测定结瘤黄瓜根＾１５Ｎ的丰度为０．４３１原子％＾１５Ｎ，样品为０３６９原子％＾１５Ｎ，对＾１５Ｎ示踪标记结果进行了统计学ｔ检验，ｔ＝３．１５〉６０．０１＝２．８１９，表明黄奶系根瘤内的细菌固氮作用所的氮与相比达９９．９％极显著性水平，同时     

~(13)C_6-酪氨酸标记的蛋清溶菌酶的表达及NMR测定

针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图.本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了p ET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌Ε. coli BL21(DE3)中,得到重组菌株.然后通过改变诱导温度、诱导浓度以及诱导时间等条件来优化HEL在大肠杆菌Ε. coli BL21(DE3)中的表达条件,通过SDS-PAGE电泳分析,确定了最佳表达条件:37℃、0. 4 mmol/L IPTG诱导8 h.按最佳条件于诱导前加入13C6-酪氨酸进行选择性标记,扩大表达,经过变复性处理与Ni柱纯化后,获得选择性标记的HEL.进一步制备标记蛋白核磁样品进行测定,得到简化的NMR谱.本研究为采用NMR简化分析蛋白质的结构奠定了基础.     

固相碘标记活化珠标记蛋白质研究

作者报道了利用其合成的固相碘标记活化珠碘标记蛋白质的方法和效果.考察了各种标记条件活化珠用量及粒径,pH值,温度,标记时间,体积及蛋白质对标记率的影响.结果显示,用此活化珠,碘标记条件温和,标记效率高,标记物稳定且对标记蛋白的损伤小,适用范围大.因此具有良好的应用前景.     

固相碘标记活化株标记蛋白质研究

作者报道了利用其合成的固相碘标记活化株碘标记蛋白质的方法和效果。考察了各种标记条件：活化株用量及粒径，PH值，温度，标记时间，体积及蛋白质对标记率的影响。结果显示，用此活化株，碘标记条件温和，标记效率高，标记物稳定且对标记蛋白的损伤小，适用范围大，因此具有良好的应用前景。     

3,7—二（二甲氨基）—10—氢—二苯并碘六环硝酸稀土配合物？…

合成了通式为（Ｃ１７Ｈ２０Ｎ２Ｉ）２ＲＥ（ＮＯ３）５的一个系列１５种碘杂环硝酸稀土配合物，通过元素分析，紫外光谱，红外光谱，核磁共振谱，热重－差热分析，摩尔电导，Ｘ射线粉末衍射分析和磁矩测量等配合物的性质和结构进行了表重。     

高转移的人卵巢癌细胞遗传学研究

本文对自建的人卵巢癌细胞系（ＨＯ－８９１０）和用该细胞建成的高转移人卵巢癌裸鼠皮下移植癌模型（ＮＳＭＯ）进行了细胞遗传学的比较研究。结果提示：两株细胞均属超二倍体核型，众数为５４条。１、３、１５和２２号染色体常见缺失，１０、１６、１９和２２号染色体常见增加，部分核型中Ｘ染色体有１条缺失，同时发现由１、３、１３、１４和１５号染色体异常而形成的４个标记染色体。ＨＯ－８９１０核型不同的特征是除了４个出现频率较高的标记染色体外，还可见一些其他异常染色体，而ＮＳＭＯ核型中只出现与ＨＯ－８９１０同样的４个标记染色体，很少见有其他异常的染色体，这４个标记染色体可能是高转移卵巢癌独特的遗传特征，这对深入探讨卵巢癌病因和癌变机理有其重要意义。     

3，7－二（二甲氨基）－10－氢－二苯并碘六环硝酸稀土配合物的合成性质及结构

合成了通式为（Ｃ１７Ｈ２０Ｎ２Ｉ）２ＲＥ（ＮＯ３）５的一个系列１５种碘杂环硝酸稀土配合物．通过元素分析、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、热重—差热分析、摩尔电导、Ｘ射线粉末衍射分析和磁矩测量等对配合物的性质和结构进行了表征     

天然气中分子氮成因及判识

天然气中分子氮（Ｎ２）的成因复杂多样,其同位素组成和其它地球化学特征各不相同。（１）大气源的Ｎ２：ＣＮ２／ＣＡｒ≤８４,且δ１５ＮＮ２≈０‰（ＡＴＭ）;（２）地壳超深部和上地幔来源的原生Ｎ２：δ１５ＮＮ２≈－２‰～＋１‰,伴生Ａｒ的４０Ａｒ／３６Ａｒ＞２０００和Ｈｅ的３Ｈｅ／４Ｈｅ＞１０－６,且Ｎ２和Ｈｅ含量具有正相关性;（３）微生物反硝化作用生成的Ｎ２：δ１５ＮＮ２＜－１０‰和地下水中ＮＯ－３及ＮＯ－２浓度异常高;（４）沉积有机质在未成熟阶段经微生物氨化作用形成的Ｎ２：δ１５ＮＮ２＜－１０‰;伴生ＣＨ４的δ１３ＣＣＨ４＜－５５‰（ＰＤＢ）;（５）沉积有机质在成熟（包括高成熟）阶段经热氨化作用形成的Ｎ２：δ１５ＮＮ２≈－１０‰～－１‰,且伴生ＣＨ４的δ１３ＣＣＨ４≈－５５‰～－３０‰;（６）沉积有机质在过成熟阶段裂解产生的Ｎ２：δ１５ＮＮ２≈＋５‰～＋２０‰;（７）沉积岩中无机氮在高温变质作用下释放出的Ｎ２：δ１５ＮＮ２≈＋１‰～－３．５‰,ＣＮ２／ＣＡｒ８４．对这些潜在源的特征进行了综合论述。     

PECVD α—SiNx：H的^1H NMR研究

用质子核磁共振（＾１Ｈ ＮＭＲ）方法对等离子体化学气相沉积非晶氢化氮化硅薄膜进行测量，分析膜中Ｈ的含量和分布与沉积温度、射频功率等工艺条件的关系，以及退火的影响。     

PLT15薄膜热释电红外传感器的研制

用射频磁控溅射法在Ｐｔ／Ｔｉ／ＳｉＯ２／Ｓｉ（１００）结构衬底上沉积了高度Ｃ轴取向Ｌａ改性的ＰｂＴｉＯ３（ＰＬＴ１５）薄膜．研究了ＰＬＴ１５薄膜的电晕极化方法,用此方法同时对多个热释电敏感单元进行了极化．利用ＰＬＴ１５薄膜制备了热释电红外传感器,薄膜厚度是２μｍ,真空蒸发的Ｎｉ－Ｃｒ电极面积为１．２ｍｍ×１．０ｍｍ,敏感元下的Ｓｉ（１００）基片用热ＫＯＨ和ＥＰＷ进行刻蚀．用所设计的热释电系数测试系统对ＰＬＴ１５薄膜样品进行了测试,研究了其热释电特性．测试结果表明,ＰＬＴ１５薄膜样品的热释电电流ｉｐ平均为２．１×１０－１１Ａ,而对应的热释电系数ｐ为２．５２×１０－８Ｃ·（ｃｍ２·Ｋ）－１．这类薄膜很适合制备红外传感器     

Three-dimensional heteronuclear NMR studies of RNA.

Multidimensional heteronuclear NMR has revolutionized solution structure determinations of proteins. But this technique has not been applied to nucleic acids because of difficulties in the synthesis of isotopically (13C and/or 15N) labelled molecules. Here we report the application of three-dimensional heteronuclear NMR to the study of a uniformly 13C/15N or 15N-labelled RNA duplex of defined sequence. These experiments simplify resonance assignment and the analysis of proton-proton nuclear Overhauser effects (and therefore distance information) in the molecule. Our results show that it is now possible to determine the structures of larger and more complex RNAs using multidimensional heteronuclear NMR.     

非结构蛋白NS1-ELISA检测禽流感野毒感染抗体

利用RT-PCR技术扩增获得了H5N2亚型禽流感病毒的NS1基因,ORF长度为678 bp。成功构建了重组表达载体pET-NS1,将其转化BL21(DE3),用终浓度1 mmol／I的IPTG诱导表达5 h,经15％的SDS-PAGE分析表明,诱导表达出了分子量大约为28 KD的 NS1融合蛋白,且以包涵体的形式存在,NS1融合蛋白经His trap Hp Kit柱子纯化或用尿素变性复性,获得纯度较高的NS1蛋白,并以此为抗原,建立了检测抗NS1蛋白抗体的ELISA(NS1-ELISA)方法。最佳包被浓度为2．5μg／ml,血清的最佳稀释倍数为1:200, 酶标二抗的最佳工作稀释度为1:5 000。重组NS1蛋白只与AIV感染的血清反应,而不与ND、IB、IBD、EDS76的阳性血清反应。分别检测H9N2、H5N2和H5N1亚型灭活疫苗和H9N2纯化病毒免疫的血清,各5份,其平均OD490值分别为0．225、0．210、0．205和0．184．均为阴性;而对H9N2和H5N2亚型活毒感染10-15 d的血清进行检测,各5份,其平均OD490值分别为0．610和0．619,均为阳性。因此,NS1蛋白能特异地区分野毒感染和灭活疫苗免疫鸡群,可作为一种鉴别诊断标记,但不能区分亚型．具有A型特异性。NS1-ELISA 方法的初步应用,不仅为生产提供了一种快速、特异、敏感的鉴别诊断方法,为进一步组装成试剂盒奠定了基础,也为禽流感的早期诊断、适时监控和净化提供了行之有效的方法。     

Structure of a protein determined by solid-state magic-angle-spinning NMR spectroscopy

The determination of a representative set of protein structures is a chief aim in structural genomics. Solid-state NMR may have a crucial role in structural investigations of those proteins that do not easily form crystals or are not accessible to solution NMR, such as amyloid systems or membrane proteins. Here we present a protein structure determined by solid-state magic-angle-spinning (MAS) NMR. Almost complete (13)C and (15)N resonance assignments for a micro-crystalline preparation of the alpha-spectrin Src-homology 3 (SH3) domain formed the basis for the extraction of a set of distance restraints. These restraints were derived from proton-driven spin diffusion (PDSD) spectra of biosynthetically site-directed, labelled samples obtained from bacteria grown using [1,3-(13)C]glycerol or [2-(13)C]glycerol as carbon sources. This allowed the observation of long-range distance correlations up to approximately 7 A. The calculated global fold of the alpha-spectrin SH3 domain is based on 286 inter-residue (13)C-(13)C and six (15)N-(15)N restraints, all self-consistently obtained by solid-state MAS NMR. This MAS NMR procedure should be widely applicable to small membrane proteins that can be expressed in bacteria.     

Trichosanthin can spontaneously penetrate phospholipid monolayer under acid condition

Tianhuafen is a kind of traditional Chinese medicine for abortion, which has long been used in China. The basic protein trichosanthin (TCS) is responsible for such activity. As a ribosome inactivating protein (RIP), trichosanthin removes A4304 in the 28s rRNA via the N-glycosidase activity and inactivates the ribosome. However, it remains unclear how TCS can enter the cytoplasm. In the experiment, monolayers at air/water interface have been used to study the interaction between TCS and phospholipid membrane. The results show that TCS can penetrate negatively charged phospholipid monolayer under acid condition, and its membrane penetrating ability is obviously pH-dependent. A hypothesis of TCS penetrating biological membrane under acid condition is proposed based on the obtained result.     

鸡白细胞介素2基因的克隆、原核表达及功能研究

以RT-PCR法从鸡脾脏细胞中扩增出鸡白细胞介素2编码基因,通过双酶切、连接步骤克隆进原核表达载体pQE30及pGEX-4T-3,构建了鸡白细胞介素2基因的重组原核表达质粒pQE30-chIL-2及pGEX-chIL-2.重组质粒转化大肠杆菌JM109后经诱导表达,分别得到两种表达产物.以SDS-PAGE和Westernblot检测确认表达产物为带6组氨酸标签及GST蛋白的融合鸡白细胞介素2,分子量分别为16 kDa及39.5 kDa.表达蛋白与抗鸡白细胞介素2单抗均有良好的免疫结合性,进一步证实为鸡白细胞介素2.表达产物经过纯化复性后,具有明显促进鸡脾淋巴细胞增殖的作用.     

人白细胞介素-15表达菌株的构建

从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出白细胞介素15(IL-15)基因.构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET28c(+)-IL-15).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒(pET28c(+)-IL-15)含有IL-15基因.经Western blot鉴定证实为IL-15,并实现了在大肠杆菌中的高效表达.表达产物占菌体总蛋白的32%,从而为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定了基础.     

人穿孔素羧基端肽段的表达纯化与活性鉴定

穿孔素,即成孔蛋白（pore forming protein,PFP),其溶细胞作用与免疫调节和自身免疫病以及其它多种疾病过程中的免疫性病理损伤相关。为得到足够量的PFP建立与之相关的免疫学研究手段用于基础和临床研究,在已克隆人PFP cDNA的基础上,用基因工程方法表达了人PFP C端124个氨基酸肽段（hPFP-C),并通过谷胱甘肽琼脂糖新和层析获得纯化的GST/hPFP-C融合蛋白,经凝血酶酶切和再次北极和层析去除GST部分,得到了纯化的hPFP-C蛋白。纯化的hPFP-C蛋白与兔红细胞共育,呈现钙依赖的溶血活性。     

人野生型p53基因的克隆及原核表达

利用RT PCR方法由人外周静脉血淋巴细胞中获得人p53 cDNA片段, 并将其克隆入原核表达载体pQE40中, 构建重组质粒pQE40-p53; 转化于E.coli M15宿主菌, 经IPTG诱导, 表达了N端融合6His的p53融合蛋白. 利用6His与Ni²⁺高亲合力结合的性质, 经镍柱纯化、 透析袋分级透析复性、 Western Blot鉴定, 结果表明获得了纯化的6His-p53融合蛋白.
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新基因Splt137在大肠杆菌中的表达及抗体制备

用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化 ,免疫家兔制备了抗Splt137抗体。Western免疫印迹分析表明 ,该抗体适合用作Splt137蛋白的进一步分析。     

传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．