无花果曲霉植酸酶发酵及酶动力学

目的：研究野生型无花果曲霉植酸酶的动力学性质。方法：通过限制培养基中的无机磷,无花果曲霉发酵获得植酸酶。纯化后,对酶的动力学性质进行了研究。结果：该酶作用底物植酸钠的Km值为64．7μmol/L,对于植酸钠,植酸酶的最适反应pH为5．5温度为50℃。结论：无花果曲霉植酸酶在pH3.5－8．040℃以下比较稳定;不同的金属离子螯合剂对酶活性影响不一样,Ca^2 对酶活力有轻微的激活作用,Al^3 几乎无影响,Mg^2 、Fe^2 、Cu^2 对酶活力有抑制作用,Co^2 、Hg^2 、EDTA有较强的抑制作用。     

工程纤维素酶降解工艺条件研究

本实验所用的纤维素酶是把一种绿色曲霉的纤维素酶基因导入大肠杆菌后所表达产生的。考察纤维素酶的降解工艺条件,结果表明,该纤维素酶的最适反应温度为55℃,最适作用的pH值为5.5和8.0,Vm=2.78μmol/(L?min),Km=34.5μmol/L,在50℃保温40min仍有90%的酶活;Ca2 有轻微的激活作用,Hg2 有强烈的抑制作用,Fe2 ﹑Mg2 ﹑Cu2 ﹑EDTA有一般的抑制作用。     

CuTAPc-Fe3O4纳米复合粒子的性质和固定化漆酶性质研究

研究了CuTAPc-Fe3O4复合粒子的磁性能、热稳定性、抗氧化性、溶解性和贮存稳定性，表明由于CuTAPc在Fe3O4纳米粒子表面形成了复合层，显著提高了CuTAPc-Fe3O4复合粒子的稳定性．将CuTAPc-Fe3O4复合粒子作为载体，在0℃以pH5．0的2mg／mL漆酶磷酸缓冲液为应用液进行漆酶固定，固载率为20％；以ABTS作为底物，固定化漆酶的最适pH为3．0，最适催化温度为45℃，Km值为23．8μmol／L．     

植酸酶高活性菌株的选育及酶性质的初步研究

以本实验室筛选的一株米曲霉为出发菌株，通过紫外线诱变，并经过初筛、复筛等步骤而得到一株植酸酶高产菌株，酶活约提高１５６％，最高酶活达２４０Ｕ／ｍｌ粗酶液，７２ｈ左右达到产酶高峰期．植酸酶的最适温度为５６℃，最适ｐＨ为５．５；Ｆｅ２＋、Ｚｎ２＋、Ａｌ３＋对其酶活有强烈的抑制作用，而Ｍｇ２＋和ＥＤＴＡ在浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ时有激活作用     

米曲霉(Aspergillus oryzae)植酸酶的分离纯化及性质研究

从5株霉菌中筛选出1株产胞外植酸酶最高的菌株(Aspcrgillusoryxae;简称霉菌3号)。经发酵,硫酸铵分级沉淀,Sephadex G—100凝胶过滤、SE—Sephadex G—50层析和电泳分离,获得2种植酸同工酶.此两种酶的分子量为40000d,等电点分别为4.5和4.8,最适pH为2.7和5.6,最适温度为50℃,K_m值为50μmol/L。SDS、Fe_~(2+)对酶活力无影响;Mn~(2+)、Ca~(2+)、Mg~(2+)有激活作用;Cu~(2+)有抑制作用。     

用PCR扩增裸甲藻和微小原甲藻rRNA基因的方法研究

以赤潮种裸甲藻(Gymnodinium sp．)和微小原甲藻(Prorocentrum minimum)为试验材料，以不同方法提取其基因组并进行纯化，然后采用PCR方法扩增其rRNA基因，包括18S，28S和ITS片断，并进行扩增条件的比较和优化，得到两种藻的最佳DNA提取条件和PCR扩增条件．裸甲藻和微小原甲藻的DNA提取宜采用改良的CTAB方法；并需对粗提取的DNA用CTAB方法进行纯化．两种藻的最适模板浓度为纯化后模板1．0～2．0μL；最适Mg^2 浓度为2．0μL(25mmol／L)；ITS引物PCB扩增的退火温度为50℃，而18S三对引物的退火温度均为55℃，28S的退火温度为54℃最为适宜。     

白毒鹅膏菌胞外漆酶的部分酶学性质研究

从威海市玛珈山上获得白毒鹅膏菌，在对其产酶条件研究的基础上，研究了pH值、温度、无机离子对白毒鹅膏菌漆酶活性和稳定性的影响，测定了漆酶的Km值。结果表明：Ba^2＋、Cu^2＋、、SO4^2-离子对漆酶有激活作用，而Ag^2＋、Cl^-、Fe^3＋离子则有抑制作用，该酶最适pH为4.6，在pH 5.0-5.4表现出较强的稳定性；最适反应温度为20℃，低于60℃时有较好的热稳定性；以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为66.7μmol/L。     

纤维蛋白溶解酶原的纯化及性质

人血浆组分Ⅲ经Lys－Sepharose4B和SephadexG－200柱层析分离，得到分子量为90000的纯品纤维蛋白溶解酶原（HPg）．其作用的最适PH、温度、离子强度分别为6.0，25℃和0．05mol／L．Zn2＋对HPg活性有明显抑制作用；Mg2＋，Li＋，Ca2＋等离子显示了不同程度的激活作用．     

几种铈盐的热分解过程及非等温热分解动力学研究

利用TG—DTG—DTA热分析技术研究了二水合碳酸亚铈、九水合草酸亚铈、六水合硝酸亚铈三种铈盐的热分解过程．发现二水合碳酸亚铈在75-180℃下脱去2mol水生成无水碳酸亚铈，后者在220—300℃下分解脱去CO2生成CeO2；九水合草酸亚铈在100-180℃下脱去9mol水生成无水草酸亚铈，后者在290—380℃下分解并同时脱去CO和CO2生成CeO2；而六水合硝酸亚铈在60—80℃下首先脱去3．5mol水生成含2．5个结晶水的硝酸亚铈，后者在190-250℃下脱去2．5mol结晶水生成无水硝酸亚铈，在258—310℃下硝酸亚铈热分解脱去NO2和O2并生成CeO2．采用外推法研究了九水合草酸亚铈两步热分解过程的动力学，由不同升温速率下的热分析曲线及外推β→0获得了相应的固相热分解反应所遵循的分解机理及动力学参数．发现九水合草酸亚铈脱水过程遵循球形对称的三维扩散机理，即Jander方程G（α）=G（α）=[1-（1-α）^1/3]^2，动力学参数E=180．9kJ／mol、lnA=63．5s^-1；而脱CO和CO2过程遵循成核和生长机理，即Avrami-Erofeev方程G（α）=[-ln（1-α）]^1/1.5，动力学参数E=115．4kJ／mol，lnA=22．0s^-1．     

在淀粉液态培养基中生产枯草杆菌α-淀粉酶的研究

以枯草杆菌（Bacillus subtilis BF7658）为实验菌株，以淀粉为主要原料，采用液态培养基发酵，生产α-淀粉酶．结果表明：（1）在23℃至44℃内，培养基起始pH值为自然pH，产酶最适培养温度为37℃；（2）枯草杆菌在淀粉液态培养基中37℃，振荡培养，其产酶最适淀粉与水组成比例为：75：100；（3）在最适温度37℃下，淀粉：水为75：100时，最适培养时间为36h．     

南美白对虾丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究

通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose、Phenyl-Sepharose、Hydroxyapatite、Superdex 75等方法,从南美白对虾消化腺中分离得到一种丝氨酸蛋白酶.SDS-PAGE结果显示,其分子质量约为28 ku,最适pH值与最适温度分别为9.0和40℃,且pH值在7.0~10.0之间以及温度在40℃以下有较高的稳定性.底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶.动力学实验显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,Km=0.69μmol/L,Kcat=0.33 S-1,Kcat/Km=4.78×105(mol/L)-1S-1.     

兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重PCR检测方法的建立

目的 建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重PCR方法。方法 本研究参考Pm kmt1基因、Sa nuc基因和Kp kh1基因的保守区域，设计3对特异性引物，以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法优化引物浓度，构建kmt1、nuc和kh1基因的重组质粒标准品pMD-Pm、pMD-Sa和pMD-Kp,确定最小检测量；以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等9种病原体核酸样本确定多重PCR法的特异性；通过批间和批内实验验证其重复性；经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行比较，评估其临床应用效果。结果 最适退火温度为54.5℃;扩增kmt1和nuc基因的引物最适浓度均为1μL(10μmol/L),扩增kh1基因的引物最适浓度为0.5μL(10μmol/L);pMD-Pm最低检测限为20.6 copies/μL,pMD-Sa最低检测限为18.2 copies/μL,pMD-Kp最低检测限为23.2 copies/μL,表明其灵敏性高；该方法仅对Pm、Sa和Kp有特异性扩增条带，对其他病原体均无扩增条带，表明特异性较强；...     

蒜头果(Malana oleifera)幼苗的光合生理生态特征

利用C02光合测定仪分析了引种栽培的蒜头果幼苗叶片的光合补偿点和饱和光强,通过控制叶室的光合有效辐射、C02浓度、温度和相对湿度,分析了叶片的羧化效率和CO2补偿点,并进行光合有效辐射、温度或相对湿度对光合速率影响的研究.蒜头果幼苗叶片光补偿点的光强为8.1μmol.m-2.s-1,饱和光强约为750μmol.m-2.s-1.叶片的羧化效率为0.022 67,CO2补偿点为53.2μmol.mol-1.叶片光合速率在25℃时达到最大值,最适温度为18~31℃.相对湿度在20%~80%的范围内,叶片光合速率随湿度增加而增大,最适相对湿度条件在50%以上.     

滇重楼光合作用与环境因子的关系

 利用LI-6400光合测定仪和人工气候箱研究了滇重楼叶片的光合补偿点、光合饱和点、羧化效率和CO₂补偿点,并进行温度、相对湿度对光合速率的单因子影响研究.滇重楼叶片的光合补偿点为5.7μmol/(m²·s),光合有效辐射增至2000μmol/(m·s)²仍未测到光合饱和点,最适光合有效辐射为750～2000μmol/(m·s)².叶片的羧化效率为0.0295,CO₂补偿点为65μmol/mol,光合速率随CO₂浓度升高而明显增加,高于大气正常值的CO₂浓度对增加滇重楼光合作用的光能利用率是有利的.光合速率在温度11～20℃范围内,随温度升高上升;20～35℃随温度升高下降,最适温度为16～28℃.相对湿度20%～85%的试验范围内,叶片光合速率随湿度增加而增大,最适相对湿度条件在75%以上.     

柠檬黄的ELISA检测方法的建立

利用免疫学基本原理，获取抗柠檬黄的单克隆抗体，以此建立了从食品中检测柠檬黄的间接竞争ELISA．试验表明：OVA—TE最适包被浓度为1μg／mL；酶标抗体最适工作浓度为1：3000；酶标抗体的作用温度和时间分别为37℃，lh；封闭液为1％明胶；底物显色时间为15min；对柠檬黄的最低检出量为26．34ng／mL；抗体的最适稀释倍数为1：12000倍；对该方法进行交叉性试验和重复性试验，结果表明此法是一种特异、灵敏、快速的检测方法，并适合大批量样品检测．     

枯草杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

采用DEAE—Sephaurose离子交换层析，Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术，对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化，纯化倍数为112．3倍，比活为1．46U／mg，回收率为8．2％，纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带，测得全酶相对分子质量为107kD，具有两个分子量相同的亚基，亚基相对分子质量为51kD，最适pH值为8．0，最适温度为30℃，对热不稳定，以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物，其Km值分别为Km1(NADP^ )=19．8μmol／L和Km2(6-GPA)=22．6μmol／L，在5mmol／L～50mmol／L浓度范围内，Mg^ ，Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用，Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用，K^ ，Na^ ，Cl^-，NO^-3，SO^-4对酶几乎没有影响，用PMSF，TNBS，NBS，DTT和BrAc对酶进行修饰，实验结果表明，丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。     

凝血酶活力影响因素的初步研究

为探讨凝血酶的最佳作用条件，提高其止血效果，以标准凝血酶为原料，在不同温度、pH值、Ca^2 浓度、底物浓度和酶浓度下研究其酶活性的变化。结果显示：凝血酶的最佳作用温度为37℃，最适pH值为7到9，最适Ca^2 浓度为0．01mol／L，纤维蛋白原浓度为0．1％，凝血酶浓度为1u／mL。     

植酸酶液体发酵条件及酶学性质的研究

植酸酶产生菌黑曲霉 90 3(Aspergillusniger)的最适产酶条件 :初始pH5 .0～ 6 .5 ,温度2 9± 1℃ ,培养时间 4d ,2 5 0ml三角瓶发酵液的装量为 5 0ml,一定量的Fe2 +和Mn2 +对产酶有促进作用 ;酶的最适作用pH为 5 .5～ 6 .0 ,最适作用温度为 37℃ ,该酶在 pH3.0～ 7.0 ,温度 30～ 5 0℃时稳定性较好。     

转植酸酶基因海水小球藻生理生化的初步研究

从42个转植酸酶基因小球藻单克隆藻株中筛选出植酸酶产量较高的8个株藻,经过7次传代,各藻株的植酸酶活保持在稳定的状态,证实植酸酶基因在小球藻中获得了稳定表达.对转基因小球藻所产生植酸酶的性质进行了初步研究,结果表明此酶最适作用pH值为3.8和6.0,最适作用温度为65℃.在相同培养条件下,转基因藻与未转基因藻生理指标并无明显差异,说明外源植酸酶基因的转入对小球藻的生长及生理指标无明显影响.     

康氏木霉木聚糖酶的分离纯化及特性

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐和Sephadex G-100凝胶色谱等分离纯化技术，从康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵液中分离出木聚糖酶，纯化后的木聚糖酶经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳鉴定为单一组分，其相对分子质量为55208．所得的木聚糖酶的最适反应温度为65℃，pH值为6．0．该酶稳定性较好，在30—60℃下放置2h能保持83％以上的酶活；在3．0-10．0的pH值范围内能保持85％以上的酶活．研究表明：金属离子Ba^2＋，Pb^2＋，Fe^2＋，Fe^2＋，Al^3＋和高浓度（12mmol/L）的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L的Cu^2＋对该酶反应有促进作用．该木聚糖酶作用于Birchwood木聚糖的米氏常数为5．37g/L，最大反应速率为0．94μmol／min．