PCR技术详解及分析

介绍了PCR技术的发展过程、工作原理、反应要素、应用及质控条件,并对常见PCR技术问题进行了深入分析,同时也对新发展起来的PCR技术(荧光PCR、交转录PCR、原位PCR、单细胞PCR等)做了介绍,并提出了关健性的解决方法。     

巢式PCR检测献血者HTLV-IDNA方法的建立与应用研究

该成果应用巢式PCR对献血者HTLV-IDNA进行了检测，开发了检测试剂。为血站系统、医院临床提供了灵敏、实用的检测HTLV-I方法奠定了基础，在HTLV-DNA的快速提取、引物设计、PCR反应体系的组成、PCR扩增条件参数优化等方面均有独创性。该技术的建立及检测试剂的开发，     

荧光定量PCR技术及其在预防兽医学研究中的应用

荧光定量PCR（fluorescencer quantitive polymerase chain reaction,FQ-PCR）技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。该技术具有实时监测、快速、灵敏、精确等特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围。本文综述了FQ-PCR技术的基本原理及其在预防兽医学研究中的应用。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

实时荧光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）是把酶动力学、核酸扩增与杂交、光谱分析和实时检测技术巧妙结合的一项技术；并且广泛应用于病毒学、遗传性疾病、肿瘤和癌症的诊断等方面．因此成为分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术研究进展及其应用做一综述．     

荧光定量PCR技术及其在动物病毒病定量检测中的应用

荧光定量PCR技术是一种核酸定量技术,该技术在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.该技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等特点,因此在动物病毒病的检测中,荧光定量PCR技术不但能定量检测病原体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵敏、快速、省力的特点.     

PCR-SSCP标记技术研究及应用进展

PCR－SSCP（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Comformation Polymorphism,聚合酶链反应－单链构象多态性）是基于PCR的单链构象多态性分子标记技术，可用于DNA已知突变或未知变异分析。该技术具有快速、简便、灵敏的特点，可有效检测出碱基置换、缺失、插入等基因变异。本文介绍了该技术的原理，技术改进及其应用的新进展。     

采用基因芯片技术筛查农作物转基因背景

采用基因芯片技术对转基因作物中常见的启动子、终止子和选择标记基因等多个外源基因进行检测，以建立一套快速、准确的转基因作物筛查鉴定技术．通过对大豆、玉米、油菜、棉花等农作物样品的检测，并由常规PCR技术进行验证，证实基因芯片的检测结果准确可靠，并提高了检测效率，因此，可用于农作物转基因背景的鉴定．     

黑熊研究中DNA分析方法的应用概述

就常规的分子遗传学分析技术（如PCR，RFLP，SSR等）对黑熊的遗传多样性，种群数量估计，进化关系，个体鉴定，性别鉴定等方面的应用现状予以概述。     

食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

运用实时荧光PCR(Real-time PCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法，设计的引物和探针的序列特异性强，省去凝胶电泳的繁琐，降低了污染的可能性，在对26种病原菌进行检测过程中，运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较，结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌，更快速、敏感、特异性更高。     

PCR技术检测α地中海贫血

应用PCR技术检测18例α地中海贫血，与常现实验室方法比较，结果提示：PCR技术具有快速、特异、灵敏度高的优点，适用于产前诊断、遗传病咨询．     

定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用

食源性疾病发病率的提高及食品安全问题对人们健康造成的危害,引起世界范围内加强对食品安全、卫生及质量的关注。通过聚合酶链反应(PCR)技术在食源性致病微生物检测中的应用,提高了检测的有效性,PCR技术的发展也经历了多个发展阶段,即常规PCR检测、多重PCR检测、荧光定量PCR检测阶段。本文主要对荧光定量PCR检测技术进行分析,探讨定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用。     

一种DNA侧翼序列分离技术--TAIL-PCR

在分子生物学研究中，基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知DNA序列邻近的未知序列，热不对称交错PCR(简称TAIL—PCR)反应技术能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环，利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段，所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。TAIL—PCR技术简单易行，反应高效灵敏，产物的特异性高，重复性好，能够在较短的时间内获得目标片段，已经成为分子生物学研究中的一种实用技术。笔综述了TAIL-PCR反应的原理、引物设计、反应条件设置及产物分析。     

菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较

为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株,并和常规PCR方法比较,初步建立了菌落PCR技术;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性．通过比较,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致,两种方法均能扩增出阳性对照标准菌株中tlh和tdh基因．     

分子生物学方法在微生物生态学研究中的应用

由于传统分离培养微生物的局限，分子生物学技术避开了传统微生物培养分析的环节，直接从样品中抽取总DNA，然后通过PCR扩增及其相关技术、核酸杂交技术、RNA基因序列分析等方法对直接提取的总DNA进行分析，了解其中微生物信息．这些通过遗传物质进行研究的分子方法，为微生态的研究开辟了新的途径，并已经得到广泛的应用．     

聚合酶链反应对性传播疾病病原体检测的意义

应用聚合酶链反应技术（PCR）对184例男性性传播疾病进行检测，检出单纯淋菌感染79例（43％）；衣原体感染42例（22．8％）；解脲支原体感染28例（15．2％）；混合感染26例（14．1％），认为PCR技术对STD的诊断具有快速、准确的效果。     

套式PCR检测斑节对虾白斑症病毒（WSSV）

解剖患白斑症斑节对虾的鳃组织，制备成不同释放倍数的模板，对其进行白斑症病毒（WSSV）的PCR扩增，结果显示所建立的套式PCR的灵敏度大约为一步PCR的10^4倍；对感染病毒后不同时期的斑节对虾进行PCR检测，发现感染早期经一步PCR检测为WSSV阴性的样品，套式PCR的检测结果为阳性；对发病虾塘中的几种甲壳类动物进行PCR检测，发现经一步PCR检测为阴性的长臂虾、秉氏厚蟹和褶痕相手蟹等宿主，套式PCR的检测结果为阳性。表明所建立的WSSV套式PCR检测法较普通的一步PCR有更大的应用价值和意义。     

分子生物学方法在微生物生态学研究中的应用

由于传统分离培养微生物的局限，分子生物学技术避开了传统微生物培养分析的环节，直接从样品中抽取总DNA，然后通过PCR扩增及其相关技术、核酸杂交技术、RNA基因序列分析等方法对直接提取的总DNA进行分析，了解其中微生物信息．这些通过遗传物质进行研究的分子方法，为微生态的研究开辟了新的途径，并已经得到广泛的应用．     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

PCR技术简介及其应用

目前，PCR已成为实验室中的一项常规技术，是分子生物学家们不可缺少的工具，本文介绍了PCR的历史、反应原理及这项技术在目的基因的制备、医学诊断、法医学鉴定、古生物学和生态学研究中的广泛应用。     

聚合酶链式反应（PCR）技术研究新进展

聚合酶链式反应(PCR)在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用．文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述,其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用．