双链置换探针实时PCR用于DNA池的等位基因频率测定

结合荧光双链置换探针的特异性和实时PCR的准确定量能力,建立了一种新颖、准确、价廉且高通量的测定DNA池等位基因频率的方法.该方法采用不同荧光标记的双链置换探针1次PCR反应即可测定出等位基因频率.实验以β 地中海贫血CDs41 42( TCTT)突变为对象,分别用荧光染料FAM和ROX标记野生型和突变型探针,由实时PCR检测建立的等位基因浓度与循环阈值的响应曲线计算DNA池的等位基因频率.结果表明,建立的系列等位基因浓度与循环阈值呈线性关系,线性相关系数分别为0.9977(野生型等位基因)和0.9938(突变型等位基因),可检测的最低等位基因频率达1%,等位基因频率在1%～90%范围内测定误差小于4%.该方法可广泛用于流行病学调查、遗传连锁分析以及全基因组连锁不平衡扫描等领域.     

用荧光双链引物特异扩增并定量核酸

描述了一种利用特殊的双链引物－－突触引物，用于核酸扩增的特异定量检测，在传统的引物的5'端标记荧光物质，而在引物的互补序列的3'端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸。二者杂交即成双链突触引物。在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期，突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增，在退火阶段，突触引物部分解链导致引物延伸，荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光。利用人β珠蛋白基因对此方法进行了验证。这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增，同时比常规的热启动PCR更有效地提高了扩增的特异性。     

用细胞电泳技术检测化疗药物电性

细胞电泳技术可用于研究氟尿嘧啶(5FU),甲氨喋呤(MTX)和环磷酸胺(CP)等药物的电性,用戊二醛化绵羊红细胞(SRBC)为载体,分别吸附3种化疗药物,均可以导致细胞表面电荷下降致使电泳缓慢率为:5 FU 14.55％,MTX 13.77％,CP 12.21％,这3种药物均带正电荷,此研究对电化学疗法结合化疗治疗恶性肿瘤有参考价值。     

正交设计—流动注射荧光光谱分析法研究：过氧化物酶测…

采用正交设计－流动注射荧光光谱分析法，对测定过氧化物酶体系的各影响因素进行了正交直观分析和方差分析，结果表明：对羟基苯丙酸是影响反应的显性因素，十六烷基三甲基溴化铵对反应有增敏作用，并对其增敏原因进行了探讨，提出一种过氧化物酶催化下的反应机理。     

一种快速判断癌疗药物电性的方法

在诸多的癌症疗法中,电化学疗法由于可以结合局部用药,显示出很大的优越性。最近提出的一种新的电化学疗法,即是在通电的同时,加入化疗药物,应用此法,须知药物在生理环境中的电性,即在pH7.4的水溶液中,药物的正负电性。目前,药物电性判断尚无通用的方法,电泳技术虽然可行,但需专门的仪器,操作较复杂,且易受温度、介质、浓度pH值等因素的影     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

"突触引物"实时荧光PCR检测端粒酶活性

为建立一种简便的端粒酶测定方法，首先采用高灵敏的核酸染料SYBR Gold染色代替放射自显影，建立了简便可靠的扩增产物显示方法，进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物，考察了突触引物检测的可行性和灵敏度。在此基础上，建立了检测端粒酶活性实时荧光PCR。由于突触引物可以有效的降低非特异性扩增，有效解决了端粒酶活性检测中的非特异产物干扰，为定量检测端粒酶活性打下了基础。     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K—ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT，突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型．采用SYBR Green I为实时PCR指示剂，进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究．结果表明：在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引人故意错配碱基．将ARMS引物浓度稀释10倍，并对传统三步PCR循环进行改良．即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异．在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤。可消除引物二聚体的影响．使ARMS引物的特异性增强．得到清晰的基因分型结果．实验表明这种基于SYBR Green I的ARMS实时PCR基因分型方法，无需合成探针，实验设计简单．是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法，可推广用于其他基因的分型。并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一．     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K-ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型,采用SYBR GreenⅠ为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引入故意错配碱基,将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良,即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异,在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤,可消除引物二聚体的影响,使ARMS引物的特异性增强,得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR GreenⅠ的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单,是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型,并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.     

正交设计－流动注射荧光光谱分析法研究：过氧化物酶测定体系选择和反应机理

采用正交设计－流动注射荧光光谱分析法。对测定过氧化物酶体系的各影响因素进行了正交直观分析和方差分折，结果表明：对羟基苯丙酸是影响反应的显著性因素：十六烷基三甲基溴化铵对反应有增敏作用，并对其增敏原因进行了探讨；提出一种过氧化物酶催化下的反应机理。