TdR诱导肝癌细胞株HepG2细胞周期同步化的效果

取对数生长期的 HepG2 细胞,加入含 TdR 的培养基 28 h 后,收集细胞,用 PBS 洗2次,加完全培养基,分别于 12 h 和24 h 收集各组细胞.用流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分数.探讨 TdR(胸腺嘧啶核苷)诱导人肝癌细胞株 HepG2 同步化后的细胞周期时相的变化.结果是TdR能较好地使肝癌细胞株Hepc2同步化于G1期和G2期.TdR诱导细胞后,分别于12中 h 获得(63.62±2.82)%的 G2/M 期同步化细胞,24 h 后获得(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞.     

番茄红素对乳腺癌细胞周期及生长的影响

观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性（ER＋）细胞MCF-7的存活率、细胞周期及凋亡的影响。采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化。番茄红素抑制MCF-7细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率为52.6%。流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24h后,MCF-7细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,但未诱发其凋亡。番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖。     

体外细胞株G_0期同步化模型建立及分析

通过对U251,QGY,Hela3个细胞株进行血清剥夺培养,建立起有较好的同步化效果的U251同步化模型.细胞同步化后,转入血清培养基培养,在24h内分10个时间点收集血清恢复培养不同时刻的细胞样品,应用流式细胞仪测定周期进行情况.结果显示,在0.25和8h,有2个重要的G1/S转变点,提示血清剥夺造成的G0期同步不是由G1/S检查点所控制,而是另有值得深入研究的控制点.     

肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期细胞蛋白质组表达差异的研究

通过TdR(胸腺嘧啶核苷)调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期全细胞蛋白质组表达的差异,探索参与肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期调控相关的蛋白.以TdR诱导肝癌细胞株HepG2,分别得到同步化的G1期、G2/M期细胞,流式细胞术检测.采用比较蛋白质组学的研究技术(双向电泳、质谱分析)筛选G1期、G2/M期差异表达的蛋白质.结果流式细胞术检测显示TdR诱导后,分别获得(63.62±2.82)%的G2/M期同步化细胞,(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞,通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到21个差异表达的蛋白.其中G2/M期表达,G1期未见表达有10种蛋白;存在三倍以上的差异点11个:2种在G2期表达上调,9种在G1期表达上调.说明TdR阻断法能够获得很好的同步化细胞.质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及到细胞周期调控、DNA结合、转录调控、mRNA剪接、肽链合成起始、折叠以及细胞代谢等方面.     

西兰花中异硫氰酸盐诱导HepG-2凋亡的研究

探讨西兰花中异硫氰酸盐(isoth iocyanates,ITCS)诱导HepG-2细胞凋亡作用及其可能机制.用不同质量浓度ITCS处理肝癌HepG-2细胞,通过SRB法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜实验,观察ITCS对HepG-2细胞的抑制率和细胞凋亡的影响.结果:1、10、50和150μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞72 h后,ITCS可抑制HepG-2细胞的增殖,其IC50为15.824μg/mL;120μg/mL的ITCS作用HepG-2细胞24 h后,细胞出现早期凋亡细胞的形态;60、120、240μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞48 h后,可见细胞凋亡率分别为(16.6±2.8)%、(21.9±4.4)%和(70.2±5.3)%;15、30、60μg/mL的ITCS作用于HepG-2细胞24 h后,细胞内的Ca2 质量浓度升高,且随着ITCS给药剂量的增加而升高(P<0.05).ITCS能够促进人肝癌细胞系HepG-2细胞的凋亡,其作用机制可能与ITCS升高细胞内Ca2 质量浓度有关.     

黄河兰州段水体中有机污染物对MCF-7细胞凋亡的影响及其机制

采用固相萃取法提取黄河兰州段中山桥(污染断面)、什川桥(自净断面)和新城桥(清洁断面)三个断面水样中有机污染物,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测不同断面有机污染物对MCF-7细胞染毒后的周期分布、细胞凋亡率和细胞内游离[Ca2+]i的浓度,探讨水体中有机污染物的细胞毒性作用机制及其与细胞凋亡的关系.结果表明:染毒48 h,各断面MCF-7细胞的凋亡率由高到低依次为中山桥组(31.40±3.00)％、新城桥组(17.63±0.47)％、什川桥组(13.37±1.43)％,均显著高于对照组(8.1±0.25)％(P＜0.01);各组细胞主峰均在G0/G1期积聚(≥55％),说明有机污染物主要作用于细胞的G0/G1期,使细胞停滞于此期.各断面各剂量组有机污染物分别作用于MCF-7细胞24,48,72 h后,在不同时点细胞内[Ca2+]i浓度均升高,均显著高于对照组(P＜0.01);各组细胞内[Ca2+]i浓度随染毒时间的延长呈下降趋势,具有时间效应关系;在不同时点上无钙离子组和含钙离子组间均有显著性差异(P＜0.05),提示钙离子浓度增加与外钙无关.研究表明,黄河兰州段水体中有机污染物可影响体外MCF-7细胞的周期分布并诱导细胞凋亡,其作用机制还需进一步探讨.     

肝癌细胞株HepG2的G1期、G2／M鞋细胞蛋白质组表达差异的研究

通过TdR（胸腺嘧啶核苷）调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期，运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2／M期全细胞蛋白质组表达的差异，探索参与肝癌细胞株HepG2的G1期、G2／M期调控相关的蛋白。以TdR诱导肝癌细胞株HepG2，分别得到同步化的G1期、G2／M期细胞，流式细胞术检测。采用比较蛋白质组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）筛选G1期、G2／M期差异表达的蛋白质。结果流式细胞术检测显示TdR诱导后，分别获得（63．62&#177;2．82）％的G2／M期同步化细胞，（75．24&#177;0．17）％的G1期同步化细胞，通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到21个差异表达的蛋白。其中G2／M期表达，G1期未见表达有10种蛋白；存在三倍以上的差异点11个：2种在G2期表达上调，9种在G1期表达上调。说明TdR阻断法能够获得很好的同步化细胞。质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及到细胞周期调控、DNA结合、转录调控、mRNA剪接、肽链合成起始、折叠以及细胞代谢等方面。     

藻红蛋白调控ΔΨ_m诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

研究藻红蛋白调控细胞内线粒体膜电位变化诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究.MTT法检测藻红蛋白对MCF-7细胞的细胞毒作用;倒置显微镜观察藻红蛋白对细胞形态学的影响;Ho-echst33258单染,荧光显微镜下观察藻红蛋白作用MCF-7细胞的形态学变化;PI单染,流式细胞术测定藻红蛋白诱导MCF-7细胞凋亡的凋亡率;TMRE单染,激光共聚焦显微镜检测MCF-7细胞中线粒体膜电位的变化.藻红蛋白对MCF-7细胞的IC50为81.60μg/L;形态学观察在作用48 h后,随给药质量浓度增加细胞生长密度逐渐变疏,细胞变小,细胞皱缩,高质量浓度组大部分细胞破碎,贴壁减少.Hoechst33258荧光染色结果显示,藻红蛋白与MCF-7细胞共培养后,随着剂量增加细胞呈明显的固缩状,细胞核出现碎片和凋亡小体等细胞凋亡现象;藻红蛋白作用48 h后的细胞出现凋亡的亚二倍体峰,DNA复制下降;凋亡率分别为25.18%、55.45%、83.94%.不同质量浓度藻红蛋白对MCF-7作用48 h后,线粒体膜电位荧光强度分别为24.40±0.21、20.45±0.24和19.77±0.27.藻红蛋白通过调节细胞内线粒体膜电位变化诱导MCF-7细胞凋亡.     

沙棘籽渣黄酮类化合物诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的研究

探讨了沙棘籽渣黄酮类化合物(flavonoids from seed residues of Hippophae rhamnoidesL.FHR)对人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的影响和其作用机制.采用MTT法、Wright染色法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法,观察在不同浓度和作用时间时,FHR对Bcap-37细胞生长抑制和细胞凋亡效应.结果显示FHR在10~1 000μg／mL等浓度范围内可以诱导人乳腺癌细胞Bcap-37产生典型的凋亡形态学变化;1 000 μg／mL FHR处理24 h、48 h和72 h后使Beap-37细胞周期S期减少,G0／G1期增加;FHR处理实验组p53蛋白表达较对照组明显增加,bcl-2蛋白表达较对照组降低.提示FHR对人乳腺癌Bcap-37细胞的生长抑制主要通过诱导细胞凋亡,且p53蛋白的增加和bcl-2蛋白的减少是其诱导细胞凋亡的机制之一.     

暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞的抑制作用

以暹罗鳄(Crocodylus siamensis)胆汁为材料,应用细胞培养、细胞计数、Hoechst33258染色、流式细胞仪等技术研究暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞凋亡的诱导作用.实验结果显示,胆汁提取物可明显诱导人胆管癌MZ-ChA-1细胞的凋亡,经1.75 mg/mL暹罗鳄胆汁提取物诱导处理24 h后,人胆管癌MZ-ChA-1细胞的增殖活动受到显著的抑制,细胞生长抑制率达86.71%;光镜观察结果显示,暹罗鳄胆汁提取物处理细胞后,细胞体积缩小,细胞核固缩;细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;细胞周期检测出现G0/G1期细胞比例升高,S和G2/M期细胞比例下降.研究结果表明,暹罗鳄胆汁提取物对人胆管癌MZ-ChA-1细胞凋亡的诱导具有显著作用,从而为进一步研究细胞凋亡机制提供重要基础和研究依据.     

Genistein and Daidzein Effects on Proliferation, Cell Membranes, Cell Cycles and Cell Apoptosis of Different Cell Lines

IntroductionIsoflavonoids are found mainly in soybeans,aprimary food source for humans and herbivores.The structure and function of isoflavonoids aresimilar to 1 7β- estradiol (1 7β- E2 ) ,and have dualeffects as both mammal oestrogenicity and anti-oestrogenicity,so they are also termed isoflavonicphytoestrogens(IPE) .It has been reported thatthese compounds can reduce blood fat,as well asthe risk of cancer and osteoporosis[1] .Genistein and daidzein are two principleisoflavonoids in soybe…     

杂交骨髓瘤细胞周期的模型化

基于对杂交骨髓瘤细胞周期机理的分析,研究了细胞循环周期中各时相的特点,建立了比生长速率驱动的细胞周期模型.然后,将细胞周期模型与已有的宏观动力学模型结合,形成完整的杂交骨髓瘤细胞动力学-细胞周期组合模型.仿真结果表明,模型对于各期细胞分率的描述在趋势上与采用流式细胞仪所得到的实测值一致.     

奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2生长和细胞周期的影响

观察了一定剂量的奥曲肽对鼻咽癌细胞株CNE2的细胞生长与细胞周期的影响,探讨药物对的抗肿瘤作用,从而为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路,并在理论上奠定一定基础。用MTT法检测细胞生长抑制作用,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期,t检验进行统计学分析。结果表明：1．0nmoL／L-1．0μmol／L的奥曲肽均能抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,且在此范围内明显呈药物量——效关系,1．0μmol／L的奥曲肽可以使鼻咽癌细胞株CNE2阻滞在G0／G1期。一定剂量的奥曲肽能够抑制鼻咽癌细胞株CNE2的生长,奥曲肽有望在药物治疗鼻咽癌方面发挥一定的作用,值得进一步研究。     

Cell division

In creating the mitotic spindle and the contractile ring, natural selection has engineered fascinating precision machines whose movements depend upon forces generated by ensembles of cytoskeletal proteins. These machines segregate chromosomes and divide the cell with high fidelity. Current research on the mechanisms and regulation of spindle morphogenesis, chromosome motility and cytokinesis emphasizes how ensembles of dynamic cytoskeletal polymers and multiple motors cooperate to generate the forces that guide the cell through mitosis and cytokinesis.     

单嗜性包装细胞包装逆转录病毒方法研究

逆转录病毒的感染范围(嗜性)是由所使用的包装细胞表达的包膜蛋白所决定的,因此改变现有的包装细胞的包膜蛋白就可以改变所包装的逆转录病毒的嗜性。为了达此目的,在稳定表达MMLV包膜蛋白的逆转录病毒包装细胞BOSC23细胞中共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出的逆转录病毒只能感染少量的人源性的293F细胞,说明VSV-G不能完全替换掉MMLV包膜蛋白。因此我们利用RNA干扰技术首先沉默BOSC23细胞中的MMLV包膜蛋白的表达,然后共转染VSV-G表达载体和表达GFP的逆转录病毒载体,结果包装出了高滴度的泛嗜性的逆转录病毒。