从海南岛300例腹泻病人粪便标本分离耶氏菌

采用CIN培养基，从海南岛300例腹泻病人粪便标本分离培养出耶氏菌11株．其中，小肠结肠炎耶氏菌4株，血清型0：3；中间型耶氏菌7株.这7个中间型耶氏菌菌株均能分解鼠李糖、密二糖和棉子糖．     

幼兔细菌性感染症的检验与分析

从自然发生的2月龄幼兔肺脏中分离到3种类型的细菌(记作:a,b,c),经对所做的纯培养30株分离菌的形态特征、理化特性等检验,结果表明a菌(17株)为支气管炎博德特氏菌(Bordetellabronchiseptica);b菌(8株)为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa);c菌(6株)为大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)。通过人工感染试验,表明其为相应的致病菌。     

秋刀鱼肉中产胺菌的分离、鉴定及产胺能力分析

为了探究秋刀鱼(Cololabis saira)肉中生物胺产生菌的产胺特性,有效控制生物胺含量,采用改良的Niven's生物胺筛选培养基,通过16S rDNA序列分析和VITEK 2 Compact System,对秋刀鱼肉中产胺菌进行分离鉴定,分析不同温度(4、25℃)条件下产胺菌的产胺能力及生物胺含量变化。结果显示,从秋刀鱼肉中分离鉴定的14株产胺菌分别为摩氏摩根菌、产酸克雷伯菌、阿氏肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、植生拉乌尔菌、抗坏血酸克吕沃尔菌、粘质沙雷菌、日沟维肠杆菌、肠杆菌属、变性杆菌属、中间克吕沃尔菌、彭氏变形杆菌、拉氏普罗威登斯菌、蜂窝哈夫尼亚菌;在4℃条件下,所有产胺菌产胺能力均较弱(11.55～244.75 mg/L);在25℃条件下,产酸克雷伯菌、肠杆菌属的产组胺能力较强,分别为9 889.75,2 891.15 mg/L。结果提示,可通过抑制产酸克雷伯菌、肠杆菌属生长控制秋刀鱼肉中组胺等生物胺的含量。     

利用酵母同源重组系统克隆肺炎克雷伯菌基因组岛

利用酵母同源重组系统克隆耐药性条件致病菌肺炎克雷伯菌的基因组岛.具体方法为:对20株从临床中分离的肺炎克雷伯菌进行体外tRIP PCR扩增以搜索外源基因纽岛;利用酵母同源重组系统构建作用于arg6 tRNA基因位点的酵母捕捉载体YCV6并克隆该位点的基因组岛.结果表明:在该20株肺炎克雷伯菌中,arg6 tRNA基因位点的tRIP PCR结果都是1.2 kb,没有筛选到大基因组岛插入;所构建的酵母捕捉载体YCV6携带了2个1.8 kb的靶序列,分别与肺炎克雷伯菌arg6 tRNA基因位点两侧的保守序列同源;将线性化的载体YCV6与肺炎克雷伯菌临床株HS04044的总DNA一起转入酵母细胞,利用酵母同源重组克隆临床菌株HS04044染色体上插入arg6位点的小基因组岛.该位点特异性的捕捉载体YCV6可用于克隆肺炎克雷伯菌临床株染色体插入arg6位点的外源DNA序列.     

2017-2019年我院高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因的分子流行特征

目的:探讨广州暨南大学附属第一医院2017至2019年高毒力肺炎克雷伯菌毒力基因的分子流行特征,为高毒力肺炎克雷伯菌所致临床感染的防治提供实验室依据.方法:通过拉丝试验初步筛选出高粘液肺炎克雷伯菌(hmKP),利用PCR技术对所有hmKP进行黏液表型调节基因A(RmpA)和气杆菌素(aerobactin)基因扩增,两毒力基因均表达则即判定该菌株为高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP),再采用PCR技术对hvKP中常见的血清荚膜型K和多个毒力基因进行特异性扩增.结果:2017年9月至2019年9月间我院通过拉丝试验初筛出hmKP共51株,同时扩增出两毒力基因(RmpA,aerobactin)即判定为hvKP者有43株,其中25株分离自侵袭性肺炎克雷伯菌感染,18株分离自非侵袭性肺炎克雷伯菌感染.K1、K2型为其主要的血清荚膜分型,分别占41.86%(18/43)、23.26%(10/43);毒力基因检出率排名前4的分别是:ycfM 100.00%(43/43),entB 100.00%(43/43),ureA 93.02%(40/43),wabG 93.02%(40/43).结论:2017至2019年我院分离的高毒力肺炎克雷伯菌血清荚膜型以K1、K2为主,毒力基因检出率较高的是ycfM、entB、ureA和wabG毒力基因.     

志贺氏菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立及应用

以志贺氏菌ipaH基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增检测志贺氏菌的方法,反应时间为44min。通过对4株不同群志贺氏菌和12株其他食源性致病菌进行实时荧光单引物等温扩增检测,结果表明,除4株志贺氏菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,采用普通热裂解法提取DNA,实时荧光检测福氏志贺氏菌DNA的灵敏度为1.16fg/μL,纯培养菌液的灵敏度为1.3CFU/mL;对牛奶模拟样品中福氏志贺氏菌的检出限是1.8CFU/mL。研究结果表明,实时荧光单引物等温扩增检测志贺氏菌灵敏度高、特异性强、耗时短、方法简便。     

克氏原螯虾调理产品中主要腐败菌的分离鉴定

为了分离鉴定克氏原螯虾调理产品在4℃冷藏条件下的腐败菌菌相组成,将其在4℃条件下冷藏至货架期末(20 d左右),此时克氏原螯虾调理产品中菌落总数为7.05 logcfu/mL.采用传统分离纯化、菌落形态观察、生理生化鉴定与16S rDNA序列分析方法结合,对腐败菌进行分离鉴定.结果表明:在克氏原螯虾样品中共分离得到85株菌株,经镜检、生理生化鉴定以及16S rDNA测序得到5株典型优势菌,分别为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methlotrophicus)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)、沃氏葡萄球菌(Staphylococccus wameri)和溶酪巨型球菌(Macrococcus caseolyticus).     

陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的血清型调查

研究了陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的流行血清型。对分离自腹泻仔猪粪便的131株疑似大肠埃希菌进行生化试验、溶血性试验分析,并对其血清型进行鉴定。121株分离菌符合大肠埃希菌的生化特征,鉴定率为92.37%;有溶血性的菌株占总分离株的81.82%(99/121),其中23株出现β溶血现象,76株出现α溶血现象,22株溶血现象不明显;血清型定型104株,占分离株的85.95%(104/121)。这些定型菌株涵盖了13种血清型,其中O80血清型分离率为28.85%(30/104),O141血清型为19.23%(20/104),O139血清型为9.62%(10/104);O6,O9,O20,O101各有6株;4株及以下的血清型的有O38,O45,O93,O138,O147,O157。血清型O80,O141和O139为陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的优势血清型。     

克雷伯氏菌引起婴儿腹泻的病原分离鉴定及耐药性检测

通过对急性腹泻患儿粪便标本镜检、细菌分离培养、生化特性、药敏试验和致病性分析后分离鉴定出克雷伯氏菌．药敏试验结果显示对头孢哌酮、丁胺卡那霉索较敏感．在临床小儿感染性腹泻的诊治中，应注意肺炎克雷伯氏杆菌的分离鉴定和选用敏感抗生素对症治疗，以防止滥用广谱抗生紊及耐药性的形成，     

PCR检测乳粉中肺炎克雷伯氏菌

利用PCR技术直接检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.     

ICR／RMU—nu无胸腺裸鼠的培育

作者从一窝白色ＩＣＲ远交系小鼠群中发现突变裸鼠，采用回交一互交号法“ｎｕ”基因保留下来，随后用隔离器养的ＩＣＲ小鼠为代乳鼠，通过剖腹取胎净化该种群，微生物学检查其主要项目达到ＳＰＦ级标准，术后动物饲养于洁净层流架中，＾６０Ｃｏ灭菌饲料，酸化水、鼠盒、垫料均高压灭菌，以纯合雄鼠与杂合雌鼠１：１非近亲繁殖，扩大了种群，定名ＩＣＲ／ＰＭＵ－ｎｕ裸鼠。与此同时，对突变裸鼠进行了免疫生物学检查，剖检１０余只     

牙鲆迟钝爱德华氏菌的分离及其鉴定

从患腹水病牙鲆体内分离致病菌,通过生理生化鉴定方法对该菌进行了鉴定;根据GenBank上报道的迟钝爱德华氏菌标准株(ATCC15947)的16S rDNA序列以及致病性迟钝爱德华氏菌所含有的菌毛亚基(Fi mA)基因(AB100170)的核苷酸序列设计了2对引物,对所分离到的6株疑似菌进行PCR扩增,均能够扩增出目的条带,基因片段大小分别为1 399,540 bp.序列分析表明,扩增得到的基因与其参考菌株序列高度同源,同源性分别为98.86%,100%.分子生物学鉴定结果与常规细菌鉴定方法所得结果一致,证明该菌为迟钝爱德华氏菌.将该菌肌肉注射鲫鱼,发病症状与自然死亡的症状相似,并从患病鲫鱼体内分离到该菌,说明所分离的迟钝爱德华氏菌是患病牙鲆的原发病原菌.     

耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性分析

以临床尿路感染患者尿液为研究对象,通过分离培养及16s rDNA进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定;采用Kirby-Bauer纸片法进行药敏实验,并对分离株进行碳青霉烯酶表型筛选;通过PCR检测常见的碳青霉烯酶耐药基因、荚膜血清型和毒力基因分布情况;对分离的肺炎克雷伯菌株进行了生物被膜形成能力及其对小鼠致病力的分析。本研究从采取的86例尿液标本中分离检出11株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌,分离率为12.79%。耐碳青霉烯酶基因PCR检测结果显示,blaNDM、blaVIM、blaIMP和blaKPC基因在分离株中均呈现不同程度的分布。耐药性分析发现11株肺炎克雷伯菌对氨苄西林耐药率为90.91%,对头孢噻肟耐药率为63.64%,对链霉素、庆大霉素、氯霉素和诺氟沙星的耐药率较低。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌荚膜分型结果显示,分离的11株细菌中10株均为强毒力型菌株（90.9%）,其中K57血清型4株（36.4%）,K1血清型1株（9.1%）,K2血清型1株（9.1%）,K5血清型1株（9.1%）,K20血清型3株（27.3%）,提示该批分离株具有较强的致病力。此外,毒力因子分布结果显示,其毒力因子rmpA（54.5%）、Aerobactin F（54.5%）在菌株中分布较为广泛。生物被膜形成能力检测及小鼠致病性试验结果显示,9株分离株均有较强的生物被膜形成能力,菌株致病力可能与荚膜血清型及生物被膜形成能力相关。综上所述,临床分离的致尿路感染病原肺炎克雷伯菌呈现多重耐药特征,强毒力菌株以K57荚膜型为主,K1、K2均有分布,提示对尿路感染病原应加强耐药监测,合理使用抗菌药物,有效防控多重耐药和强毒力菌株的感染与流行。     

奶牛场中乳房炎相关致病菌的分离与鉴定

旨在调查成都市某奶牛场引起乳房炎相关致病菌的流行及分布.通过对患乳房炎病牛乳汁、奶牛乳头、皮毛、牛圈、挤奶车间等部位和生活环境进行样品采集,初步分离奶牛群潜在病原菌,并对筛选得到的菌株进行16S rDNA测序鉴定和分析.结果:在奶牛场共采集样品1 000份,分离得到菌株494株,细菌总分离率为49.40%.分离菌株包括13类.其中,葡萄球菌占64.37%,粪肠球菌占29.15%,为奶牛场主要流行优势菌;另外,变形杆菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、谷氨酸棒杆菌、海氏肠球菌、乳棒状杆菌、克雷伯氏菌、浅绿气球菌、猪粪细菌、尿链球菌、格氏乳杆菌等也有检出.进一步对分离得到318株葡萄球菌共鉴定出18个种,其中,阿尔莱特葡萄球菌(33.65%)、腐生葡萄球菌(12.89%)和溶血葡萄球菌(11.95%)为优势葡萄球菌;在乳房炎奶样中检出了14株金黄色葡萄球菌,以及挤奶器样本中检出了2株金黄色葡萄球菌,其他样本中未检出金黄色葡萄球菌.应加强对奶牛场生产环节致病菌的监测与防控及日常消毒措施.     

9种中草药对鳗鲡病原菌体外抑菌活性的影响

对3株染病的日本鳗鲡肾脏中分离的致病菌进行活化,同时采用二倍稀释法以黄连、大黄、穿心莲、大青叶、黄岑、黄柏、鱼腥草、虎杖、苦参9种单味煎剂对3株分离菌和爱德华氏菌及嗜水气单胞菌的标准株进行最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定。结果显示大黄及虎杖体外抑菌活性最为理想。     

科研消息

1.由我院院长廖延雄教授主持的《肠结肠炎耶辛氏菌》研究课题于1983年11月24日通过技术鉴定.到会的省内、外专家、教授一致认为:该项课题研究方向正确,设计严谨,资料较完善,数据可靠.首次从南昌地区猪和儿童腹泻粪便中分离出21株肠结肠耶辛氏菌,进行了细菌学和血清学的鉴定,确定为4个血清型,填补了江西省耶辛氏菌研究工作的空白.并在     

SPF级实验小鼠4种致病菌多重PCR方法的建立及优化

目的 建立一种可同时检测4种SPF级屏障环境常见致病菌的多重PCR方法。方法 本研究针对鼠伤寒沙门氏菌invA基因、肺炎克雷伯杆菌khe基因、嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因、铜绿假单胞菌ecfX基因序列分别设计合成特异性引物,构建可同时鉴别4种菌的多重PCR反应体系,优化后测定其特异性、灵敏性并人工模拟感染样本。结果 建立的4重PCR方法能对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;对4种目的菌的检测灵敏度为10-3ng/μL;也可从混合感染的病料中特异性地检测出4种致病菌。结论 本试验建立的多重PCR方法具有快速、简便、灵敏的特点,为4种致病菌的快速诊断和监控提供了有效的技术支持。     

甘肃省痢疾杆菌菌型变迁及耐药检测

为了解我省志贺氏菌属在我省的流行、变迁及耐药状况,甘肃省疾病预防控制中心于2006年2月-10月对兰州市城关区、武威市凉州区菌痢监测点采集腹泻病人粪便540份,检出志贺氏菌属菌85株,对菌株进行了血清学鉴定、生化试验及耐药试验.85株菌以福氏志贺氏菌为主占89.41%.宋内氏菌占10.60%.S.F4c 59株,是我省流行的优势菌型.85株菌均为多重耐药,对10种药物的耐药率自97.60%-8.20%不等.结果为我省今后开展菌痢防治及临床用药提供了依据.     

L型菌所致肺部感染性疾病的研究

目的:探讨提高培养L型菌检出率的方法,了解L型菌对常用抗生素的耐药谱,为防治L型菌所致的肺部感染提供检测依据.方法:对200例肺部感染患者痰标本进行常规与L型菌培养的检测,对分离培养出的细菌进行药敏试验.结果:分离出细菌39株,其中L型菌21株,占53.8%,普通细菌18株,占46.2%;L型菌以克雷伯茵和大肠埃希氏菌最多,各占42.8%.药敏试验对丁胺卡那霉素、庆大霉素、左氧氟沙星及部分头孢类抗生素较为敏感,对氨苄青霉素耐药.结论:L型菌在肺部感染性疾病中比例较高,应将L型菌检测作为常规实验开展,以减少漏诊.同时,临床合理使用抗生素能减少L型菌的产生及提高治疗效果.     

110例下呼吸道感染致病菌及药敏分析

本组110例下呼吸道感染患者经痰菌培养分离出的122株致病菌中革兰氏阴性菌106株,占86.9％,显著多于革兰氏阳性菌。其中铜绿假单胞菌检出率最高(40/106),依次为肺炎克雷白氏菌(25/106)、大肠埃希氏菌(12/106)等。药敏试验结果显示不同致病菌对不同抗生素的敏感性不一。但有近半数抗生素的总敏感率在50％以下,表明耐药严重,应高度重视合理选用抗生素。