酿酒葡萄内生真菌群落及抗菌活性测定

从酿酒葡萄(Vitis vinifera.L)植株的各组织中共分离得到462株内生真菌,通过形态鉴定、排重、按比例缩取从中选取出64株内生真菌.采用ITS排序、系统树构建的方法对64株真菌的种属地位及发育关系进行了研究,并对植物病原真菌生长抑制能力进行了测定.系统发育树分析表明酿酒葡萄内生真菌分布于20个属,其中交链孢霉(Alternaria)17.24%,青霉(Penicillium)15.52%,镰刀菌(Fusarium)10.34%,曲霉(Aspergillus)、Discostroma、赤霉菌(Gibberella)、Passalora、Pestalotiopsis各5.17%,交链孢霉、青霉、镰刀菌是其中的优势种群.对植物病原真菌有抗性的菌株分布于15个属,其中镰刀菌属的6株菌对3种指示菌均有抑制作用,镰刀菌是酿酒葡萄植株主要抗植物病原真菌的活性物质来源之一.     

短葶山麦冬内生真菌分离鉴定及抗氧化活性

以福建短葶山麦冬主产区之一泉州罗溪镇采集的1 a生和盆栽6 a生短葶山麦冬为研究材料,分别从叶、须根和块根中分离内生真菌,测定根部内生真菌的抗氧化活性.结果表明:1 a生块根的内生真菌分离率高于6 a生,须根中分离的内生真菌数量最少.以总抗氧化能力为指标,评价从根部分离得到的18株菌株的抗氧化活性,对其进行降序排序,筛选前5株菌株,测定其清除DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基的能力,结果发现,d5菌株发酵产物的清除效果最为明显.进一步测定其乙酸乙酯萃取部位3种自由基清除能力表明,d5菌株对DPPH自由基和羟自由基的能力最强,EC50分别为0.572和1.257 mg/m L.经真菌18 s r DNA序列比对测定d5菌株属于青霉菌属,可以作为进一步研究的对象.     

一株产紫杉醇的红豆杉内生真菌的分离鉴定

用组织研磨涂布法对中国红豆杉中产紫杉醇的内生真菌进行分离,得到45株内生真菌;通过形态学和分子生物学手段对一株产紫杉醇的菌株Tax-4进行鉴定,其结果为黑团壳属(Massaria)。表明从中国红豆杉中分离得到了一株产紫杉醇的黑团壳属内生真菌,丰富了产紫杉醇内生真菌的资源。     

碱蓬内生真菌JP3的分离、鉴定及促生作用研究

为研究盐生碱蓬(Suaeda glauca)植物体内生菌及其产生的生物学活性物质对植物的促生长作用,利用组织分离法对碱蓬内生菌进行分离;用水培法测定碱蓬内生真菌对水稻幼苗株高、干重、叶绿素含量等生理指标的影响;对具有明显促生活性的菌株根据形态、培养特征和18SrDNA测序分析进行分类鉴定。从健康碱蓬植株的根、茎、叶中分别分离出19株、70株和49株,共138株内生菌,其中细菌13株、真菌122株、放线菌3株;筛选出对水稻幼苗具明显促生活性的真菌JP3,由该菌处理的水稻幼苗与对照相比其干重增加12.23%,株高增加15.6%(P0.05),总叶绿素含量增加了13.2%;18SrDNA测序和比对结果显示JP3属Glomerella cingulata,相似性大于97%。研究表明:碱蓬植物内生菌具有丰富、多样的特点,是产生促生物学活性物质的重要微生物资源,可为开发新的植物促生剂提供生物源物质。     

藏红花内生真菌的分离和代谢产物的初步研究

通过不同灭菌处理方式和4种不同培养基培养,从健康藏红花植株体内分离得到63株内生真菌．其中,球茎中分离到60株内生真菌,花药中分离到2株,柱头中分离到1株,花被、嫩叶、芽鞘、花柱中均未分离到内生真菌．4种培养基的筛选结果表明：高盐察氏培养基相对适合于藏红花内生真菌的分离．通过对4种病源指示菌的生长抑制试验,筛选出12株内生真菌对病原菌有一定程度的抑制作用．通过对分泌物产生菌的代谢产物分析研究,发现4株特异性代谢黄酮类或皂甙类物质的生产菌．     

植物内生菌次生代谢产物活性多样性及其应用前景

植物内生菌(endophyte)包括内生真菌、内生细菌和放线菌,是一类新型微生物资源,在农业和医药业上有潜在应用价值。植物内生菌次生代谢产物具有丰富的化学结构多样性和广泛的生物活性,能够促进植物生长,提高植物对生物胁迫和非生物胁迫抗性等。从植物内生菌的种类及具有各种生物活性的植物内生菌次生代谢产物方面进行了介绍,并对他们在杀虫、抗菌、抗肿瘤等生物胁迫和在促进土壤修复、促进植物生长、抗氧化、抗渗透等非生物胁迫中的作用进行了阐述,分析了内生菌次生代谢产物在研究中存在的问题以及对这些植物内生菌次生代谢产物的应用前景和潜在价值进行了探讨。     

连翘中具有药物活性成分内生菌的筛选及其拮抗特性的研究

采用组织分离法从连翘枝条中筛选出13株内生菌,其中有7株内生真菌,6株内生细菌。分别以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为指示菌株,采用平板对峙法对分离出的13株内生菌的抗菌活性进行筛选。结果表明：13株菌种中有10个菌株对1种供试菌具有抑菌活性。其中L-07-01、L-07-09、L-07-12、L-07-13的拮抗效果明显,L-07-09对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。L-07-12对大肠杆菌具有较强抑菌效果,测量其抑菌圈直径为10 mm。对拮抗效果较强的菌株进行液体发酵培养后采用双层打孔法,测定其抑菌效果后证明L-07-13对金黄色葡萄球菌有极强的抑制效果。对拮抗后的指示菌进一步镜检后,发现菌体有明显的溶菌、空洞、畸形等现象。连翘内生菌可以产生丰富的具有药物活性的次生代谢产物,可作为新型药物的筛选源。     

马铃薯内生真菌的多样性及抑菌活性研究

从采自德宏、大理、临沧3地健康马铃薯植株的根、茎、叶、块茎中分离、纯化内生真菌,测定了其抑菌活性,并进行形态学和18S rDNA序列分析,确定了内生真菌种属.共分离得到了493株内生真菌,其中44株对3种马铃薯病害(马铃薯枯萎病、马铃薯黑痣病和马铃薯早疫病)有不同程度的抑制作用.形态学特性和分子生物学研究结果显示:44株活性内生真菌分属于21个属,具有丰富的多样性;其中篮状菌属、毛壳菌属和附球菌属为马铃薯拮抗活性内生真菌的优势菌属.     

黑果枸杞根际促生菌的筛选鉴定及促生能力分析

以新疆阿克陶县盐碱地中生长的黑果枸杞(Lycium ruthenicum)根际土壤为材料,分离兼具耐盐和良好促生能力的根际促生菌,共得到43株能够耐受1mol/L NaCl的菌株,其中13株具有溶磷和产铁载体能力,进而在13株菌中筛选出7株具有分泌生长素能力的菌株.通过溶磷、产吲哚乙酸等功能指标对比,选择出4株功能较强的菌株进行盆栽促生实验,结果发现菌株H29和X49能显著促进盐胁迫下黑果枸杞幼苗的生长.与阴性对照相比,H29处理植株的株高、叶片数、根长、地上部鲜质量和干质量分别增加32.86%,41.67%,44.76%,175.00%和114.29%,X49处理植株的根长、根表面积、地下部鲜质量和干质量分别增加51.75%,130.05%,200.00%和250.00%.分子鉴定结果显示H29为链霉菌属(Streptomyces)菌株,X49为微杆菌属(Microbacterium)菌株.上述结果可为开发和推广适合盐碱化土壤的专用生物肥料提供优良菌种.     

桃儿七内生菌及产鬼臼类物质菌株的筛选

目的 寻找扩大获得鬼臼类物质资源的新途径.方法 采用常规无菌方法 从桃儿七植株中分离纯化内生茵;利用细菌和真菌的常规鉴定方法 对所分离的茵进行鉴定;用薄层层析(TLC)法检测发酵产物.结果 分离得到6株细菌,20株真茵,其中4株真菌(Tc,Td,Te,Mi)可产鬼臼毒素类物质,2株真菌(Mh,Id)可产鬼臼毒素单糖甙.结论 桃儿七部分内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力.     

山苍子内生真菌多样性研究

采用添加植物组织浸提液的孟加拉红培养基,从山苍子根、茎、叶、果实中分离到25株内生真菌,其中根内生真菌5株,茎内生真菌3株,叶内生真菌12株,果实内生真菌5株,经形态及ITS序列鉴定,其至少分属于As-pergillus、Cladosporium、Hypocrea、Penicillium4个属的11个种,且Hypocrea属的3株真菌仅在叶、果实中分离到,Cladosporium属的1株真菌仅在叶中分离到,表明山苍子植株对其内生真菌具有明显的选择作用,其内生真菌的分布体现出明显的种属特异性及组织特异性.     

海洋真菌抗氧化活性物质的初步研究

采用化学发光法对81株分离自深海沉积物的真菌和93株红树林的内生真菌进行抗氧化活性物质的筛选.结果表明,供测菌株中有7株深海真菌、1株红树林内生真菌对于活性氧具有抑制作用,占供测菌株的4.60%.在7株深海真菌中有3株对羟基自由基和过氧化氢均表现出了较好的抑制作用.进一步采用化学发光法和DPPH法追踪上述3株深海真菌(114、115、134)发酵产物的水溶性聚糖和有机相中的抗氧化活性物质,发现有机相表现出较好的抗氧化活性,3株真菌的IC50分别是:1.92、55.55和11.23μg/mL(.OH);1.45、13.79和72.29μg/mL(H2O2);112.45、58.87和169.39μg/mL(DPPH);而水相中的水溶性聚糖也具有不同程度的抗氧化活性.海洋真菌是产生抗氧化活性物质的重要资源.     

具有抑菌和抗氧化活性紫金牛内生菌的筛选鉴定

以紫金牛(Ardisia japonica)为材料,采用划线法筛选到13株具有抑菌活性的内生菌.其中1株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均具有抑菌活性,且抑菌活性较优的紫金牛内生菌初步鉴定为近平滑假丝酵母菌.筛选获得20株具有抗氧化活性的紫金牛内生菌,其中3株内生真菌对DPPH自由基的清除率高于90%,抗氧化活性较优的2株内生菌初步鉴定分别为芽孢杆菌和小孢拟盘多毛孢.内生菌茎8发酵液的抑菌活性在低于80℃、pH 5～9条件下,具有较好的稳定性.内生菌PDA-ZJNR5发酵液在pH 5～7、低于80℃条件下,具有良好的DPPH清除能力.内生菌茎8发酵液和PDA-ZJNR5发酵液对紫外线具有良好的耐受性.     

一株茶树内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性测定

从茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)的菌落表面分离获得1株放线菌菌株BF-01,通过形态学观察和16S rDNA序列分析及抗菌活性测定,初步鉴定该菌株为卡伍尔链霉菌(Streptomycescavourensis).对其代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,发现该菌发酵产物对除1株木霉外的7株茶树内生真菌及6株植物病原真菌均表现出不同程度的抑制作用.其发酵液氯仿萃取物对供试的5种病原细菌、1种白假丝酵母菌有较明显的抑制作用,对2种植物病原真菌的孢子萌发也有较强的抑制作用,表明菌株BF-01及其代谢产物具有广谱的抑菌活性.     

三个不同地区黑枸杞花青素的抗氧化活性分析

以野生黑枸杞为原材料,对其花青素进行含量测定及抗氧化活性分析.对比酶解前后宁夏、新疆、青海地区的黑枸杞中花青素提取含量,发现酶解后提取液中花青素含量提高了40%左右.通过对黑枸杞中花青素的抗氧化能力测定发现三个地区的黑枸杞中花青素的抗氧化能力相接近且随着底物浓度的升高而增强,其中青海地区黑枸杞花青素的抗氧化能力较高于其他两个地区.     

半夏中一株高产纤维素酶内生真菌的分离、鉴定及活性分析

以羧甲基纤维素钠为主要碳源，采用刚果红染色法从半夏中筛选出一株高产纤维素酶的内生真菌，通过形态学观察及分子生物学技术对其进行鉴定，并对该菌株发酵产物进行抑菌、抗氧化活性测定。结果表明：高产纤维素酶的内生真菌bxg1被鉴定为曲霉属真菌(Aspergillus chevalier)。该菌株透明圈直径D与菌落直径d比值高达2.5。菌株抑菌实验发现，该菌株对供试病原菌均有抑菌效果，对革兰氏阴性菌具有较好的抑菌活性，其中对铜绿假单胞菌的抑菌圈约为1.2 cm;抗氧化实验发现，该菌株对DPPH自由基的清除能力最强，IC₅₀值为0.056 g/L。     

雷公藤内生真菌的分离及抗肿瘤活性研究

通过对雷公藤植物内生真菌进行分离,对内生真菌抗肿瘤活性进行了研究.研究结果显示,从雷公藤不同器官中共分离出22株不同形态型的内生真菌,其广泛存在于植株的根、茎、叶中,其中植株枝中的分离数量高于根和叶.采用MTr法对内生真菌的体外抗肿瘤活性进行检测,发现大多数菌株均具有不同程度的抑制活性,但抑制活性随作用时间而发生变化.其中有2株菌经24 h反应后对人乳腺癌细胞MCF-7表现出显著的抑制作用;1株菌经24 h反应后对胃癌细胞U937表现出显著的抑制作用;1株菌经24 h反应后对MCF-7细胞和U937细胞均表现出显著的抑制作用:2株菌经过48 h反应后对MCF-7细胞表现出较强的抑制作用,且无论是24 h还是48 h反应均对U937细胞表现出较强的抑制作用.     

浙江清凉峰地衣内生菌物种多样性及活性研究

采用挑取地衣体髓层菌丝法对浙江省清凉峰的地衣内生菌进行分离培养。基于ITS序列和28S序列的系统发育分析表明,选取的55株内生菌都属于子囊菌门且具高度的物种多样性。用滤纸片法检测该内生菌次生代谢产物的抗细菌、真菌活性,发现其中有8株具抗菌活性,占所测菌株的14.55%,抑菌圈的直径最大达到3 cm。研究表明地衣内生菌可产生丰富的具抑菌活性的次生代谢产物,可作为对多种病原物具有抑菌活性物质筛选的资源,是抑菌活性物质潜在的、丰富的资源库。     

产黄酮马齿苋内生真菌的筛选及代谢产物抑菌效果初步研究

从马齿苋植株中分离内生真菌,提取其代谢产物,以黄酮类化合物显色反应和紫外光谱特征对内生真菌代谢产物进行初步鉴定,筛选得到产黄酮内生真菌AG-10,使用ITS1、ITS4通用引物,扩增菌株AG-10的18S rDNA序列,结合菌落和分生孢子形态特征,对菌株AG-10进行分类鉴定,并采用滤纸片法研究AG-10的代谢产物抑菌效果;菌株AG-10鉴定结果为镰刀菌(Fusarium sp.),其代谢产物可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,最小抑菌质量浓度分别为1.0 mg/mL和2.0 mg/mL。研究结果证实了马齿苋中存在有可能产黄酮类化合物的内生真菌,为利用微生物产黄酮类化合物提供参考。     

麻黄内生真菌的分离及其生物活性初步研究

从内蒙古赤峰等地的中草药麻黄中分离得到141株内生真菌,体外抗氧化、抗肿瘤等活性测定表明,有11株内生真菌对H2O2具有较好的清除活性(LD50均大于50,LD50为抑制率为50%时的样品稀释倍数),占菌株总数的7.80%;有27株内生真菌对Raji和HepG-2具有肿瘤细胞毒活性(LD50大于50),占菌株总数的19.15%,其中以抑制悬浮Rajii细胞为主.此外,在141株菌中,有74株对一种或二种以上的指示菌显示出抑菌活性,占菌株总数的52.48%.本实验结果表明,麻黄中含有丰富的内生真菌,是抗氧化、抗菌及抗肿瘤等活性物质的重要来源.为进一步从中草药植物中分离筛选新药先导化合物提供了科学依据.