胃癌细胞株(SGC)细胞表面凝集素受体性质的研究

研究了温度、反应时间、蛋白水解酶和单糖对凝集素与SGC细胞反应的关系,还测定了几种凝集素对SGC细胞的毒性作用.结果表明:SGC细胞在50℃保温30min后,细胞表面的凝集素受体基本失活;凝集素与SGC细胞在25℃温育90min后,其凝集反应的强度不再增加;SGC细胞经胰蛋白酶和胶原酶处理后,对细胞表面受体的活性影响不大,但经木瓜蛋白酶处理后,则其受体活性全部丧失;Man、Glc、GlcNAc可以抑制SFL对SGC细胞的凝集作用,但几种单糖对SLL与SGC的凝集作用均无明显的抑制作用;LPL、LPL_1和SLL对培养的SGC细胞具细胞毒性作用,当浓度分别为0.5mg/mL、0.1mg/mL、5mg/mL时,就能使细胞坏死.     

Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中A型血专一性凝集素的研究

用亲和层析法从Phaseolus lunatus Linn vel aff的种子中纯化出一种对人类A型血专一的凝集素.该凝集素的粗浸提液都只对A型血细胞凝集,而对B、O型绝不凝集.当纯化的凝集素浓度为0.98μg/mL时,即能凝集A型血细胞,GalNAc、对硝基苯酚-β-D-吡喃半乳糖苷能抑制其凝集作用;酚—硫酸法测得凝集素含有3.8％的中性糖;该凝集素是一个促有丝分裂原,其细胞转化为67.9％;它的分子量为56500,有两种亚基,分子量分别为17200和14600.凝集素分子中亮氨酸和缬氨酸含量较高,分别为9.83和9.64,而酸性氨基酸含量远比碱性氨基酸为高.     

杂色鲍血清凝集素的初步研究

研究结果表明,杂色鲍血清中自然存在凝集素,该凝集素能够识别和凝集多种不同的细菌和人及动物的红细胞,其中对人体O型和B型血细胞的凝集效价显著高于A型和AB型血细胞(P<0.05);Ca2+能促进其凝集活性,而Mg2+则抑制其凝集活性;凝集作用不同程度地受反应介质的pH、离子强度及反应时间等因素的影响;该凝集素不被透析,在95℃、pH2.0～10.0时仍保持凝集活性,抗RNase、DNase、SDS和乙醚,对蛋白酶K、糖氧化剂NaIO4敏感;凝集素活性能被D-树胶醛糖、L-鼠李糖特异性抑制,D-果糖、D-木糖对其也有显著的抑制作用.     

同型巴蜗牛凝集素的凝集活性及影响因素

对同型巴蜗牛(Bradybaena similaris)蛋白腺提取液凝集活性进行测定,初步提取其凝集素并进行部分性质鉴定.结果表明:在同型巴蜗牛的蛋白腺中存在凝集素,具有血球凝集活性,能够凝集9种动物红细胞,其中,对家兔红细胞的凝集活性最高,可达28,不过,其对家兔红细胞的凝集活性明显依赖于Ca2+;在pH值为7.0～8.0的范围内其凝集活性较稳定,保持100%的凝集活力;温度为40℃持续作用10 min后就失去活性;向同型巴蜗牛蛋白腺提取液加入45%的固体硫酸铵使凝集素沉淀,再用不同饱和度的硫酸铵溶液依次对沉淀物进行抽提,抽提物的比活力提高了约2.56倍,总活力回收为20.00%.     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白的纯化及其免疫活性鉴定

将DH5α/pGXmTSST基因工程菌用IPTG诱导表达,经超声波破碎、离心、收集上清再用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱(GS4B)亲和层析纯化金黄色葡萄球菌无毒诱变GST-mTSST-1融合蛋白.以SDS-PAGE分析该融合蛋白的表达量和纯度,经双向免疫琼脂扩散试验鉴定GST-mTSST-1融合蛋白的免疫活性.结果表明,GST-mTSST-1融合蛋白在重组菌中可溶性表达,通过GS4B胶亲和层析纯化,SDS-PAGE电泳分析得到纯度较高的目的蛋白,其相对分子质量约为47 000,与理论值一致.兔抗GST-mTSST-1抗血清可特异识别天然rTSST-1蛋白中与GST-mTSST-1融合蛋白相对应的抗原组份,证实GST-mTSST-1融合蛋白具有与野生型rTSST-1相同的表面抗原决定簇,具有较好的免疫原性.     

荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的研究

用硫酸铵分级沉淀,当饱和度达40％时,荆豆种子中的荆豆凝集素I就被沉淀出来,再经处理,获得冻干的无盐制剂.当凝集素浓度为7.8μg/mL时,就能凝集人O型血细胞,浓度分别为125μg/mL或500μg/mL时,对人B或A型血发生凝集反应.其凝集O型血的凝集作用可被Fuc所抑制.上述制剂可通过CM—纤维素柱和Sephadex G—200柱2次分子筛过滤而纯化,此纯化的凝集素在PAGE中显示一条蛋白带,浓度为1.25μg/mL时可使O型血和牛精细胞发生凝集反应;浓度为40μg/mL或500μg/mL时,可分别使B型和A型血发生凝集反应.     

泥蚶体液凝集素性能的初步研究

在泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)体液中发现有凝集素存在.利用14种天然或经酶处理的动物和人红细胞来测定泥蚶体液凝集素的凝集活力,并且进行糖(200 mmol·L-1)抑制、热稳定性、pH及Ca2 影响试验.结果显示:泥蚶体液凝集素对14种红细胞均有凝集作用.其中对兔红细胞的凝集作用可被乳糖和半乳糖所抑制,凝集活性依赖于Ca2 ,在pH7.0较稳定,温度为40～60℃范围内均具较高活性,经90℃保温10 min后活性完全消失.     

泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)凝集素的细胞凝集和糖抑制作用的研究

泥蚶(TegillarcagranosaLinnaeus)凝集素能凝集所测试的14种人或动物的红细胞,其中对兔的红细跑的凝集活性最高.泥蚶凝集素也能凝集大鼠和小鼠的肺、脾脏、肝脏、骨髓细胞以及小鼠精子细胞.该凝集素对兔的红细胞的凝集活性不被测试的10种浓度为200mmol·L-1的糖所抑制.     

象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)凝集素的分离纯化及部分性质研究

本文用Sepharose 4B交联鸡卵类粘蛋白亲和层析柱,从天南星科植物象鼻南星(Arisaema elephas S.Buchet)中,纯化出一种具有凝集红细胞活性的糖蛋白.分子量约13,500道尔顿;等电点pH4.5;含糖量约10％.测得肽链N-末端为L-丙氨酸,并对其氨基酸组成进行了分析.象鼻南星凝集素(AEL)能选择性地凝集人的O型红细胞,及鸽、兔、小鼠、马和熊猫等动物的红细胞,但不凝集人的其它血型及鱼、蛙、龟等动物的红细胞.AEL具有光淋巴细胞转化的功能.能凝集人和某些动物的精子.通过FITC荧促标记,初步观察了AEL受体性精子表面的分布.     

3种食用菌凝集素的纯化和部分生物学活性的比较

柱状田头菇、鲍鱼菇、红菇子实体浸出液经硫酸铵分级沉淀、活性炭柱吸附、DEAE-SepharoseFF离子交换层析及Sephadex G-100分子筛层析,得到纯化的柱状田头菇凝集素(Agrocybe cylindraceaLectin,简称ACL)、鲍鱼菇凝集素(Pleurotus abalonusLectin,简称PAL)、红菇凝集素(Russula depallensLcetin,简称RDL).从纯化结果来看,RDL的纯化倍数及蛋白回收率比ACL和PAL高.ACL和RDL对供试动物的红细胞都有凝集作用,PAL只凝集部分动物红细胞并表现出血型专一性.ACL、RDL和PAL除凝集红细胞外也能凝集动物的其它细胞,但PAL不凝集S180瘤细胞.此外,3种凝集素也能凝集某些微生物,如细菌、放线菌、植物病原菌.凝集结果表明ACL、RDL的凝集活性普遍高于PAL.     

两种不同消解方法测定近海沉积物氮磷含量的比较

采用两种不同的消解方法—微波消解法和高压消解法,对近海沉积物中的总氮、总磷进行同时消解,并比较了测定结果.结果表明:高压消解条件下测定样品1和样品2总氮的相对标准偏差分别为7.7%和7.4%,总磷的标准偏差分别为3.9%和7.8%;微波消解条件下测定样品1和样品2总氮的相对标准偏差分别为9.4%和10.1%,总磷的相对标准偏差分别为6.9%和8.1%;两种消解条件下的总磷含量相差不大(样品1分别为0.460 mg/kg和0.454 mg/kg,样品2分别为0.449 mg/kg和0.439 mg/kg),但高压消解条件下的总氮含量(样品1为0.114 mg/kg,样品2为0.122 mg/kg)明显高于微波消解(样品1为0.088 mg/kg,样品2为0.092 mg/kg),且相对标准偏差较小.因此可以认为高压消解方法的精密度高于微波消解方法.     

Polypyrrole-coated styrene-butyl acrylate copolymer composite particles with tunable conductivity

A series of near or monodisperse styrene-butyl acrylate (SBA) copolymer latex particles with different butyl acrylate contents were coated with polypyrrole. The structure of the SBA/PPy composites was characterized by transmission electron microscopy (TEM), scanning electron microscopy (SEM), diffuse reflectance infrared Fourier transform spectroscopy (DRIFT), X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), differential scanning calorimetry (DSC) andstandard fourprobe method. The core-shell morphology of the SBA/PPy composite particles was confirmed. The result of DSC showed that TR of the composite is mainly determined by the core component. The effects of the concentration of polypyrrole, the butyl acrylate content in SBA copolymer and the nature of the counter-anion on the electrical conductivity of compression-moulded samples were studied. It was first found that the electrical conductivity of the samples can be tuned by varying the butyl acrylate content in SBA copolymer and the highest conductivity of the core-shell composite was 0.17 S. cm^-1     

高效液相色谱法测定纳豆及纳豆胶囊中的 大豆异黄酮含量

建立了纳豆及纳豆胶囊中大豆异黄酮的高效液相色谱分析方法,该方法重复性及样品稳定性良好.实验对原料黄豆、纳豆和纳豆胶囊样品采用石油醚索氏脱脂后,对固体样品进行乙醇回流提取,分析了4种大豆异黄酮组分,即大豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素.结果表明,原料黄豆总异黄酮质量比为1 260 mg/kg,纳豆比原料黄豆总异黄酮含量明显高约30%,纳豆胶囊比原料黄豆总异黄酮含量高约11%.     

逆流色谱法分离纯化蒲公英中多酚类化合物

采用pH区带逆流色谱(pH-zone-refining counter-current chromatography,pH-ZRCCC)与高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography,HSCCC)相结合的方式,从蒲公英中分离得到6个多酚类化合物。在pH-ZRCCC分离中,选择溶剂体系为乙酸乙酯-乙腈-水(体积比4:1:5),上相加入三氟乙酸(10 mmol/L)作为固定相,下相加入氨水(10 mmol/L)作为流动相。从1.6 g蒲公英乙酸乙酯粗提物中分离得到咖啡酸(60.2 mg,纯度98.1%)和对羟基肉桂酸(6.3 mg,纯度98.8%)及混合物A(590 mg)。之后进一步利用HSCCC,选择溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比1:4:1:4)。从400 mg混合物A中分离得到1-O-咖啡酰基甘油(7.7 mg,纯度82.2%)、3,4-二羟基苯乙酸(5.4 mg,纯度24.8%)、原儿茶酸(6.2 mg,纯度95.3%)以及对羟基苯乙酸(3.4 mg,纯度89.0%)。该方法制备量大,重现性好,适合蒲公英多酚类化合物的分离纯化。     

高速逆流色谱分离制备大黄化学成分

采用pH-区带精制逆流色谱(pH-ZRCCC)与常规高速逆流色谱(HSCCC)结合技术分离制备大黄粗提物中的化学成分。首先采用pH-ZRCCC分离大黄粗提物,溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3:7:4:6,V/V),上相加TFA(10 mmol/L)作为固定相,下相加Na OH(15 mmol/L)作为流动相。从1.3 g粗提物中得到140 mg桂皮酸(纯度为96.1%)、130 mg大黄酸(纯度为92.5%)和560 mg尾吹物。称取260 mg该尾吹物采用常规HSCCC的方法进一步分离,溶剂体系为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:7:4,V/V),得到约98 mg大黄素(纯度为96.5%)和60 mg芦荟大黄素(纯度为94.6%)。用HPLC检测纯度,用ESI-MS和1HNMR鉴定结构。研究结果表明pH-ZRCCC与HSCCC结合是分离大黄中化合物的一种有效方法。     

季戊四醇的高效液相色谱分析

研究了季戊四醇的HPLC(高效液相色谱)分离条件和一季戊四醇的定量方法,测定了一季戊四醇标准样品的纯度,采用外标法峰高定量,测定了商品季戊四醇中一季戊四醇含量.相对标准偏差小于1％。     

透析法和稀释法复性重组人Cu,Zn-SOD包含体

以稀释法和透析法对在E.coli中以包含体形式表达的重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)进行复性.以8 mol/L尿素溶解分离纯化的包含体(纯度达80%以上),对其稀释或透析至尿素终浓度为1.0 mol/L后,在稀释样品中补加终浓度50μmoL/L的Cu2+和5.0μmoL/L的Zn2+,在透析样品中补加终浓度5.0μmoL/L的Cu2+和0.5μmoL/L的Zn2+,分别获得了比活3 300 u/mg和4 300 u/mg的复性rhSOD.该复性样品经铜螯合亲和层析柱纯化可获得更高比活性的rhSOD.     

超临界CO2萃取-高速逆流色谱分离纯化丹皮中丹皮酚

采用超临界CO2提取中药丹皮中总丹皮酚,选择萃取温度、萃取压力、物料粒度为因素进行正交实验优选出超临界CO2萃取的最佳工艺条件：即物料粒度40～60目,萃取温度40℃,萃取压力20MPa,提取率可达90%以上。将萃取后的总丹皮酚应用高速逆流色谱进行分离纯化,两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水（1：0.4：1：0.4）,进样量为330mg,得180mg纯度为99.0%的丹皮酚。     

红豆越橘总三萜的纯化及体外抗炎活性

【目的】为了综合开发利用红豆越橘果实,通过大孔吸附树脂-Sephadex LH-20纯化工艺获得纯度较高的红豆越橘总三萜化合物,并分析此三萜化合物的体外抗炎活性。【方法】以野生矮丛红豆越橘为原料,首先采用静态吸附-解析实验和动态吸附-解析实验筛选大孔吸附树脂,优化最佳工艺,确定最佳上样质量浓度、pH、上样体积、上样流速以及洗脱液浓度; 然后采用Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶二次纯化,获得高纯度的红豆越橘总三萜; 采用对透明质酸酶和牛血清白蛋白的变性抑制率为抗炎评价指标,分析红豆越橘总三萜的抗炎活性。【结果】比较7种大孔树脂对红豆越橘总三萜的纯化效果,结果显示,X-5树脂最适合初级纯化,最佳纯化工艺优化结果为上样质量浓度1.5 mg/mL、样液pH 6、上样量为4/3 BV、上样流速1 BV/h、80%(体积分数)的乙醇进行洗脱,红豆越橘总三萜的纯度由原来的5.13%提高到29.46%。进一步采用Sephadex LH-20二次纯化获得纯度为(43.25±0.31)%的红豆越橘总三萜,抗炎活性结果显示,对透明质酸酶和牛血清白蛋白变性抑制率分别可达(81.5±1.37)%、(72.59 ±1.84)%。【结论】红豆越橘是一种营养丰富的浆果,通过二次纯化技术获得纯度较高的三萜类化合物,并初步证实红豆越橘总三萜具有一定的抗炎活性。