聚合酶链式反应（PCR）技术研究新进展

聚合酶链式反应(PCR)在生命科学的研究领域已经得到了广泛的应用．文中对PCR技术的一些最新进展进行了简要的综述,其中包括定量PCR、纳米PCR、PCR芯片、原位PCR和免疫PCR的原理和应用．     

PCR技术综述

本篇文章重点针对PCR的概念,原理和方法的理解,简单介绍了常用的PCR及其相关技术的原理,方法以及应用。     

利用重叠延伸PCR技术扩增长片段DNA

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的DNA基因片段的方法.该技术可以高效、快捷、经济地扩增长片段DNA,在基因功能研究方面显示出良好的应用前景.综述了重叠延伸PCR技术的原理、特点以及利用该技术构建长片段DNA的方法和注意事项,并对该技术的应用前景进行了展望.     

实时荧光定量PCR的原理及应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR）是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术,已成为分子生物学和其它领域的重要技术工具。本文对实时荧光定量PCR技术的原理及其在食品、医学、环保领域的应用进行综述。     

环境工程中微生物分析方法研究进展

本文阐述了环境工程中常用的微生物分析方法原理及其应用,重点介绍了目前应用较多的聚合酶链式反应(PCR)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、PCR-DGGE分子生物学分析方法原理,探讨了PCR-DGGE技术在国内外环境工程中的应用,分析了微生物分析方法的现状以及PCR-DGGE技术用于生物处理系统中微生物群落多样性和动态性研究的现状、前景和改进的策略。     

免疫PCR的方法学研究进展及临床应用

详细介绍了免疫PCR方法的原理、方法学类型、实验条件控制及临床应用.     

Real-time PCR的研究进展及其应用

本文综述了real-time PCR的原理、定量方法及其在各领域的应用。     

PCR技术在环境监测中的应用态势

PCR技术是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法,其反应原理与细胞内的DNA复制相似。由于PCR本身具有的简便、快速、灵敏、特异性强等优点,使其广泛应用于水体、土壤、大气等环境监测领域,大大提高了监测水平。     

PCR技术在转基因食品检测中的应用

本文概述了转基因食品国内外发展现状及PCR技术的基本原理和步骤,着重论述了不同PCR技术在转基因食品检测中具体应用和研究进展,并展望了PCR技术在转基因食品检测中的应用前景。     

PCR及其应用

本文汇总近年来国内外有关PCR方面的资料,对PCR的意义、原理、操作、应用及今后展望等方面做了详细全面的介绍.     

菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较

为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株,并和常规PCR方法比较,初步建立了菌落PCR技术;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性．通过比较,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致,两种方法均能扩增出阳性对照标准菌株中tlh和tdh基因．     

适应调频同步广播的MPEG-2再复用器PCR修正算法

 节目参考时钟（PCR）是MPEG-2系统中音视频解码的时间基准,MPEG-2解码器利用PCR时间信息控制MPEG-2视频解码、显示时间及音视频同步。PCR修正是MPEG-2再复用器设计的关键技术之一。对目前再复用器实现中的PCR修正算法及MPEG-2标准传输流中PCR进行分析研究,提出了一种新的MPEG-2再复用器PCR修正算法。采用该修正方法,可以避免再复用器在再复用过程中对MPEG-2信号进行缓冲后PCR包中标识的PCR值和解码器实际接收到PCR包时的时间值不一致情况的发生;解决了MPEG-2解码时由于不一致引起的PCR抖动和缓冲区溢出问题;使解码器可以利用该PCR信息恢复出编码端的时钟,保持编、解码器时钟同步。采用该修正算法修正的再复用器的音频信号可满足对时间要求更苛刻的调频同步音频广播的要求。     

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况, 针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增, 建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法. 对18个21日龄鸡胚培养、分离, 获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落. 用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增, 证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18). 本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.     

一株啤酒污染菌的分离鉴定及快速检测方法

在成品瓶装啤酒中分离得到1株有害的污染菌。经表型性状分析、生理生化反应、G C含量测定以及16S rDNA序列分析,鉴定为Lactobacillus acetotolerans。建立了1种新的快速鉴定啤酒有害菌的PCR方法,这种方法基于抗酒花基因horA的部分序列。用传统的检测方法检测有害菌需要8~10 d,而用新的PCR方法仅需24~32 h。     

鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法的建立及应用

目的建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法,并应用于鸡胚及禽源性生物制品的检测。方法根据鸡胚致死孤儿病毒长纤突保守序列分别设计3对引物,优化并建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法;分别采用该方法对SPF鸡胚和流感疫苗、麻疹疫苗进行检测。结果建立的方法可检测到10-9稀释的病毒DNA;该方法与鼠腺病毒及猴腺病毒无交叉反应;在SPF鸡胚及禽源性生物制品中应用该方法均未检出病毒。结论该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于禽源性生物制品中鸡胚致死孤儿病毒的检测。     

聚合酶链反应诊断男性淋菌性尿道炎

用淋球菌聚合酶链反应诊断男性淋菌性尿道炎，６１例患者中９例作分泌物培养和ＰＣＲ，培养阳性２例，ＰＣＲ阳性５例；５２例先取尿道拭子作培养，后取始段晨尿作ＰＣＲ，培养阳性１例，ＰＣＲ阳性１８例．培养总阳性率４．９２％，ＰＣＲ总阳性率３７．８％，两者有显著性差异．笔者认为晨尿淋菌ＰＣＲ可作为一种敏感方法用于本病的诊断．     

鼠痘病毒PCR检测方法的建立及在鼠源性生物制品检定中的应用

目的建立小鼠鼠痘病毒PCR检测方法,并应用于鼠源性生物制品的检测。方法根据鼠痘病毒基因组序列中保守的crmD片段设计一对引物,建立鼠痘病毒PCR检测方法;人工感染20只小鼠,对其肝、脾、肾、脚掌及血液采用该方法进行检测;提取鼠源性生物制品中DNA,采用该方法检测其是否存在鼠痘病毒。结果该方法可以检测到稀释至10-5感染鼠痘病毒的细胞,在BHK21细胞和牛痘病毒中均未扩增出相应片段;该方法可检测出人工感染小鼠不同组织中病毒DNA;在鼠源性生物制品中未检测出鼠痘病毒DNA。结论该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于染病动物组织及鼠源性生物制品中鼠痘病毒的检测。     

支原体种属特异性PCR引物的设计及对细胞培养物支原体的检测

目的快速全面检测感染细胞、疫苗等多种生物制品中的支原体.方法从多种支原体的16SrRNA核酸序列中选择了两段高度保守的核酸序列,作为支原体种属特异性引物,对标本进行检测.结果用这对种属特异性引物对已知阳性的50份标本进行检测,检测结果显示全部为阳性.应用于实践,检测了89份疫苗标本,阳性率为31.4%,而用常规培养法检测阳性率为12.3%.结论用该种属特异性引物检测支原体具有检测速度快、检测灵敏度高、特异性强等优点.     

猫细小病毒 PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要: 目的 建立猫细小病毒 PCR 检测方法,应用于猫临床样本中 FPV 的快速检测。方法 根据已发表的 FPV VP2 基因序列设计合成引物,并以此建立 FPV 的 PCR 检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。 用建立的方法对 33 份猫临床样品进行检测。结果 建立的 FPV PCR 检测方法与猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)、猫冠 状病毒(FeCV)、猫合胞体病毒(FeSFV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为 5lgTCID50 / mL,相应的 DNA 模板浓度为 4. 9 × 102 拷贝/μL;FPV DNA 在 － 30℃冰箱放置 12 个月仍可检测出目的条带。应用 该方法从 33 份猫临床样本中检测出 21 份 FPV 核酸阳性。结论 建立的 FPV PCR 检测方法具有特异、敏感及稳定 的特点,适合于临床 FPV 的感染检测。     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。