三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。     

应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应（PCR）的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

应用于PCR技术的DNA聚合酶

DNA聚合酶作为聚合酶链式反应(PCR)的重要因素之一,在PCR过程中起着至关重要的作用,在某种意义上甚至可以说,PCR技术就是耐热DNA聚合酶的技术。故综合研究聚合酶并改善其酶学性能,已成为分子生物学工作者关注的热点之一。本文就PCR技术产生至今DNA聚合酶的研究历史及现状进行简要综述。     

一种快速制备毕赤酵母表达系统P CR鉴定模板DNA的方法

文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。     

一种基于Propidium Monoazide与PCR结合的选择性检测细菌活细胞的方法

建立了一种PMA与PCR结合的细菌活细胞检测的方法,可有效抑制微生物死细胞DNA的PCR扩增,从而排除死细胞对微生物活细胞检测的影响．结果表明,PMA浓度大于3 μg/ml时可抑制死细胞DNA的PCR扩增,PMA浓度高达50 μg/ml时仍不影响活细胞DNA的PCR扩增;并且得出曝光时间大于3 min可使PMA与死细胞DNA分子共价交联,抑制其PCR扩增;浊度影响PMA交联的结果表明浊度小于10 NTU时,PMA仍能有效地抑制死细胞DNA的PCR扩增,而当浊度大于100 NTU时,PMA失去效果．     

硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA

在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化.     

DNA的不同提取方法对转基因产品定值的影响

国内外非常重视转基因产品的检测工作,主要依赖于DNA的PCR方法进行检测,其检测结果可靠、稳定、灵敏度较高。尤其在转基因产品的定值实验中,荧光定量PCR的应用起到重要的作用,但是DNA的质量是保证荧光定量PCR定值准确的关键。实验以100%的克螟稻为材料,用CTAB法、商品化的Promega、Qiagen以及TIANGEN提取试剂盒,分别提取克螟稻基因组DNA,经过核酸蛋白分析仪初步测定浓度、纯度以及离子浓度后,分别以水稻内源基因PLD和克螟稻特异性转化体引物及探针实施荧光定量PCR实验,以100%克螟稻为盲样实施定值,来确定一种更适合荧光定量PCR定值实验的DNA提取方法,最终确定Qiagen和TIANGEN提取试剂盒满足荧光定量PCR对100%的克螟稻标准物质定值实验的要求。     

一种适用于批量筛选和鉴定拟南芥突变体的快速DNA提取方法

DNA提取是拟南芥突变体筛选与鉴定中的关键环节.结合拟南芥突变体鉴定特点和DNA提取特点,对传统SDS法进行改良,摸索出一种简易、快速且经济的DNA提取方法,并将其应用到突变体的批量筛选与鉴定中.使用该方法可在常温下利用10mg左右拟南芥叶片,以少量试剂,通过简单的研磨、离心、沉降和干燥等步骤便能快速制备用于PCR检测的DNA模板.采用本方法个人提取单个样品DNA仅需15min左右,每小时可提取48个DNA样品.研究采用该方法提取了一批待鉴定拟南芥突变体的DNA样品,利用三引物法对其进行PCR检测,结果表明DNA样品浓度高,DNA扩增成功率高达100%,且目的条带清晰,说明该方法在拟南芥突变体的筛选和鉴定上是适用且高效的,可广泛应用于实验室突变体库的建立.     

黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。     

唇鱼骨基因组DNA提取与ISSR-PCR的优化

以唇鱼骨为材料,分别采用4种不同方法(CTAB法、SDS法、ROSE法及试剂盒)提取基因组DNA,并对影响PCR反应的模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度等主要因子进行了优化,建立了适合唇鱼骨基因组DNA的ISSR-PCR反应体系.25μL的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:约60 ng模板DNA,1.2 U Taq酶,0.4 μrnol/L引物,2.0 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,2%甲酰胺.结果表明,利用优化反应体系对4种不同方法提取的DNA进行PCR扩增,均能得到较好的PCR扩增条带,以试剂盒法最佳,为淡水溪流性同属鱼类遗传多样性分析奠定了技术基础.     

试论“十二五”四川省环境监测工作发展方向

本文简要介绍四川省环境监测的发展历程,对“十一五”全省的环境监测发展状况．存在问题进行了总结,根据面临的新形势新任务,从环境监洲的实际需求出发,提出了“十二五”四川省环境监潮的主要发展方向与重点突破璜目。     

土壤细菌基因资源的直接分离——16S核糖体RNA基因模式

细菌遗传资源的开发利用必须先分离纯培养物,但绝大多数环境细菌无法人工培养。由于基因工程技术能直接利用基因元件,为绕过人工培养的困难,我们以细菌１６Ｓ核糖体ＲＮＡ基因为模式,建立了直接从土壤中分离基因元件的方法,该方法包括直接从土壤中分离ＤＮＡ,ＰＣＲ扩增基因和ＰＣＲ产物克隆等步骤,为直接收集,利用土壤细菌遗传资源奠定了基础。     

环境安全概念及重要性探讨

环境安全是关系到地球上一切生物的生存与可持续发展、一个国家的稳定与发展及世界和平与安定的根本问题，是当前环境科学与人文社会科学研究的热点。本文就环境安全问题的由来与发展、环境安全的概念、环境安全的特点和实施环境安全的重要性等问题进行了探讨。     

论地学与考古学的相互关系

中国考古学源于生物地层学研究，并从中国近代考古不创立开始，就很重视古代人为生存环境的研究。生存环境研究是环境考古学的重要研究内容，但无法以生存环境研究替代环境考古学研究。地学与考古学结合可使两学科得到互补，协同发展。     

发展中的新兴学科:环境物理学

简述由物理因素引起的环境污染及其防护措施;从学科建设角度论述完善环境物 理学科的可能性、必要性和紧迫性,呼吁重视、改善和保护人类所处的物理环境。     

环境中萘酚测定方法的研究进展

1-萘酚和2-萘酚广泛应用于生产生活中,污染环境并对人体产生危害,对其在环境中的含量进行监测十分必要.从紫外光谱法、荧光光谱法、高效液相色谱法、电化学分析法和联用技术等方面对环境中萘酚的测定方法进行了综述.样品前处理新方法的研究、新材料的开发并用于电化学检测等是未来环境中萘酚测定方法研究的发展趋势.     

浅谈突发环境事件应急监测演习的策划

近年来,随着各地经济的高速发展,突发性环境污染事件的发生率呈上升趋势。为检验环境监测部门处置突发环境事件的应急监测能力,及时发现系统中存在的问题,进一步提升应急监测的实战水平,各地环境监测部门按照相关法律、法规和预案等的要求,有计划地开展突发环境事件应急监测演习。本文归纳了应急监测演习的基本概念,以及应急监测演习的各组成部分,并提出了相关建议,希望以此为相关部门策划突发环境事件应急监测演习提供参考。     

环境监测在企业环境管理中的作用

简单介绍环境监测的任务及重要性,着重阐述环境监测在环境管理中的地位和作用.通过企业环境管理示例,进一步说明环境监测数据能够及时、准确、全面地反映企业环境质量现状,可为企业环境治理提供科学依据.     

制革工业中铬污染及防治

扼要探讨了制革工业中的主要污染源之一-铬对生物的影响及其环境标准,并综合介绍了铬的分析方法及其污染防治技术。     

环境减灾卫星遥感宏观监测应用评价研究

文章介绍了环境减灾卫星的基本情况,结合环境减灾卫星遥感数据(HJ-1)在黑龙江省土地利用宏观监测中的实际应用,针对HJ-1数据的生产流程及生产方法进行了详述,对土地利用遥感宏观监测技术路线进行了研究,并通过高分辨率卫星遥感影像数据对宏观监测成果及其质量进行精度评价与验证,建立一套基于HJ-1数据的土地资源调查监测技术方法与流程,为在全国范围内广泛应用环境减灾卫星数据积累经验和技术方法。