响应面法优化银鱼多肽的酶解工艺研究

为了提高银鱼的附加值,采用蛋白酶水解其蛋白制备银鱼多肽.以水解度为优化指标,确定酸性蛋白酶为最佳用酶,研究了温度、pH、料液比和加酶量对水解度的影响.用Design-Expert 8.0软件进行响应面最佳条件优化,确定最适水解条件为:41℃,pH 4.0,料液比1∶52,酶解时间6h和加酶量2.3%.优化后水解度达到15.13%,为银鱼的综合利用提供了一种新方法.     

一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化

为了获得碱性蛋白酶高产菌株,从采集的海泥中筛选得到20株具有一定产碱性蛋白酶能力的菌株,经过复筛得到5株产酶能力较高的菌株,其中菌株SDL9产碱性蛋白酶能力强、pH耐受范围广。考察了培养基初始pH值、培养温度、培养时间、装液量、接种量等单因素对菌株SDL9产酶能力的影响,然后进行正交试验分析,得出该菌的较佳发酵条件为pH值9.0、发酵时间18 h、20 mL培养液/50 mL三角瓶和接种量3%。影响产酶的强弱顺序为:pH值、培养时间、接种量、装液量,菌株SDL9在较佳发酵条件下的发酵液的最大酶活力达197.58 U/mL。本研究表明从秦皇岛海域可以获得碱性蛋白酶高产菌株,丰富了菌种资源。     

米糠蛋白活性肽的制备工艺研究

初步研究酶法水解米糠蛋白制备米糠活性肽的工艺条件,同时探讨了不同料液比、pH值、温度和提取时间对蛋白水解率的影响.通过正交优化实验得出酶水解米糠蛋白的最佳条件是:酶解温度37℃,加酶量为0.5%,酶解时间是3h,酶解pH值为9.结果表明碱性蛋白酶酶解法和三氯乙酸酸溶法相结合,是一种很理想又有效的制备蛋白肽的方法.     

高F值寡肽液中芳香族氨基酸的脱除工艺优化

为了脱除酶解鱿鱼碎肉制备的寡肽液中芳香族氨基酸以提高寡肽的F值,研究了活性炭串联静态吸附法的脱除效果。在对活性炭型号进行筛选的基础上,探讨了温度、pH、固液比、吸附时间对芳香族氨基酸吸附效果的影响,通过正交试验优化了吸附工艺。结果表明,325目粉末活性炭吸附效果最好,最佳吸附条件为温度25℃、pH为2、固液比1:25,第一次吸附时间180 min,第二次吸附时间30 min,吸附后寡肽液F值达到25.209。     

食用菌鲜味强度评价及鲜味氨基酸和核苷酸提取工艺优化

通过高效液相色谱对9种食用菌的鲜味氨基酸、核苷酸含量进行检测并计算等鲜浓度(EUC)值,再结合感官分析和电子舌技术评价9种食用菌的鲜味强度。结果表明:鹿茸菇在9种食用菌中的感官评分和电子舌的鲜味评分值最高,EUC值为160.56 g/100 g,因此选用鹿茸菇为原料进行酶解提取工艺研究,以EUC值为考察指标,选用纤维素酶和风味蛋白酶复合,通过单因素实验和响应面法对鹿茸菇中鲜味氨基酸和核苷酸提取工艺进行优化,得到食用菌的优化酶解条件为:料液比(g/mL)1∶44.78、纤维素酶添加量1 607.52 U/g、风味蛋白酶添加量3 044 U/g、酶解时间6.14 h、pH值6.50。以优化条件进行3次平行实验,得到EUC实际值为406.74 g/100 g,与预测值相对误差为6.12%。     

酶解制备贻贝抗氧化肽与功能性鱼糕的研制

开发具有抗氧化活性的功能性鱼糜制品。采用酶解法并筛选中性蛋白酶为最适蛋白酶制备贻贝抗氧化肽。利用正交设计优化酶解工艺条件,确定酶解温度45℃、酶解时间1h、酶添加量1500U/g、料液比(g/mL)1∶5为较优酶解工艺条件,在此条件下酶解产物多肽得率达到(73.62±0.86)mg/g。添加质量分数大于2%的经冷冻干燥的贻贝酶解产物到鱼糕中,检测其在鱼糕中对猪油的抗氧化作用,经方差分析得知其有显著的抗氧化作用。以此说明鱼糕是具有抗氧化性的功能性食品。     

超微粉碎辅助提取玉米皮水溶性膳食纤维的研究

以玉米皮为原料,利用超微粉碎与酶解技术提取玉米皮水溶性膳食纤维,并通过单因素实验和正交试验确最佳制备工艺条件。结果表明,玉米皮超微粉粒径为38～45μm,酶解温度55℃,酶解时间为2.5 h,酶添加量为0.8%,料液比为1∶23(g/mL)时,玉米皮水溶性膳食纤维得率最高,为13.69%。     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.     

膜酶结合制备玉米多肽的工艺研究

玉米黄粉是玉米提取淀粉的副产物,常被当作废物处理。以此为原料制备玉米肽以提高其附加值。研究运用酶法制备玉米多肽,确定了添加半胱氨酸对其预处理。用碱性蛋白酶对其酶解,并用膜技术对玉米多肽液进行浓缩和纯化的工艺流程。碱性蛋白酶的最佳水解条件为:底物浓度2.0%,酶与底物浓度比为3.0%,温度50℃,pH为8.5。经过膜处理后,玉米多肽液可浓缩4.9倍,脱盐率达90.52%。     

枸杞渣酶解糖化条件优化

为了合理利用枸杞提取多糖后的残渣，本研究以枸杞渣为原料，通过单因素及响应面试验，分析液料比，复合酶比例，复合酶添加量，酶解时间，酶解温度，pH对枸杞渣还原糖得率的影响，确定最佳酶解工艺。结果表明：枸杞渣酶解的最佳条件为液料比5∶1,复合酶比例1∶4,复合酶添加量2.0 mL,酶解时间3 h,酶解温度63℃,pH 4.5。在该优化条件下，枸杞渣还原糖得率为(68.54±0.09)%,与模型预测值68.83%接近，该模型可用于优化枸杞渣酶解糖化条件。     

嗜热菌Lon蛋白酶的功能分析

Lon蛋白酶是一种在各种生物体内广泛分布并且具有多种生物功能的蛋白质.以嗜热栖热菌（Thermus thermophilus HB8）的Lon蛋白酶（TTLon）为研究对象,将TTLon蛋白酶的编码基因克隆至pTrc His载体,并在大肠杆菌中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行分离纯化,并通过一系列实验证明Lon蛋白酶能够与ATP结合,具有依赖ATP的蛋白酶活性和依赖ATP的分子伴侣活性.     

离子对深海适冷菌Pseudoalteromonas sp. SM9913胞外蛋白酶分泌的影响

以海水产酶发酵培养基为对照，研究了多种离子对P. sp. SM9913 胞外蛋白酶分泌的影响. 结果表明，淡水培养基添加NaCl浓度越高，胞外蛋白酶的酶活也越高. K+、Ca2+、磷酸盐的协同作用促进胞外蛋白酶的分泌. Mg2+能够明显抑制胞外蛋白酶的分泌. Fe3＋对胞外蛋白酶分泌影响不明显.Sr2+、F-、B-这3种离子单独作用时都能促进胞外蛋白酶的分泌；但是这3种离子协同作用劣于单独作用. 实验浓度下上述多种离子协同作用可明显促进胞外蛋白酶的分泌. 该研究为深海适冷菌P. sp. SM9913 的淡水化培养和进一步研究胞外蛋白酶的分泌机制奠定了基础.     

变性剂和缓冲系统对适冷蛋白酶MCP-01和中温蛋白酶BP-01构象影响的圆二色光谱分析何海伦， 陈秀兰*

运用圆二色（CD）光谱分析了适冷蛋白酶MCP-01和中温蛋白酶BP-的二级结构。与BP-01相比,MCP-01具有较低的α螺旋含量和较高的无规则卷曲,表明适冷蛋白酶MCP 01的结构可能具有较高的柔性和较低的稳定性。测定MCP-01和BP-01的变性温度表明,MCP-01的变性温度比BP 01 低10.7℃。测定了变性剂盐酸胍（GuHCl）、2,2,2 三氟乙醇（TFE）对MCP-01和BP-01结构的影响。盐酸胍使MCP-01和BP 01变构的浓度分别为1.0mol/L和3.0mol/L,TFE造成MCP 01和BP 01开始变构的含量分别为20%和30%。这表明,与中温酶相比,变性剂在较低浓度下就可使适冷酶变构,从而造成活性的丧失。检测了两种蛋白酶在保温过程中构象的变化情况。不同缓冲系统明显影响MCP 01的构象稳定性,MCP 01在不同缓冲液中构象稳定性为：碳酸缓冲液相似文献   

Construction of a cell-free system using extracts from apoptotic plant cells

To study the mechanism of plant apoptosis, a cell-free system has been developed using the extracts prepared from tobacco cells that become committed to apoptosis induced by heat shock treatment. Tobacco nuclei have displayed such characteristics of apoptosis as nucleus condensation and formation of apoptotic bodies during incubation in this system. Besides, these morphological changes are accompanied by DNA fragmentation, which is detected by DNA laddering and comet assay. Furthermore, both morphological changes and DNA cleavage are not affected by pepstatin A, leupeptin or EDTA, but are partly inhibited by iodoacetamide. This profile is consistent with Caspases, which are vital to animal apoptosis, suggesting that cysteine-protease like Caspases may be involved in apoptosis in plants.     

pH渐变条件下双酶协同水解大豆蛋白

研究了在没有外加碱的pH渐变条件下．用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2．4L,酶活力2．4AU/g)和黑曲霉酸性蛋白酶(酶活力3000u／g)双酶协同水解从大豆蛋白制备寡肽(10个氨基酸以下的肽)水解物的可行性．考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对大豆蛋白降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解大豆蛋白的最佳条件：水解温度为60℃．碱性蛋白酶加入量为每g蛋白15μL,酸性蛋白酶加入量为6％,底物浓度为40g／L,水解时间为18h．在上述最佳条件下,大豆蛋白的降解率可达76％,蛋白质的水解度可达26％,水解物中相对分子质量小于1350的寡肽达到了66％．结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高大豆蛋白降解率以及蛋白质水解度．     

酶解鱿鱼蛋白的制备

探讨了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白、酶菠萝蛋白酶以及复合蛋白酶对鱿鱼蛋白的酶解效果.实验结果表明,在相同水解条件下,复合酶对鱿鱼蛋白的水解效果优于单酶,确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为水解鱿鱼蛋白的适宜水解酶,两种酶量的比例为1:1,正交实验得出最佳水解条件为:温度50℃、pH7、时间8 h、加酶量6 000IU/g.     

产耐热蛋白酶菌株的分离和酶性质的研究

从南汇县黄路乡一草堆下的土壤中分离到一株产耐热蛋白酶的链霉菌。该酶的最适反应温度为７０℃。在６０℃时稳定，当８０℃时处理１０ｍｉｎ，尚余８４％活性。在Ｃａ＾２＋存在的条件下，酶的热稳定性有显著提高。酶反应的最适ｐＨ为８．５，在ｐＨ５～９之间稳定，因此属于微碱性蛋白酶。通过抑制剂试验，该酶基本上被ＰＭＳＦ（苯甲基磺酰化合物）抑制，但不被金属螯合剂（ＥＤＴＡ，双吡啶）抑制。金属离子Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２     

不同pH 条件下鳜鱼消化道蛋白酶活性研究

初步研究了不同pH条件下鳜鱼(Sinipercachuatsi)消化道不同部位蛋白酶活性的差异.结果表明鳜鱼消化道不同部位蛋白酶的活性存在较大差异,最适pH也不相同.消化道不同部位蛋白酶的活性强弱顺序为:幽门盲囊>胃>肠前段>肠后段.幽门盲囊的蛋白酶活性最强,明显高于胃、肠前段和肠后段.蛋白酶活性在幽门盲囊的最适pH为8 0～10 4,且在偏碱性条件下有较强的活性;在胃部的最适pH约为2 8,且在偏酸性的条件下活性较高;在肠前段和肠后段的最适pH为9 8.     

蚯蚓纤溶酶的分离及其生物学特性

经过分离纯化，从人工养殖的赤子爱胜蚓中提取出两种既有纤维蛋白溶酶原激活因子活性又能直接溶解纤维蛋白的组分。ＰＡＧＥ检测各为一条区带，证明已达电泳纯。对这两组分的生物学性质进行了研究，包括分子量、酶活力，Ｎ－末端氨基酸残基，氨基酸组成，温度的稳定性及对苯甲酸精氨酸乙酯（ＢＡＥＥ）的酶促反应动力学特性。还分析了其中一个组分（ＢⅡ）从Ｎ末端开始的 ２５个氨基酸残基序列。