幽门螺杆菌cag7-n基因克隆表达及其重组蛋白对BGC-823细胞生物学的影响

目的研究克隆幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）cag7-n基因对BGC-823细胞增殖和IL-8分泌的影响.方法采用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增cag7-n基因片段,构建重组质粒pET-28a-cag7-n,转化大肠杆菌BL21,经Western blot鉴定,纯化的蛋白作用于BGC-823细胞,用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响.结果成功克隆cag7-n基因,经镍柱纯化后可获得纯度为98%的重组蛋白.纯化蛋白浓度在100,150,200μg/mL时,培养时间延长,细胞的增殖受到抑制;在相同的培养时间,细胞的增殖程度随蛋白浓度的增加而降低.结论成功克隆了cag7-n基因,并在大肠杆菌BL21中表达,经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白,纯化透析后的蛋白与BGC-823细胞共培养,可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达及其对BGC-823细胞增殖的影响.     

重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究

目的研究重组的金针菇免疫调节蛋白(re FIP-fve)对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用、诱导小鼠脾淋巴细胞对白细胞介素-2(IL-2)的促分泌作用及对血细胞的凝集作用.方法采用离子交换色谱法,利用SP Sepharose XL色谱柱纯化重组的免疫调节蛋白;将纯化后的蛋白作用于小鼠脾淋巴细胞和血细胞,用MTT法检测蛋白对脾细胞增殖和血细胞凝集的影响;用ELISA法检测蛋白对淋巴细胞分泌细胞因子的作用.结果经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度为86%的重组蛋白;纯化蛋白浓度在80μg/m L时最大限度促进细胞增殖;蛋白浓度在2μg/m L时开始出现凝血;ELISA检测结果显示:重组的金针菇免疫调节蛋白能明显增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)的水平.结论经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度较高的蛋白;纯化后的蛋白与小鼠脾淋巴细胞共同培养,不仅可以促进脾细胞的增殖,而且能增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2的水平;蛋白与血细胞共同培养能够促进血细胞的凝集.     

维药异常黑胆质成熟剂的抗肿瘤作用及其对细胞迁移的影响

探讨维药异常黑胆质成熟剂(ASM)抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞迁移的影响.体外培养人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP 细胞株、人宫颈癌 Hela 细胞株、人胃癌BGC-823细胞株,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法检测不同浓度ASM(1、2.5、5、10、15、20、50mg/mL)对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株4种肿瘤细胞增殖的影响;选择人肝癌Bel-7402细胞株为研究对象,采用细胞划痕运动实验和扫描电镜技术,观察不同浓度ASM对肝癌细胞迁移的影响.MTT检测结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞株、人乳腺癌BCAP细胞株、人宫颈癌Hela细胞株、人胃癌BGC-823细胞株生长均有一定抑制作用,且在15～20mg/mL作用下最为明显,对不同肿瘤细胞株抑制作用不一;体外细胞划痕运动实验和扫描电镜结果显示,ASM对人肝癌Bel-7402细胞运动有一定抑制作用.由此推论,ASM对肿瘤细胞增殖和肿瘤细胞迁移有一定抑制作用.     

芒果苷对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其机制研究

利用相差显微镜观察细胞形态变化情况;用MTT法测定芒果苷对A549细胞增殖作用的影响以及Western-Blot法检测芒果苷对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白分子表达水平的影响.结果显示,与对照组相比,芒果苷对人肺腺癌A549细胞的抑制率与浓度和时间均呈正相关性.在有效浓度为3μM,作用最佳时间为48h时,A549细胞的镜下形态和结构发生显著的变化;并且导致Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性以及它们的剪切小体数量增加.表明芒果苷对人肺腺癌A549细胞具有抑制增殖的作用,并且通过caspase依赖性途径诱导A549细胞凋亡.     

雌酚酮-17-杂环取代衍生物的合成及抗肿瘤活性评价

以雌酚酮为原料,合成了7个雌酚酮-17-杂环取代衍生物,经过核磁共振~1H NMR、~(13)C NMR、质谱MS和红外光谱IR确定了目标化合物的化学结构。选用人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌细胞(Hela)和人肺癌细胞(A549)对化合物进行抗增殖活性评价。结果表明,雌酚酮-17-(5-氯-吲哚)腙(3f)对Hep G2细胞和Hela细胞具有显著抑制活性,其半数抑制浓度(IC_(50))分别为13. 60μmol/L和8. 74μmol/L。     

Ni元素对铜绿微囊藻的生长、光谱特性及藻胆蛋白含量的影响

 为了探讨微量元素对蓝藻水华生消的影响及其机理,研究了不同浓度Ni对铜绿微囊藻生长、光谱特征及藻胆蛋白含量的影响,结果表明:Ni元素对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa 905)的生长、光谱特性及藻胆蛋白含量均有影响.①Ni元素在低质量浓度(<0.10μg/mL)下促进藻细胞生长,高质量浓度(0.30～1.00μg/mL)下抑制其生长;②Ni元素处理使藻细胞吸收光谱峰位红移、吸光值降低,表明Ni元素使叶绿素和藻胆蛋白变性,抑制了藻细胞的吸光能力;③Ni元素在较低质量浓度(<0.30μg/mL)下使藻胆蛋白的吸收峰值升高,在较高质量浓度(0.40～1.00μg/mL)下则使其降低;④Ni元素在低质量浓度(<0.30μg/mL)下会使藻蓝蛋白(PC)含量增加,高质量浓度(0.40～1.00μg/mL)下则使其减少;不论在高质量浓度还是低质量浓度下,均使别藻蓝蛋白(APC)含量减少.     

蛇葡萄素对结肠癌细胞增殖抑制、自噬诱导及自噬对增殖的影响研究

明确蛇葡萄素(Ampelopsin,AMP)对人结肠癌HCT116细胞增殖的抑制,探讨自噬活化及自噬对AMP抑制细胞增殖作用的影响,为AMP临床研究抗肿瘤作用的自噬靶点提供依据.采用CCK-8法检测AMP(0～300μg/m L)作用HCT116细胞后细胞增殖变化,确定AMP的抗肿瘤作用;慢病毒感染法构建HCT116-RFP-GFP-LC3重组细胞株研究自噬标志蛋白LC3的荧光表达,结合蛋白质印迹法检测自噬标志蛋白LC3I/II和P62的表达确定细胞自噬活化状态;通过抑制剂Baf A1阻断HCT116细胞自噬晚期降解过程,比较AMP组与AMP+Baf A1组间AMP对HCT116细胞增殖的影响明确自噬对细胞增殖的影响.结果表明:AMP(150～300μg/m L)抑制细胞增殖,表明AMP具有抗肿瘤作用;对比空白对照组,AMP(50、75μg/m L)组重组细胞出现LC3荧光点状自噬体,自噬发生率分别为26.72%、19.47%; LC3II蛋白表达上调,P62下调,表明AMP诱导细胞自噬且自噬过程完整;与AMP组比较,加入Baf A1后,LC3II、P62蛋白及自噬点均显著增加,证明自噬晚期过程被阻断,但抑制自噬晚期降解过程对AMP组与AMP+Baf A1组间细胞增殖影响不显著(P0.05),说明在实验浓度范围内,阻断自噬降解过程对细胞增殖无显著影响.结论表明:AMP(0～300μg/m L)能够抑制结肠癌细胞增殖,激活细胞自噬,且自噬晚期降解过程阻断对细胞增殖无显著影响,细胞的增殖抑制可能是通过其他途径实现.     

福建大头蛙抗癌多肽FJ-2945抗肿瘤活性研究

探索本课题组自主发现的天然抗肿瘤多肽FJ-2945对肝癌细胞Hep3b增殖、迁移的影响并初步明确其作用机制.通过CCK8与RTCA实验检测FJ-2945对细胞增殖能力的影响;采用Transwell与划痕实验分析FJ-2945对于Hep3b迁移能力的影响;利用流式细胞分析法检测FJ-2945对Hep3b细胞周期的影响;最后通过qRT-PCR与免疫印迹实验检测FJ-2945对Hep3b细胞增殖、迁移相关因子在转录水平与蛋白水平的影响.与对照组相比,FJ-2945显著抑制Hep3b细胞的增殖与迁移能力,并促进Hep3b细胞凋亡.实验组中的Skp2蛋白含量显著降低,最终抑制Hep3b细胞增殖与迁移能力.由此说明多肽FJ-2945可以作为潜在的药物,通过靶向Skp2抑制肝癌细胞Hep3b增殖、迁移等过程,发挥抗肿瘤作用.     

(R)-Roscovitine诱导Hela细胞凋亡的分子机制

以Hela细胞为模型,探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡诱导的可能途径,进一步了解其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制.结果显示:(R)-roscovitine明显抑制Hela细胞的增殖,在17.5～140.0μmol.L-1浓度作用12,24,48h后,Hela细胞的增殖抑制率分别为8.48%～33.76%,25.19%～86.41%和47.90%～88.08%;典型凋亡的DNA ladder被诱导,且凋亡率随药物浓度的增加而升高;经半胱天冬酶-3(caspase-3)特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO或半胱天冬酶泛抑制剂Z-VAD-FMK处理后,(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡的诱导被抑制约20%,说明半胱天冬酶依赖的途径参与了(R)-roscovitine对Hela细胞凋亡的诱导;(R)-roscovitine诱导凋亡诱导因子(AIF)从线粒体释放细胞核中,且Ac-DEVD-CHO和Z-VAD-FMK没有抑制AIF的释放,这意味着(R)-roscovitine能够诱导Hela细胞凋亡,其机制是通过caspase与非caspase依赖两种途径.     

文蛤抗癌活性多肽的生理活性研究

以新鲜文蛤为材料,经有机溶剂萃取,分子筛凝胶层析,得到一种具有抗癌生物活性的文蛤多肽,SDS PAGE电泳测得该多肽的分子量约为18kD.用该多肽处理人胃腺癌细胞BGC 823,结果表明,当多肽浓度为10μg/mL,细胞生长的抑制率达到50%.此外,探讨了该活性多肽在体外对几种与肿瘤代谢相关的酶的效应,实验结果显示,该活性多肽能够激活碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶,当其浓度为10μg/mL时,可以使这两种酶活力分别提高150%和93%;该活性多肽对酪氨酸酶则是起到了抑制的效应,测定导致酶活力下降50%所需的效应物浓度(IC50)为1.50μg/mL,其抑制类型为混合型抑制,其抑制常数KI和KIS分别为4.37mg/mL和6.09mg/mL.     

由鸡西烟煤制备炭分子筛的研究

以鸡西烟煤为原料综合使用炭化法和碳沉积法进行了空气分离生产富氮空气用炭分子筛的制备研究,考虑了炭化和碳沉积工艺条件对产品空气分离性能的影响。结果表明,鸡西烟煤是制备炭分子筛的优良原料。最佳工艺条件为粘结剂用量35%,升温速度为10℃/min,炭化终温为900℃,恒温时间为60min。     

黔产金钗石斛茎和花中浸出物测定

目的:测定黔产金钗石斛茎和花中浸出物的含量。方法:按照2015版《中国药典》四部(通则2201)浸出物测定法项下,对水溶性和醇溶性浸出物测定法中的冷浸法和热浸法进行实验,优选金钗石斛的最佳浸出物测定法,并对金钗石斛茎和花的浸出物进行测定。结果:金钗石斛的浸出物测定以醇溶性热浸法为佳,溶剂为20%乙醇。不同采收月份的金钗石斛茎中浸出物的含量以2月份平均含量最高,为35.14%,8月份平均含量最低,为16.29%;不同生长年限的金钗石斛茎中浸出物的含量:一年生三年生二年生,其中一年生者浸出物含量为27.33%。不同干燥方式的金钗石斛花中浸出物的含量:阴干60℃烘干30℃烘干晒干。结论:黔产金钗石斛浸出物测定实验结果表明,2月份采收一年生金钗石斛茎质量最佳,金钗石斛花的干燥方法以阴干最好。     

Release of volatiles from a possible cryovolcano from near-infrared imaging of Titan

Titan is the only satellite in our Solar System with a dense atmosphere. The surface pressure is 1.5 bar (ref. 1) and, similar to the Earth, N2 is the main component of the atmosphere. Methane is the second most important component, but it is photodissociated on a timescale of 10(7) years (ref. 3). This short timescale has led to the suggestion that Titan may possess a surface or subsurface reservoir of hydrocarbons to replenish the atmosphere. Here we report near-infrared images of Titan obtained on 26 October 2004 by the Cassini spacecraft. The images show that a widespread methane ocean does not exist; subtle albedo variations instead suggest topographical variations, as would be expected for a more solid (perhaps icy) surface. We also find a circular structure approximately 30 km in diameter that does not resemble any features seen on other icy satellites. We propose that the structure is a dome formed by upwelling icy plumes that release methane into Titan's atmosphere.     

广州地区132对不明原因不孕夫妇抗精子抗体测定

对广州地区132对(264例)不明原因不孕夫妇,进行血清抗精子抗体测定,采用精子凝集试验(Sperm-agglutination test,SAT)和精子制动试验(Spermimmobilization test,SIT)方法。精子凝集试验有两种,即试管玻片凝集试验(Tube-Slide agglutination test,TSAT)及明胶凝集试验(Gelatin agglutination test,GAT)。试验同时与正常孕妇,未婚少女各132例及兔抗人精子血清做阴性和阳性对照。SAT(TSAT和GAT)试验结果有3.30％(4/132)男性患者及7.58％(10/132)女性患者为阳性。SIT试验有3.30％(4/132)男性患者与6.81％(9/132)女性患者为阳性。试验结果提示:对不明原因不孕患者有必要先排除由抗精子抗体这一免疫因素所引起的不孕。     

从盐湖产的粗氯化镁中高效提取氯化锂

为了从盐湖产出的粗氯化镁中高效地提取其中的氯化锂,先检测了原料的成分（Ｈ２Ｏ,４９．６７％;ＭｇＣｌ２,４３．２９％;ＬｉＣｌ,１．３９％;ＣａＣｌ２,０．０７％;ＮａＣｌ＋ＫＣｌ,５．５８％）,有关氯化物在丙酮中的溶解度（ｇ／１００ｍｌ）,ＬｉＣｌ,１．２［２５℃］１．０１４［８℃］;ＮａＣｌ,３×１０－５［２５℃］;ＫＣｌ,９×１０－５［２５℃］;ＣａＣｌ２,０．０１［２５℃］;ＭｇＣｌ２,０．０３［８℃］,和氯化锂在丙酮中溶解达到平衡所需时间（３ｍｉｎ）．由此拟定分离流程为：先用Ｎａ２ＣＯ３和ＮａＯＨ沉淀出Ｃａ,Ｍｇ,母液蒸干,然后用丙酮从足量且干固的碱金属氯化物中提取氯化锂．用模拟料的间歇提取实验获ＬｉＣｌ产品的纯度和收率分别为９９．９８％和９８．３９％;用除去Ｃａ,Ｍｇ的真料的干固物进行一级回流提取实验,获ＬｉＣｌ产品的纯度和收率分别约为９６％和７０％．基于上述结果,本分离程序可望用于ＬｉＣｌ的工业生产     

云南省某医院2008—2010年住院病人疾病分布分析

目的:了解云南省某医院近3年入院病人疾病分布特征,为医院合理设置科室和疾病防治工作提供参考依据。方法:收集该院2008年至2010年出院病例,录入Excel,并采用SPSS l1.0统计学软件进行统计分析。结果:2008年至2010年该医院住院病人数呈现逐年快速上升趋势;从住院病人的疾病谱来看,近3年该医院住院病人疾病占据前五位的是消化系统疾病、呼吸系统疾病、泌尿系统疾病、神经系统疾病和其他疾病,占总住院病例的60.4%;除性别外,婚姻状况、民族、职业之间存在统计学差异(P<0.001)。结论:通过对该医院住院病人疾病的构成分析,为医院更有效地开展疾病的研究和防治工作提供可靠的依据,提示医院要加强特色学科及特色科室的建设。     

丹参酮类化合物对海鞘油脂氧化稳定性影响

分别用乙酸乙酯和超临界CO2提取柄海鞘和玻璃海鞘中的油脂,得到了多不饱和脂肪酸含量很高的海鞘油脂,即柄海鞘含有89.84%(超临界CO2提取)和75.78%(乙酸乙酯提取)的多不饱和脂肪酸,玻璃海鞘含有69.77%(超临界CO2提取)和61.11%(乙酸乙酯提取)的多不饱和脂肪酸.对丹参进行系统的化学成分研究,从中分离并鉴定出7个化合物,即丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮、二氢丹参酮、丹参酮IIB、紫丹参酮甲素和齐墩果酸.以海鞘油脂为底物,用OSI仪测定了几种丹参酮类化合物的抗氧化活性,结果表明二氢丹参酮和丹参酮I是很好的油脂抗氧化剂,添加量为0.01%时,就可使油脂的氧化稳定性提高3~4倍.     

Ramapithecines from China: evidence from tooth dimensions

Data obtained from ramapithecine specimens found in Asia, Africa and Europe have suggested the existence of two major subgroups, Ramapithecus and Sivapithecus, with Ramapithecus having pre-human status. Recently, however, it has been proposed that the fossils all belong to a single group, Sivapithecus, which is more closely related to the apes, in particular the orang-utan. Here we analyse data from a series of similar fossils which have been found in late Miocene coalfields in Lufeng, Yunnan Province, China. These include a number of almost complete jaws and five partial skulls which are more complete than any others so far known. A statistical analysis of the overall dimensions of the large number of teeth included in these finds shows that the differences between the groups previously assigned to Ramapithecus and Sivapithecus are greater than those found between the sexes in the most sexually dimorphic of the living great apes. Within the groups the distribution is bimodal and we suggest each group contains sex subgroups.     

黄瓜DNA的提取研究

报道提取黄瓜DNA的新方法以满足制备黄瓜DNA传感器之需要．提取黄瓜DNA的最优条件：细胞提取液为4．0mL，饱和KCl溶液为1．0mL，0．6倍样液体积的酚／氯仿／异戊醇溶液，0．6倍体积的氯仿／异戊醇溶液，0．55倍体积的异丙醇，黄瓜DNA的得率为0．36mg／g．