粘质沙雷氏菌抗铜基因的克隆及性质研究

 通过构建粘质沙雷氏菌KMR-3菌株的基因组DNA文库,克隆到了与该菌的铜抗性相关的基因,并对其部分特性进行了研究.结果表明克隆到的铜抗性基因所编码的蛋白属于CutF蛋白,由194个氨基酸编码,与莫氏耶尔森氏菌(Yersinia mollaretii)ATCC43969抗铜脂蛋白NlpE同源性最高,达到70%,并对该基因的调控序列(启动子、终止子、SD序列及转录起始位点)进行了分析.     

粘质沙雷氏菌脂肪酶的分离纯化

粘质沙雷氏菌L-42发酵液经离心、丙酮沉淀、离子交换层析以及凝胶过滤等步骤,获得了比活性为1166.61 U/mg 的碱性脂肪酶,提取得率为20%,纯化倍数45.57倍,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上均呈现单一蛋白质条带,显示该酶为单体,SDS-PAGE测得酶的相对分子量约为 50 kDa.酶学特性研究结果表明,该酶的最适反应温度为35 ℃,最适pH值为9.0,在50 ℃以下、pH6.0~10.0范围内保持较好的稳定性. Ca2+、Mg2+ K+、Mn2+、Ni+等对酶有激活作用,而Fe2+、Zn2+、Co2+等对酶活有抑制作用.     

粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析

克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因lip18,实现其在大肠杆菌中的表达,并进行酶学性质研究.克隆脂肪酶基因lip18,并构建p ET-28a(+)-lip18重组表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导优化重组蛋白表达,并研究其酶学性质.克隆得到脂肪酶基因lip18,全长为1 842 bp,编码614个氨基酸.重组菌的诱导温度对蛋白表达影响很大,在最适诱导温度为20℃时脂肪酶大量表达,重组脂肪酶的相对分子质量约为65 ku.酶学性质研究表明:重组酶高效水解C10~C16的中、长链脂肪酸,最适作用温度30℃,最适作用pH值7.0,并且在0℃条件下有一定的催化活性,热稳定性差,是低温中性脂肪酶;同时,对有机溶剂有较好的耐受性.     

嗜甲基细菌Serratia Marcescens NH8的筛选及其pqq基因的克隆

以甲醇为唯一碳源,从土壤中筛选获得一株长势优良的嗜甲基营养菌NH8,对其16S rRNA基因序列分析,初步鉴定为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）,命名为Serratia marcescens NH8.通过下载数据库中pqq基因簇序列进行多重比对,设计PCR扩增引物,从Serratia marcescens NH8中成功克隆出吡咯喹啉醌（Pyrroloquinoline Quinone,PQQ）合成相关的pqq基因簇片段.该基因簇序列全长5 535 bp,由6个开放阅读框pqqA,pqqB,pqqC,pqqD,pqqE和pqqF组成,并且与Serratia marcescens WW4的pqq基因簇序列同源性为99%.同时,对pqq基因簇中各基因的结构与功能进行了分析,核酸序列分析结果表明pqqB,pqqC,pqqD,pqqE和pqqF基因构成细菌操纵子发挥作用.     

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)研究Ⅱ--营养基质和不同色光对粘质沙雷氏菌生长的影响

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)9-1、9-2、16-1 3菌株,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长很好,产生红色菌落. 它们都利用乳糖、D-半乳糖、L-( )阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、蔗糖、D-山梨醇,生长良好并产生红色色素;在硫酸铵、L-赖氨酸、尿素、酪蛋白水解物、DL-天门冬酰胺、胰蛋白胨为氮源的培养基上生长得好并产生红色色素,而在硝酸铵、硝酸钠为氮源的培养基上则生长差和产生粉红色色素;Na^ 、K^ 、PO3^-4、Ca^2 、Mg^2 等元素对这3菌株的生长和产生红色色素有一些影响;白色光有促进生长和红色色素的产生,绿色光和黄色光对生长和红色色素产生则有不良影响.     

粘质沙雷氏菌( Serratia marcescens) 的研究Ⅰ-Serratia marcescens 9 - 2 菌株分离、分类鉴定和形态特征

9-2菌株为革兰氏阴性短杆菌,周生鞭毛,菌落红色,经自动微生物鉴定系统(VITECK-AMS-CC2)鉴定9-2菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),鉴定为99%;9-2菌株对丁氨卡那、强力霉素、复方新诺明、氟哌酸和庆大霉素敏感,对卡那霉素中敏,对呋喃唑酮、头孢唑啉、氯霉素、链霉素、呋喃妥因、红霉素、青霉素G、氨苄青霉素和四环素不敏感;能产生灵杆菌素.     

气味沙雷氏菌(Serratia odorifera)核糖体16ku组分的分离和体内抑瘤及免疫增强作用

将气味沙雷氏菌（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｏｄｏｒｉｆｅｒａ）核糖体与该核糖体抗血清进行免疫印迹反应（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）,发现分子质量为１６ ｋｕ 的蛋白质与抗血清有特异性免疫反应．用制备电泳从核糖体中分离得到１６ ｋｕ 组分,发现其特异性免疫活性依然存在,同时对荷Ｓ１８０ 实体瘤小鼠有明显的保护作用,对荷瘤小鼠的巨噬细胞和Ｔ 淋巴细胞增殖活性有激活作用,并能刺激体内ＮＫ 细胞,使之产生ＮＫ 活性,且作用时间较菌苗更持久．研究结果表明,１６ｋｕ 组分能通过刺激机体的免疫功能抑制肿瘤细胞的生长,是气味沙雷氏菌中抗肿瘤有效成分     

脂肪酶产生菌Serratialiquefaciens的分离及其酶性质的研究

从油污土样中分离到一株高产胞外碱性脂肪酶的细菌，经鉴定为液化沙雷氏菌。发酵上清液经超滤浓缩，ＤＥＡＥ纤维素层析，透析去盐后 冻干得精酶制品。表面活性剂吐温２０对酶反应也有一定激活作用。液化沙雷氏菌脂肪酶的研究，目前国内外均未见报道。     

一株高产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选与鉴定

通过筛选自然生境中的产色素菌株,从淡水鱼体中分离得到一株高产红色色素的Sm-128菌株.经形态观察、生理生化实验和16S rDNA基因序列分析,鉴定Sm-128菌株为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).结合紫外吸收光谱及薄层色谱分析,证实Sm-128菌株所产色素为灵菌红素,粗品产量达475 mg/L.     

颗粒体病毒对小菜蛾幼虫酚氧化酶及保护酶活性的影响

研究了小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PxGV)对小菜蛾幼虫体内的酚氧化酶(PO)和保护酶活力的影响.结果表明,颗粒体病毒感染后,虫体内PO活力与对照组相比相对升高.对照组虫体内PO活力一直随日龄增大而下降;感染组虫体内前3 d PO活力也随日龄增大而下降,第5天降至最低点,第6天后又反弹升高.PxGV感染对虫体3种保护酶的影响程度各不相同.其中,过氧化氢酶(CAT)活力在对照组和感染组虫体中均随日龄增大而升高;同时,感染组虫体CAT活力显著高于对照组.相比之下,PxGV感染对小菜蛾幼虫体内过氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力变化的影响较小.