甘薯HXK基因的克隆、组织表达及生物信息分析

通过RT-PCR技术从甘薯的总RNA中克隆得到了全长的己糖激酶基因,测序结果表明HXK(hexokinase)基因编码区长1491bp,编码496个氨基酸,其翻译的蛋白质分子量为53.4kD,其氨基酸序列与其它已知高等植物HXK基因具有很高的同源性.构建了原核表达载体pET-HXK,经IPTG诱导后可表达获得相对分子量约为71kD的外源融合蛋白,与预测结果一致.并对HXK基因在不同组织中的转录水平进行了数字表达谱和荧光定量分析.     

粘质沙雷氏菌脂肪酶的分离纯化

粘质沙雷氏菌L-42发酵液经离心、丙酮沉淀、离子交换层析以及凝胶过滤等步骤,获得了比活性为1166.61 U/mg 的碱性脂肪酶,提取得率为20%,纯化倍数45.57倍,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上均呈现单一蛋白质条带,显示该酶为单体,SDS-PAGE测得酶的相对分子量约为 50 kDa.酶学特性研究结果表明,该酶的最适反应温度为35 ℃,最适pH值为9.0,在50 ℃以下、pH6.0~10.0范围内保持较好的稳定性. Ca2+、Mg2+ K+、Mn2+、Ni+等对酶有激活作用,而Fe2+、Zn2+、Co2+等对酶活有抑制作用.     

一株高效溶磷小麦内生菌的筛选与鉴定

从小麦根、茎、叶分离出21株溶磷微生物,筛选出溶磷能力最强的菌株JG-22,经形态特征、生理生化分析及16S rDNA序列分析,确定其为土壤芽孢杆菌(Brevibacillus agri strain).研究表明,JG-22对Ca3(PO4)2溶解能力最强;pH值对菌株JG-22溶磷效果影响最明显,在34～36℃和弱碱性环境下,溶磷效果较好;培养72 h后增加培养时间对有效磷的增量影响不大;Ca3(PO4)2含量在5 g/L以上时加大其含量对有效磷的增量几乎无影响.     

一株高效羽毛降解菌株Bacillus aryabhattai S-2的分离鉴定及酶活力特性研究

为解决家禽养殖业中大量羽毛废弃物及其污染问题,从环境中筛选生长速度快、产酶量高、应用潜力好的菌株进行研究.从土壤中分离得到一株高效降解羽毛的S-2菌株,对其菌落形态、生理生化特性及16S rRNA序列进行分析,并进一步分析在不同培养基中的羽毛降解率及最适产酶条件.结果发现该菌株与Bacillus aryabhattai...     

粗毛栓菌atp9基因的克隆、表达及序列分析

ATP合酶是生物体内能量代谢的关键酶,参与多种氧化磷酸化和光合磷酸化反应.atp9基因是ATP合酶的重要组成部分,其编码了ATP合酶A亚基上第9亚单位,与呼吸作用和光合作用密切相关.本研究利用atp9基因在进化过程中高度保守的特点,据已知近缘真菌基因序列,设计并合成了一对引物,以粗毛栓菌mRNA反转录得到的cDNA第一链为模板,PCR扩增得到atp9基因完整序列,并连接于原核表达载体pET32a(+)上.测序与序列分析表明:该克隆片段全长222 bp,共编码73个氨基酸,翻译的蛋白质分子量是7.35 kDa.转化大肠杆菌后经IPTG诱导,可高效表达外源融合蛋白,分子量大小与预测结果一致.经过同源比对和进化树分析,该克隆基因编码的氨基酸序列与可可丛枝病菌(Crinipellis perniciosa)和瓣环栓菌(Trametes cingulata strain ATCC 26747)中相对应的氨基酸序列相似度最高.本实验为未来进一步研究粗毛栓菌atp9基因和其蛋白功能,阐明其调控和作用机制奠定了基础.     

原核DNA甲基化的表观调控作用的研究进展

自从2009年第三代DNA测序技术平台商业化以来，测序、绘制原核DNA甲基化组飞速发展，10余年来已完成甲基化组测序的细菌超过4 000种，极大推动了原核表观遗传学的研究.越来越多的研究表明，DNA甲基化修饰不仅仅局限于宿主的防御功能，而且广泛参与各种细胞过程及基因的表达调控，在染色体的复制起始、细胞周期、致病性、抗生素抗性等方面起到了重要的作用.在简要回顾原核DNA甲基转移酶及其甲基化修饰的相关研究的基础上，着重对近期原核甲基化修饰的调控作用的研究进展进行综述，以期推动原核甲基化修饰表观遗传的研究.     

转基因玉米MON88017测量不确定度的评定

为了解"不确定度传播"(GUM)和"概率分布传播"(MCM)2种方法在转基因成分测量不确定度评定中的差异及验证GUM法评定转基因成分测量不确定度的适用性,首次采用MCM和GUM法同时评定试样中转基因玉米MON88017质量分数的测量不确定度.研究结果表明:MCM与GUM法计算得到的转基因玉米MON88017质量分数的概率密度分布都为正态分布;MCM计算获得的MON88017质量分数的标准不确定度(0.04%)小于GUM法获得的不确定度(0.1%),MCM获得的MON88017质量分数的95%包含区间的范围(1.43%~1.59%)小于GUM法计算得到的95%包含区间范围(1.34%~1.74%).因此,采用MCM评定MON88017质量分数不确定度的结果优于GUM法的相应评定结果.由于GUM法对MON88017质量分数不确定度评定结果的概率分布呈正态分布,因此GUM法适用于转基因生物及产品的测量不确定度评定.     

聚乙烯降解菌白浅灰链霉菌LBX-2烷烃羟化酶基因SaalkB的克隆与表达分析

白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)LBX-2能够高效降解聚乙烯(polyethylene, PE),而烷烃羟化酶alkB基因在聚乙烯降解中可能发挥重要作用.以LBX-2基因组为模板，利用PCR技术扩增SaalkB基因，该基因全长1 086 bp,编码361个氨基酸.对该基因编码蛋白进行生物信息学分析，发现AlkB蛋白包含5个跨膜结构域，无信号肽，属于亲水性蛋白，二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋组成，与链霉菌Stretomyces sp.XY006的AlkB蛋白的同源性达100%.将克隆得到的SaalkB基因连接到表达载体pDE1上进行原核表达，且重组工程菌株能够降解PE. SDS-PAGE结果显示得到与预期蛋白分子量(40.9 kDa)大小一致的蛋白.利用荧光定量PCR发现，白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源的培养基中SaalkB基因的表达量约为在高氏一号培养基中的30倍；蛋白质组学数据分析发现，白浅灰链霉菌LBX-2在以PE为唯一碳源培养48 h和84 h时，AlkB蛋白的表达量比在高氏一号培养基中分别上调了2.35和1.57倍，表明Saalk...     

回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中引入的不确定度评估

为了把测试分析误差控制在允许范围内,保证测试结果有一定的精密度和准确度,使分析数据在给定的置信水平内达到要求的质量,根据JJFl059.1999《测量不确定度评定与表示》技术规范,采用抗虫转Bt基因水稻定量PCR方法,测试"科丰6号"样品Bt基因的含量,初步评估了内标基因GOX和外源基因Bt的校准曲线输出值的不确定度.检测结果平均值为5.3%,接近约定真值;回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中引入的不确定度评估结果为0.027.Ct值的随机变化和标准曲线的非线性是回归方程引入的不确定度的主要因素,因此,在转基因生物安全定量结果不确定度评定中,应重点讨论Ct值变化与标准曲线非线性的偏离.     

原核CRISPR-Cas系统的结构功能及应用

CRISPR-Cas系统是新近在原核生物中发现的一种抵御外来DNA入侵的免疫机制,由一个成簇规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)和附属的蛋白质(Cas)组成,广泛分布于真细菌和古菌中.CRISPR由重复序列及其间隔序列组成,间隔序列来自于过去的入侵DNA,并插入到细菌的CRISPR排列中.一旦出现新的入侵,CRISPR转录,其RNA经过加工后与Cas蛋白质组成一个核蛋白复合体,该复合体通过RNA与入侵DNA序列之间的互补配对,结合目标序列,最后Cas蛋白质将入侵DNA降解.此外,基于CRISPR系统中的Cas9蛋白,发展了一种新的基因组编辑技术,在不同的细胞中均能获得高效的基因定点打靶,展现出巨大的潜力.