微型腺病毒载体的扩增和纯化研究

微型腺病毒（mAd)是去除所有编码基因，仅保留两侧反向末端重复序列（ITR）及包装信号（ψ）的新型腺病毒载体。它具有包装容量大，免疫原性小等优点。在大量扩增时，需与缺失E1区及包装信号的辅助腺病毒共转染入包装细胞（293细胞）内，CsCl超离心纯化，将二者分开。再通过琼脂糖覆盖挑斑、在包装细胞内大量扩增、CsCl超离心纯化等步骤，最终得到较为纯净的mAd。但因mAd结构不稳定，易与辅助病毒发生同源重组，在CsCl超离心时不能完全与辅助病毒分开，导致外源基因表达逐步下降。     

一种新的Bax异构体Baxθ促进细胞凋亡(英文)

Bcl-2蛋白家族由一类含有特征性的Bcl-2同源结构BH、且主要调控细胞死亡的蛋白组成.Bax是一个含有多个特征性BH结构域、促进凋亡的蛋白.克隆了一个全新的Bax异构体Baxθ,其cDNA由外显子1,4,5,6组成.MTC表达谱分析显示Baxθ在人体各组织中广泛且不同强度的表达.将BaxθORF插入pEGFP-N1载体,转染HEK293细胞,观察到一个15 ku的融合蛋白,提示Baxθ编码的蛋白是与Baxβ共用同一个C端,且使用一个全新的翻译起始位点.尽管Baxθ缺乏BH3结构域,但它在HEK293细胞中过表达时能促进细胞凋亡.截断体实验分析发现Baxθ第43~69位氨基酸残基可能与其促进细胞凋亡的活性有关.BH3结构域可能不是Bcl-2蛋白家族诱导细胞凋亡的唯一功能区域.     

烷基苯磺酸钠和烷基磺酸钠诱变能力的测定及其在中国仓鼠细胞中抑制由丝裂霉素C诱发SCE频率的观察

烷基苯磺酸钠(alkyl benzene sulfonate,ABS)和烷基磺酸钠(alkyl sulfonate,AS)是合成洗衣粉和洗涤剂的主要活性成分,其含量约占总量的30%以上.由于它广泛地应用于人们的日常生活中,特别是近年来更多地应用于清洗食具、蔬菜水果等食品,增加了直接进入人体的可能性,因此它的安全性日益引起人们的重视.郑富源曾用Ames法和微核测试法测定了烷基苯磺酸钠的致变效应,结果为阴性.这类阴离子型表面活性剂     

用沙门氏菌/微粒体系统对36种化学物质潜在致癌性的检测试验(初报)

近年来,Ames 等人用鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的组氨酸营养缺陷型突变株建立了化学致癌物的检测系统。由于化学物质对细菌的诱变作用,同其对哺     

A类维生素对环磷酰胺诱发的抗白喉毒素突变型(DT~r)和SCE频率的影响

用新建立的抗白喉毒素突变型检测系统研究维生素A及其四种衍生物在化学诱变作用中的遗传学效应,并与姊妹染色单体互换频率指标进行比较,结果表明A类维生素具有抑制由间接诱变剂诱发的抗白喉毒素突变型频率和姊妹染色单体互换频率的作用.因此,A类维生素的抗肿瘤特性可能并不仅局限于其作用在肿瘤形成的第二步,也可作用在肿瘤形成的第一步(启动阶段).     

猕猴A型和B型精原细胞对X射线的敏感性

本实验用100仑X射线对猕猴(M.mulatta)进行全身照射,在照射后不同时期(6 小时到20天)取出睾丸,观察A型和B型精原细胞以及畸变细胞的数量变化。结果表明:(1)猕猴的B型精原细胞的辐射敏感性大于A型精原细胞,但这差别不是十分显著。(2)猕猴精原细胞在100仑X射线照射后数量减少情况来看,可以认为是辐射直接杀死细胞和抑制细胞分裂的综合效应的后果。     

A类维生素在化学致变作用中的遗传学效应

A类维生素本身与S9微粒体酶共同作用中国仓鼠V79细胞对SCE频率无任何明显作用,但当A类维生素与间接致变剂环磷酰胺(CPP)同时处理细胞时,则能显著降低由CPP     

哺乳动物细胞姐妹染色单体互换检测化学物质的潜在致癌性(初报)

检测化学物质潜在致癌性有多种比较灵敏的方法,其中有Ames法和哺乳动物细胞姐妹染色单体互换(SCE)法。我们用鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体检测系统鉴定为阳性的亚硝基胍(NTG)和阴性的焦亚硫酸钠,诱发中国仓鼠细胞姐妹染色单体互换,并以此为指标,鉴定其潜在致癌性。离体培养的中国仓鼠成纤维细胞株,同待检物质和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)混合培养24小时,BrdU最终浓度为每毫升培液15微克。细胞用0.075M KCl低渗处理,甲醇:冰醋酸(3:1)固定,制片。然后,基本按Korenberg等的方法处理,吉     

尾静脉大容量快速注射法介导的人凝血因子Ⅸ基因在小鼠肝内的高效表达

尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达, 采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达质粒pCMV-hFⅨ 2.2 mL于7 s内导入小鼠体内, hFⅨ在小鼠体内表达水平最高为2921 ng/mL(血浆). hFⅨ表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈正相关, 重复注射的hFⅨ表达水平偏低(最高1459 ng/mL). PCR检测发现小鼠多种器官中存在hFⅨ cDNA, RT-PCR和免疫组化切片检测表明, hFⅨ mRNA和蛋白主要在肝脏中表达. 转氨酶水平与病理切片检测表明, 注射1 d后5%的肝脏细胞受到损伤, 但在3 ~ 10 d内恢复. 研究结果表明, 尾静脉大容量快速注射法能够介导hFⅨ在小鼠体内高水平表达, 为基因治疗研究提供了一项简便而实用的动物实验手段.     

乳汁中分泌有活性的人凝血因子Ⅸ的转基因羊的研制

在人类内源性凝血系统中,活化的因子Ⅸ和因子Ⅷ、磷脂、钙离子相互作用,形成一种复合物,使凝血因子Ⅹ转变成活化的因子Ⅹ,促进凝血酶生成,从而在凝血过程中起重要作用.人凝血因子Ⅸ(ｈｕｍａｎｆａｃｔｏｒⅨ,ｈＦⅨ)缺乏导致一种Ｘ＿伴性遗传的出血性疾病血友病Ｂ,发病率为1/100000[1].血友病Ｂ的治疗目前主要靠替代疗法,即注射正常人血浆制剂以补充患者所缺乏的ＦⅨ.然而,这种疗法存在着血液来源困难以及从供血者传染肝炎病毒、爱滋病病毒等致病因子的危险,故生产“无毒”的ｈＦⅨ制剂长期以来是人们的迫切愿望.虽然通过重组ＤＮＡ技术已…