基因突变检测PCR-SSCP实验条件优化研究

探索基因突变检测PCR-SSCP技术的最佳实验条件。以人血液DNA为实验材料,人类基因组天然存在的基因突变位点为研究对象,依次对不同的变性剂、交联度、电泳缓冲液、电泳时间、电压以及有无甘油等因素进行PCR-SSCP最优条件分析。利用碱性变性剂对DNA变性,电泳条件为不加甘油的14%凝胶(交联度为29∶1),0.5×TBE电泳缓冲液、300 V电泳4 h后180 V电泳14 h,得到较理想的PCR-SSCP电泳图谱,此为摸索出的最佳条件。该条件在筛选基因突变过程中是一种简便、快速、灵敏、经济和有效的实验方法。     

缺碘地区儿童精神运动功能成绩与智商的相关性

目的　检验精神运动功能测验项目的有效性。方法　对柞水县 248例 6~13岁抽样儿童进行精神运动功能检查与韦氏智力测验,并对两类测验的结果进行相关分析。结果　①精神运动功能测验的各项目分以及总分与韦氏智力测验的知觉因子智商、记忆 /注意因子智商、总智商均显著相关(P<0. 01);②精神运动功能各分测验分与测量意义相同的智力分测验量表分显著相关 (P<0. 01)。结论　精神运动功能测验在测量精神运动功能方面基本上达到了其所要测量的目的。     

秦巴山区智力低下儿童FMR1基因突变研究

目的 检测秦巴山区脆性X综合征儿童.方法 利用分子生物学技术,对秦巴山区0～14岁智力低下儿童FMR1基因CpG岛甲基化与CGG重复多态性进行检测.结果 在56名智力低下男童中,检测出了3例FMR1基因甲基化但CGG重复数在正常范围的患者.对此3例患者及其家系人群体征检查观察到部分成员有脆性X综合征体征;此外,检测的智力低下和对照儿童FMR1基因CGG重复数均在正常范围(分别为16～40,18～37),两组无统计学差异(X2=29.55,P=0.102).结论 检测出的3例智力低下患者有可能是FMR1基因发生了甲基化而CGG重复数正常的脆性X综合征患者,相对于CGG异常扩增而言,FMR1基因甲基化可能是形成该病症的重要原因.     

BRWD3基因与秦巴山区精神发育迟滞的相关性

目的探究BRWD3基因与秦巴山区精神发育迟滞(Mental Retardation,MR)的相关性。方法采用PCR-SSCP法结合测序结果,对病例-对照样本BRWD3基因的8个SNP标记位点的多态性进行检测。结果 (1)单位点分析结果表明,rs3106407、rs12689192、rs7049509多态性与秦巴山区MR有显著相关性(P<0.01);(2)单倍型分析结果显示8个SNP位点3个与3个间分别组成了4个独立的单倍型块,并表现出了与MR的相关性(Global P值均<0.01)。结论 BRWD3基因可能与秦巴山区MR有关,致病机理有待进一步通过分析外显子突变、蛋白表达以及参与的转录调控机制等方面展开深入研究。     

宁强试验点0～3岁儿童母亲育教能力调查

为了探索适于贫困山区的母亲教育措施，对宁强试验点0－3岁儿童母亲的育教能力状况进行了调查。结果表明，试验点婴幼儿母亲的育能力普遍较低，并且化程度不同听母亲的育教能力之间存在显差异。通过对这种状况产生原因的分析，我们提出了符合当地情况的母亲教育内容与教育方式。     

PAK3基因rs17327273位点多态性与秦巴山区精神发育迟滞的相关性研究

目的探究PAK3(p21-activated kinase 3)基因与精神发育迟滞(mental retardation,MR)之间可能的相关性。方法采用病例-对照研究,利用PCR-SSCP方法对PAK3基因rs17327273位点多态性与秦巴山区儿童精神发育迟滞之间进行了相关性分析。结果对rs17327273多态位点GG,GC和CC3种基因型频率进行Hardy-Weinberg平衡检验,3种基因型在总体人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=6.793,df=3,P0.05),并由总体人群计算得等位基因频率:G,0.773;C,0.217。基因型频率为:XGY,0.392;XCY,0.108;XGXG,0.306;XGXC,0.170;XCXC,0.024。分析显示,等位基因及基因型在病例组、边缘组与对照组之间的分布上均无显著性差异,等位基因在各组内性别之间亦无显著性差异(P0.05)。结论PAK3基因rs17327273位点多态性与秦巴山区精神发育迟滞之间无显著相关性。     

宁强试验区精神发育迟滞的遗传方式初探

目的为探明秦巴山区宁强试验区精神发育迟滞的致病原因,初步探讨该地区克汀病与亚克汀病和非特异性精神发育迟滞两种类型家系的遗传方式。方法通过分离分析及多基因阈值理论计算克汀病与亚克汀病和非特异性精神发育迟滞各种婚配类型的校正分离比及遗传率。结果克汀病与亚克汀病的U×U,U×A婚配类型的校正分离比分别为21.37%和45.63%,遗传率为79.00±7.51%,而非特异性精神发育迟滞的各种婚配类型的校正分离比偏低,为18.21%和31.55%,遗传率为76.27±7.21%。结论前者在碘缺乏环境中呈现出具有主效基因的多基因遗传方式,而后者表现为多基因遗传方式。提示两者的发病都有明显的遗传基础,也说明了试验区的精神发育迟滞具有不同的病因并存在遗传异质性。     

不同补碘时期亚克汀病可疑儿童听力障碍的变化

目的探讨碘缺乏对轻度听力障碍的致病机理以及轻度听力障碍对亚克汀病诊断的有效性。方法对宁强试验区亚克汀病可疑儿童和正常对照组儿童,分别于1996,1999年做听力检查。结果①在试验区处于补碘不足时期(1996),亚克汀病可疑儿童的纯音听阈异常率显著高于正常对照儿童(P<0.01),且其听力损失多发生在低频区(500 Hz);②在试验区处于补碘正常时期(1999),两组儿童的听力异常率已无显著性差异(P>0.05);③同一组儿童1996和1999年前后两次的听力复查结果相比较,1999年其听力出现明显好转且以低频区提高的幅度最大。结论随着补碘正常,有听力障碍的儿童听力明显好转,部分已恢复正常,提示轻度听力损伤是由于当前缺碘导致激素性甲状腺功能低下引起的耳蜗膜迷路积水的结果。在补碘正常后,轻度听力障碍已不再和因过去缺碘造成的脑与神经损伤所致的精神发育迟滞相关联,因而已不宜用轻度听力障碍来辅助诊断亚克汀病患儿。     

EBV转化Vad患者外周血B淋巴细胞建立永生细胞株的研究

拟通过建立血管性痴呆(vascular dementia,Vad)患者永生化淋巴细胞的实验,探索在不同实验室条件下有效建立患者永生细胞库的方法。采用EB病毒体外转化外周血B淋巴细胞技术建立永生细胞株;采用RT-PCR技术和染色体G显带技术对其进行质量鉴定。研究中共采集了15例患者血液样本,最终建成3个永生细胞株,其余12株在平均培养至18天时发生退化。分析结果证明B淋巴细胞在被EB病毒转化后核型不会发生改变。转化过程中在有些情况下会存在一个危机期,成功渡过此期的细胞可无限增殖,具体出现危机期的机制及如何有效渡过危机期的实验条件还有待进一步研究。     

亚克汀病诊断中精神发育迟滞的诊断标准研究

目的　探求亚克汀病诊断中精神发育迟滞的诊断标准。方法　按不同智力测验量表测出的不同智商范围标准,对秦巴山区3个MR高发典型区中按WHO标准所实际诊断出的中、轻度MR及边缘儿童的检出率进行比较。结果　①用韦氏测验且以亚克汀病诊断中制定的智商范围标准(IQ为50～69),虽然对实际诊断出的4～14岁轻度MR儿童的检出率显著高于(P<0.01)按WHO标准(IQ为55～69)的检出率,但易将中度MR混入轻度MR儿童之中,而用瑞文测验时,两种智商范围标准对轻度MR儿童的检出率均明显偏低;②对4岁以下婴幼儿,用DDST量表筛出的异常率显著高于(P<0.01)用Gesell量表所测出的智能发育迟长率,而后者又高于实际诊断的MR患病率。结论　在缺碘地区对亚克汀病患儿的精神发育迟滞进行诊断时,对4岁以上儿童宜采用韦氏测验且用WHO制定的智商与社会适应能力标准,对4岁以下婴幼儿宜用Gesell测验且结合儿科医生的行为观察和行为评定结果。