甘蓝型油菜和Lesquerella fendleri fad2基因片段克隆及hpRNA植物表达载体的构建

首先利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和Lesquerella fendleri基因组DNA中分别扩增出Δ12-脂肪酸去饱和酶fad2基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出相应的小片段,然后将同一基因的大小片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的napin启动子和nos终止子之间,构建成可以在种子中转录表达发夹RNA(Hairpin RNA,hpRNA)结构的植物表达载体.     

正交设计在欧洲菘蓝组织培养中的应用

以欧洲菘蓝下胚轴和子叶为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行了优化筛选.分析结果表明,6-BA和2,4-D的交互作用对下胚轴愈伤组织的诱导有显著影响,结合直观分析确定下胚轴的愈伤组织最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 mg.L-1(后同) 2,4-D 0.5;6-BA和NAA的交互作用对子叶愈伤组织诱导有极显著影响,结合直观分析确定子叶最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 NAA 0.2.在不同培养基对欧洲菘蓝愈伤组织分化能力的影响试验中,各种因子在所试浓度范围内的作用均不显著,有待进一步试验.根据直观分析我们认为MS 6-BA 2 NAA 1诱导的愈伤组织更有利于分化.不定芽在转移到MS NAA 0.5一个月后80%以上都能长出很好的根系.生根后的组培苗经过3天炼苗后移栽至花盆后80%以上可以存活.     

甘蓝型油菜乙醇酸氧化酶(GO)基因片段的克隆及hpRNA表达载体构建

通过PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus)华双4号基因组DNA中扩增出乙醇酸氧化酶(GO)基因片段,DNA序列分析表明扩增GO基因片段的外显子部分与报道序列相同.以扩增出的GO基因片段作模板从一端设计引物扩增出一个相应的小片段.将GO基因大小两个片段反向连接,插入到植物表达载体2300-nap的napin启动子和nos终止子之间,植物表达载体2300-35S的35S启动子和nos终止子之间,分别构建成可转录表达出发夹RNA(hairpin RNA,hpRNA)结构的种子特异型和组成型油菜hpRNA干扰载体.