甘蓝型油菜和Lesquerella fendleri fad2基因片段克隆及hpRNA植物表达载体的构建

首先利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和Lesquerella fendleri基因组DNA中分别扩增出Δ12-脂肪酸去饱和酶fad2基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出相应的小片段,然后将同一基因的大小片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的napin启动子和nos终止子之间,构建成可以在种子中转录表达发夹RNA(Hairpin RNA,hpRNA)结构的植物表达载体.     

正交设计在欧洲菘蓝组织培养中的应用

以欧洲菘蓝下胚轴和子叶为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行了优化筛选.分析结果表明,6-BA和2,4-D的交互作用对下胚轴愈伤组织的诱导有显著影响,结合直观分析确定下胚轴的愈伤组织最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 mg.L-1(后同) 2,4-D 0.5;6-BA和NAA的交互作用对子叶愈伤组织诱导有极显著影响,结合直观分析确定子叶最佳诱导培养基为MS 6-BA 0.5 NAA 0.2.在不同培养基对欧洲菘蓝愈伤组织分化能力的影响试验中,各种因子在所试浓度范围内的作用均不显著,有待进一步试验.根据直观分析我们认为MS 6-BA 2 NAA 1诱导的愈伤组织更有利于分化.不定芽在转移到MS NAA 0.5一个月后80%以上都能长出很好的根系.生根后的组培苗经过3天炼苗后移栽至花盆后80%以上可以存活.     

甘蓝型油菜乙醇酸氧化酶(GO)基因片段的克隆及hpRNA表达载体构建

通过PCR从甘蓝型油菜(Brassica napus)华双4号基因组DNA中扩增出乙醇酸氧化酶(GO)基因片段,DNA序列分析表明扩增GO基因片段的外显子部分与报道序列相同.以扩增出的GO基因片段作模板从一端设计引物扩增出一个相应的小片段.将GO基因大小两个片段反向连接,插入到植物表达载体2300-nap的napin启动子和nos终止子之间,植物表达载体2300-35S的35S启动子和nos终止子之间,分别构建成可转录表达出发夹RNA(hairpin RNA,hpRNA)结构的种子特异型和组成型油菜hpRNA干扰载体.     

甘蓝型油菜胚柄多胚突变体(Brassica napus twn-119)的细胞胚胎学研究

多胚突变体B.napus twn-119是从甘蓝型油菜品种中油119中发现的.经过连续套袋自交选育,目前已使多胚频率提高到34%.所获得的多胚种子萌发后,92%的种子中萌发出各自独立的双苗,6%种子中萌发出独立三苗,2%的种子中得到3个以上独立苗.偶尔可观察到生长的幼苗具有三片、四片子叶、幼苗的茎发生部分结合及子叶上具轴状附属物等异常现象.对多胚突变体的胚胎学研究表明,由顶细胞发育而来的初生胚体正常发育成胚,部分胚柄细胞转变成为具有强烈分裂能力的细胞而不是进入程序性死亡.这些特殊的胚柄细胞具有胚胎发生能力,胚柄中可以观察到多个球形原胚形成,多个原胚由宿存的胚柄细胞连接成一串.如果两原胚之间连接的胚柄细胞很少或没有,两个胚体在发育过程中会发生部分融合.幼苗根尖染色体数目的检查也证明多胚幼苗都具有正常油菜的染色体数目(2n=38).