核型多角体病毒生活周期及宿主抗病毒反应的研究进展

核型多角体病毒(Nucleopolyhedrovirus,NPV)作为一类重要的昆虫病毒,广泛用作绿色生物农药、蛋白质表达系统和哺乳动物基因递送载体,都有相应的商业化产品,如:作为生物农药,在国内商业化的NPV有4种,共35个产品;表达载体有Ac-Bacmid和Bm-Bacmid。对于NPV的防治及利用,离不开对NPV生活周期(细胞入侵、核衣壳入核、基因组复制和表达、病毒组装、出芽)和宿主抗病毒反应的研究。就NPV的生活周期和宿主抗病毒反应进行讨论,并总结相关领域的最新研究进展。     

甜菜夜蛾幼虫增殖GrNPV的研究

以甜菜夜蛾幼虫作为替代宿主增殖草原毛虫核型多角体病毒(GrNPV)的研究结果表明,GrNPV在甜菜夜蛾体内连续传代2次后得到了GrNPV-Se2,GrNPV-Se2切片电镜图具有典型的杆状病毒特征.分别提取GrNPV-Se2与GrNPV基因组,电泳结果表明GrNPV-Se2与GrNPV基因组大小相同.设计GrNPV多角体基因引物,对GrNPV-Se2与GrNPV基因组进行PCR验证,结果GrNPV与GrNPV-Se2基因组的多角体基因PCR产物带型相同,表明用甜菜夜蛾幼虫成功增殖了草原毛虫核型多角体病毒GrNPV.     

松毛虫质型多角体病毒悬浮剂防治马尾松毛虫田间药效实验

本实验主要研究20亿PIB/mL松毛虫质型多角体病毒悬浮剂防治马尾松毛虫田间药效.实验结果表明:松毛虫质型多角体病毒的致死速度与其剂量有关,在500倍液剂量处理区,在1周内的死亡率达到67.6％,各试剂量区均有明显的持效性.第15天的防效效果为83.5％ ～90.4％;第30天的防效为85.6％ ～95％;松毛虫质型多角体病毒1000倍液剂量与500倍液剂量区与Bt区防治效果差异显著.     

一株扁刺蛾病毒TsNPV的分离鉴定

本实验分离、鉴定和扩增了扁刺蛾核型多角体病毒TsNPV。初步的生测实验表明:1×10~7PIB/m L、1×10~6PIB/m L、1×10~5PIB/m L、1×10~4PIB/m L、1×10~3PIB/m L感染扁刺蛾幼虫后2 d内扁刺蛾幼虫出现了死亡;扁刺蛾幼虫死亡率随着感染剂量增加而相应提高,1×10~7PIB/m L、1×10~6PIB/m L、1×10~5PIB/m L 3个浓度感染扁刺蛾幼虫后8-9 d内,扁刺蛾幼虫死亡率都达到了100%; 1×10~7PIB/m L、1×10~6PIB/m L、1×10~5PIB/m L 3个浓度的的半至死时间都为4 d左右、1×10~4PIB/m L、1×10~3PIB/m L、1×10~2PIB/m L、1×10~1PIB/m L的4个浓度的半至死时间分别为6 d、7 d、8 d和8 d,表明此毒株具有很好的杀虫效果。     

Penicillium oxalicum T1降解天然水稻秸秆历程的研究

Penicillium oxalicum T1能在9 d内将天然水稻秸秆降解成汤液.从第2天开始pH值急剧下降,第4―6天pH值维持在4左右,到第7天pH值下降到3左右,降解率达64.7％.扫描电镜观察到随着降解时间的延长,稻草秸秆的蜡质和半纤维素层降解脱落,露出纤维素和硅结构,秸秆的表面裂解的情况越来越严重.采用气相色谱-四级杆质谱联用仪检测到汤液中有2-苯乙醇,采用气相色谱检测2-苯乙醇含量为1.0 g/L.     

可视化LAMP技术快速检测新冠病毒的方法

根据时代需要,利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplifcation,LAMP)对新冠病毒进行快速检测,以研发出新冠病毒检测试剂盒.通过NCBI公布的新冠基因组序列分析,获得新冠病毒特异性N蛋白基因的序列;根据该序列信息,在线设计的几对环介导等温扩增引物以供筛选,并利用新冠病毒全基因的反转录质粒,同时通过大量的实验尝试,得到较为稳定的环介导等温扩增体系,再加入具有逆转录活性的Bst 3.0 DNA聚合酶,使体系可扩增RNA模板,最后通过加入适量染料,完成反应结果的可视化.通过不断的实验优化,得到了较为稳定的扩增体系如下:2×Lamp Master Mix 12.5μL,Bst 3.0 DNA聚合酶0.5μL,内引物FIP、BIP(10μM)各2μL、外引物F3、B3(10μM)各0.5μL、模板1μL、ddH2 O 7μL,该体系在65℃下水浴加热1 h即可,同时在体系中加入MnCl2溶液(15 mM)1μL、钙黄绿素(500μM)3μL,使反应结果肉眼可断,加入模板的体系变为绿色,而未加模板的体系为棕黄色.结论:本实验研究的可视化LAMP检测新冠病毒的方法可用于对广大人民群众进行新冠病毒核酸检测.     

一株产(-)γ-内酰胺酶的Pantoea Ananatis Y22筛选及全细胞转化(+/-)γ-内酰胺

利用(+/-)γ-内酰胺做为唯一碳源从土壤中分离出一株能产生(+)γ-内酰胺酶水解拆分(+/-)γ-内酰胺的菌株.鉴定菌株为Pantoea ananatis Y22.进一步优化了P.ananatis Y22发酵产γ-内酰胺酶的发酵条件和生物转化条件.发现棉子糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源;Y22在pH值4～10范围内生长良好,最佳发酵pH值为7,最佳生物转化pH值为8.确定最佳发酵温度为30℃,最佳生物转化温度为30℃.     

苹果蠹蛾颗粒体病毒应用研究进展

苹果蠹蛾(Cydia pomonella(L.))属鳞翅目(Lepidoptera),卷叶蛾科(Tortricid),小卷蛾亚科(Olethreutinae),是一种重要的世界性蛀果害虫,严重威胁了我国新疆、甘肃和宁夏等地的苹果主产区的生产安全。苹果蠹蛾颗粒体病毒(Cydia pomonella granulovirus,Cp GV)杀虫剂能够高效、专一的防治苹果蠹蛾种群的数量,在生物防治中起到了主要的控害作用,具有十分重要的经济和生态价值。从侵染过程、分子生物学研究(基因组特征)及防治、开发和应用前景等方面综述了苹果蠹蛾颗粒体病毒的研究进展。     

樟巢螟致病菌的分离鉴定及其杀虫活性测定

从樟巢螟自然死亡的虫尸体内分离得到1株具有较高毒力的致病菌LS-1,对其生防潜能进行评估。经过形态学特征、16S r DNA序列分析,确定该菌株LS-1为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens);以浓度为3.38×10~8cfu/m L的该菌对樟巢螟幼虫进行室内生物测定:感染第3天和第5天,樟巢螟的死亡率分别为50%和71.67%,校正死亡率分别为47.36%和69.1%;以浓度为3.38×10~8cfu/m L、3.38×10~7cfu/m L、3.38×10~6cfu/m L、3.38×10~5cfu/m L 4个浓度梯度对二化螟幼虫进行室内生物测定,感染第4天,水稻二化螟幼虫的死亡率分别为90.67%、86.67%、84%、82.67%,校正死亡率分别为87.51%、82.17%、78.57%、76.79%。结果说明该菌株对控制螟蛾类害虫具有较好的效果,研究为下一步开发螟蛾类绿色生物杀虫剂提供了研究基础。