桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。     

青霉PT95菌株渗出液的产生及理化性质的研究

实验观察发现,青霉PT95菌株渗出液的产生是由于菌丝互相挤压,紧密地缠绕在一起形成菌核,导致菌丝细胞液渗出,在菌落表面形成大量的渗出液.渗出液的物理和化学性质研究结果表明：渗出液的颜色随着培养时间的延长而逐渐变黄;渗出液的体积在第10天达到最大,然后迅速减少,第14天完全消失;干重随着培养时间的延长而减少.渗出液的pH值在5-6之间变化.渗出液中含有无机盐离子、氨、蛋白质、葡萄糖以及一些酶类.随着培养时间的延长,渗出液中的总蛋白、氨和无机盐离子（K^＋、Na^＋、Cl^-、P3^＋和Mg^2＋）的浓度都呈现明显下降趋势.只有Fe^2＋浓度和酸性磷酸酶活性表现为逐渐增高的趋势,葡萄糖在渗出液中含量很低,丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶活力变化不大.     

PS0312产色素青霉菌株形态及其重要生物学的研究

PS0312是一从土样分离获得产色素菌株，菌株代谢产生的色素物质在pH=1—3的溶液中呈黄色、4～6为橘红色、7—9显红褐色，〉10为紫红色。菌株的气生菌丝形成分生孢子梗，分生孢子梗上部多分1次，少不分技，罕分枝2次，顶端产生小梗，帚状枝单束顶端急剧变细；分生孢子梨形，梗上分生3—6个产孢细胞，顶端着分生孢子，PS0312为一青霉菌株（Penicilliumsp．）。PS0312菌株的生长温度为10℃-35℃，最适生长温度为320C；生长pH=1—10，适宜生长的pH=2—10，最适pH=3；葡萄糖为菌株利用的最佳碳源；无机氮源中以（NH4）2SO4对菌株的生长最为有利，牛肉膏、蛋白胨及酵母膏对菌株生长速率有影响，但尿素有机氮对菌株的生长不利。     

古尼虫草Cordyceps gunnii无性型菌丝体中天然VE提取工艺研究

首次报道了从古尼虫草Cordyceps gunnii(Berk.)Berk.无性型,古尼拟青霉P.gunnii菌菌丝体中提取VE的条件。研究结果表明,VE提取的最佳方案是,用无水乙醇作为提取剂,提取时间90分;石油醚为萃取剂,萃取时间为60分.在提取过程中加入VC和通入氮气进行保护十分重要.     

一种高效的柑橘绿霉菌基因敲除体系的构建

研究目的：提高柑橘绿霉菌基因敲除效率。创新要点：低效的基因敲除与丝状真菌非同源末端链接（NHEJ）的DNA双链断裂修复途径有关。为提高柑橘绿霉病菌基因敲除效率,本研究利用农杆菌介导的转化体系,获得NHEJ途径中关键因子Ku80的缺失突变体（△pdku80）。研究方法：与野生型菌株相比,以△PdKu80作为出发菌株,提高柑橘绿霉病菌PdbrlA和PdmpkA的基因敲除效率（见表1）。重要结论：△PdKu80的营养生长、产孢和致病性与野生型菌株基本一致。△PdKu80作为出发菌株,能显著提高柑橘绿霉菌的敲除效率。     

壳寡糖对扩展青霉菌体生长和毒素分泌量的影响

为了更加全面评价壳寡糖作为抑菌剂对病原菌生长和毒素合成之间的内在相关性,采用液体培养的方式,通过静止培养和摇床培养实验,探究了壳寡糖在不同温度培养条件下对扩展青霉菌体生长和展青霉素分泌的影响。结果表明,静止培养中5,0g/L壳寡糖可明显促进菌体生长,但抑制了毒素的分泌;静止培养和摇床培养实验中,相同浓度的壳寡糖在4,6,25℃培养条件下对菌体生长的影响不同,但是均抑制了毒素分泌;不同温度培养条件下,扩展青霉单位菌体产毒量的大小按培养温度排序为16,4,25℃。因此将壳寡糖用于果蔬采后病害控制时,需要注意贮藏的温度,同时需要考虑其对毒素分泌的影响,以期达到抑菌效果和食用安全性。该研究可为壳寡糖在果蔬采后病害控制中的应用提供参考。     

过表达veA对橘青霉美伐他汀生物合成的影响

在丝状真菌中,全局性调控因子VeA广泛存在并高度保守,调节多个次级代谢基因簇和生长发育.在橘青霉中克隆veA的基础上,通过农杆菌介导的转化获得了OE∷veA菌株.结果显示:veA过表达后,分生孢子产量下降61%,美伐他汀产量提高3倍.光照能促进橘青霉中veA的表达从而抑制橘青霉生长发育.这些结果提示在橘青霉中veA和孢子形成、美伐他汀合成密切相关.     

不同药剂处理对地黄胞囊线虫病的防效研究

在室内盆栽实验和田间实验条件下研究了10％噻唑磷颗粒剂、5亿孢子/g淡紫拟青霉粉剂、5％特丁磷颗粒剂、1．8％阿维菌素乳油、3％氯唑磷颗粒剂5种杀线虫剂及其不同施用剂量对地黄胞囊线虫病的防治效果．结果表明,室内盆栽条件下5种药剂的不同施药剂量对地黄胞囊线虫病防治效果存在显著差异;田间实验条件下,10％噻唑磷颗粒剂40kg／hm2,5亿孢子／g淡紫拟青霉粉剂50kg／hm2和3％氯唑磷颗粒剂50kg／hm。施用30d后,土壤中胞囊线虫虫口减退率达65％以上;施用药剂150d后,5亿孢子版淡紫拟青霉粉剂50kg／hm^2时防效最好,达67．95％;其次为施用10％噻唑磷颗粒剂40kg／hm^2,防效达61．00％,满足地黄的GAP栽培要求,显示出较好的应用前景．     

荨麻青霉(Penicillium urticae)原生质体的制备与再生

对荨麻青霉原生质体的高效制备以及再生方法进行了探索.结果显示荨麻青霉较为适合的原生质体制备及再生条件的组合:菌龄为28 ℃恒温下培养20～22 h,DTT预处理0.5 h,以7 mg/mL的纤维素酶,7 mg/mL蜗牛酶,5 mg/mL溶菌酶为混合酶,0.6 mol/L的NaCl作为渗透压稳定剂,28 ℃恒温酶解3.5 h,PDA高渗双层培养基再生.该组合制备原生质体形成量达到1.59×107～1.89×107/mL,其再生率达到16.24%～19.25%.