紫外辐射诱导牡蛎细胞DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测

以牡蛎为研究对象,建立了水产动物DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测方法.分别以20W紫外灯距离30 cm照射牡蛎血液细胞30、60和120 s,然后用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤.结果表明:未照射的细胞未受损伤,在电场中核DNA几乎不泳动,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾现象.紫外照射后细胞核DNA均不同程度受损,且拖尾率、尾长、尾矩、Olive尾矩等指标值均随着照射时间加长而增加,DNA损伤程度与紫外照射时间之间存在明显的时间效应关系.研究结果为我国海洋环境中辐射防护研究和辐射毒理学检测提供新的研究方法和思路.     

多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的制备及其相对分子质量的测定

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过凝胶过滤层析、离子交换柱层析、凝胶电泳,得到纯度较高的R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白.在SDS-PAGE中,藻红蛋白表现出4个带有发色团的亚基α、β、β'、γ和γ',其相对分子质量分别为1.73×1041,.95×104,3.33×104和3.10×104;藻蓝蛋白则表现出3个带有发色团的亚基,分别是:α、β和β',其相对分子质量为1.75×1042,.13×104和2.62×104.不同相对分子质量的γ亚基和β亚基的发现都有别于先前的报道,这对藻红蛋白和藻蓝蛋白结构的研究提供了有价值的研究结果.选用Superdex-200凝胶柱层析对纯化的藻红蛋白和藻蓝蛋白进行了相对分子质量测定,藻红蛋白相对分子质量为2.4×105,藻蓝蛋白相对分子质量为1.36×105这表明纯化制备的藻红蛋白和藻蓝蛋白分别以六聚体((αβ)3γ(αβ)3)和三聚体((αβ)3)形式存在.     

PCR-DGGE解析好氧-沉淀-厌氧工艺微生物群落多样性

为研究好氧-沉淀-厌氧(OSA)污泥减量工艺微生物群落结构和多样性,以及运行条件对微生物群落的影响,使用16S rDNA的PCR-DG-DGGE图谱分析方法结合条带割胶回收DNA序列比对,对OSA工艺微生物群落特征进行分析。DG-DGGE图谱聚类分析和多样性指数分析表明,OSA工艺微生物群落多样性比传统活性污泥工艺更加丰富。增加Ns和提高废水水质的复杂性,都能使Shannon指数略有提高,微生物多样性增加,但优势微生物种群基本不受影响。DG-DGGE图谱中优势条带序列分析表明,OSA工艺中的回收到的11个优势菌与α-proteobacte-ria,β-proteobacteria,CFB-group bacteria种属的微生物有很近的亲缘关系,β-proteobacteria约占63.6%。其中6个优势菌与强化生物除磷系统、反硝化系统中出现的微生物同源性非常高,证实了在OSA系统中存在的慢速生长微生物-反硝化菌和聚磷菌。     

单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的方法及应用

单细胞凝胶电泳又称彗星试验,是一种在单细胞水平上检测DNA单、双链断裂和碱性不稳定位点的方法,具有敏感、稳定、快速的优点.近些年来,该方法广泛应用于遗传毒理、环境监测和细胞凋亡等的研究.本文就彗星试验检测DNA损伤方法的原理,评价指标,影响因素以及在一些方面的具体应用进行了综述.     

16S rRNA基因的PCR-DGGE技术分析茶尺蠖幼虫肠道细菌种群结构及多样性

利用16S rRNA的PCR-DGGE（变性梯度凝胶电泳）技术分析研究了茶尺蠖肠道内细菌的种类与多样性.通过对16S rRNA序列分析,从茶尺蠖野外种群肠适中鉴定了11种细菌,这些细菌分属于沃尔巴克氏菌（Wolbachia）、肠杆菌属（Enterobacter）、沙雷氏菌属（Serratia）、梭菌属（Clostridium）、肠球菌属（Enterococcus）、暂定类群EO1;其中以肠杆菌、沃尔巴克氏菌、沙雷氏菌属最为常见.另外,也鉴定了一种茶树叶绿体上的16SrRNA基因.茶尺蠖幼虫体内的共生菌多样性分析结果,将会为害虫综合治理提供一条全新的探索途径.     

不同有机碳与无机氨氮比（C/N）下自养硝化生物膜上微生物菌群的变化

通过变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）研究随有机碳与无机氨氮比（C/N）升高,自养硝化膜上微生物菌群结构的变化.实验结果表明随C/N升高,微生物菌群从以硝化细菌为主导到以反硝化细菌为主导,硝化过程也由仅硝化到同时硝化反硝化.主要的硝化菌是Nitrosomonas europaea和Nitrobacter sp. ,主要的反硝化菌是Pseudomonas sp. , Acidovorax sp.和Comamonas sp..在高C/N 时,尽管反硝化菌占多数,但硝化菌并没有消失,而是与反硝化菌同存.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的“集成化”研究

聚丙烯酰胺凝胶电泳是生物类相关专业学生必须掌握的一项实验技术。该项实验技术可以分析蛋白质及各种同工酶。教学实验中往往只能涉及蛋白质电泳或者是某一种同工酶的分析。为使学生能全面地掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,本实验教学示范中心开展了聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的"集成化"研究与实践,并取得了满意的效果。     

N-取代吡啶酰胺与DNA作用的研究

合成了由N-芳环、氮杂环和脂肪烃取代的5种吡啶酰胺类化合物:N-苯基-吡啶-2-甲酰胺(L1),N-2-氯苯基-吡啶-2-甲酰胺(L2),N-2-硝基苯基-吡啶-2-甲酰胺(L3),N-2-吡啶基-吡啶-2-甲酰胺(L4)和N,N'-双(2-吡啶甲酰胺)-1,4-二乙烯三胺(L5),应用紫外光谱法、荧光光谱法、黏度法、表面增强拉曼光谱法及琼脂糖凝胶电泳法研究了5种化合物与DNA的相互作用.紫外光谱研究发现,随着DNA的加入,5种化合物的吸收带均出现减色效应,且伴随着微弱的红移现象.5种化合物对DNA与溴化乙锭(EB)复合体系的荧光有猝灭作用,测得线性Stern-Volmer常数Ksq分别为1.73(L1),0.92(L2),2.21(L3),1.32(L4)和0.77(L5),表明与DNA作用的增强顺序为:L5,L2,L4,L1,L3.这5种化合物对DNA黏度的影响呈现了不同的变化趋势.研究结果表明,L1,L2,L3和L4与DNA的作用为插入模式,而L5与DNA的作用可能为沟面结合或者静电作用模式.琼脂糖凝胶电泳实验显示,5种化合物能对pBR322 DNA进行一定程度的切割,随着化合物浓度的增加,开环构型DNA逐渐增多,超螺旋构型DNA逐渐减少;并且L3还能将切口环型DNA进一步切割成线型DNA.     

Comparative proteomic analysis of the response in resistant and susceptible maize inbred lines to infection by Curvularia lunata

Proteins differentially expressed from maize leaves in response to the infection by Curvularia lunata strain CX-3 were identified through a high-resolution two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) method. Two inbred lines, 78599-1 and E28, were used, respectively, as resistant and susceptible lines to CX-3 infection. Proteins were extracted from the fourth leaves of six- or seven-leaf stage plants sampled at 24, 36, 48, 60, and 72 h after inoculation with CX-3. Twenty-seven differentially expressed protein spots resolved on the 2-DE gels were identified by MALDI-TOF MS/MS. The results showed that these proteins are associated with photosynthesis, respiration,oxidative and drought stress tolerance as well as signal transduction in maize. Among stress-related proteins, the 22 kDa drought-inducible protein, putative glutathione peroxidase (GPX), and translation initiation factor (eIF-5A) were up-regulated in the resistant inbred line and were implicated in host defense response to C. lunata infection. It suggests that drought-inducible and oxidation stress-related proteins might directly contribute to maize resistance to C. lunata.