粘质沙雷氏菌低温脂肪酶的基因克隆与酶学性质分析

克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因lip18,实现其在大肠杆菌中的表达,并进行酶学性质研究.克隆脂肪酶基因lip18,并构建p ET-28a(+)-lip18重组表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导优化重组蛋白表达,并研究其酶学性质.克隆得到脂肪酶基因lip18,全长为1 842 bp,编码614个氨基酸.重组菌的诱导温度对蛋白表达影响很大,在最适诱导温度为20℃时脂肪酶大量表达,重组脂肪酶的相对分子质量约为65 ku.酶学性质研究表明:重组酶高效水解C10~C16的中、长链脂肪酸,最适作用温度30℃,最适作用pH值7.0,并且在0℃条件下有一定的催化活性,热稳定性差,是低温中性脂肪酶;同时,对有机溶剂有较好的耐受性.     

鲍鱼水解肽的抗氧化活性评价、组成分析及稳定性研究

通过研究鲍鱼水解肽的清除自由基能力、还原能力来评价其抗氧化活性,测定水解肽的相对分子质量分布情况、氨基酸含量,对鲍鱼水解肽的营养价值进行全面分析. 结果表明：鲍鱼水解肽具有较强清除自由基的能力和还原力;其相对分子质量在107~10031u范围内呈连续分布,其中小于5000u的水解肽占比达82.0%;水解肽由18种氨基酸组成. 当温度在20~60℃,pH值为7、8、10时水解肽的活性无显著变化,金属离子对DPPH自由基的影响随质量浓度增加逐渐增强,经胃蛋白酶和胰蛋白酶消化5h后,DPPH自由基清除能力保持率分别为（66.03±0.29）%、（109.03±0.57）%.     

天然抗冻多肽的制备、 分离及细菌低温保护活性研究

利用热水抽提法提取鲨鱼皮明胶,控制酶法水解条件制备天然抗冻多肽.以细菌低温保护活性为指标,筛选蛋白水解酶种类及酶解时间,利用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段进行分离,得到细菌低温保护高活性组分.结果表明,酶解鲨鱼皮明胶得到高活性抗冻多肽的最适蛋白水解酶为酸性蛋白酶,酶解温度50℃、pH 3.0、酶/底物3 000 U·g-1、底物浓度3%、酶解时间1 h;经过Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段得到阳离子的P2组分,经过细菌低温保护测试,当浓度为500μg·mL-1时,大肠杆菌的存活率达到80.8%.分离得到的抗冻多肽具有较高的抗冻活性,可望应用于食品、医药等产业中.     

一株产高温纤维素酶曲霉菌的发酵条件及培养基优化

对一株产高温纤维素酶的曲霉(Aspergillus sp.)F4菌株进行培养基及发酵条件的优化.最佳产酶液体培养基配方为:稻草粉40 g·L-1,(NH4)2SO43.5 g·L-1,NaCl 2 g·L-1,KH2PO42 g·L-1,MgSO4.7H2O 0.5g·L-1,甘油0.20%,pH 5.5;优化后CMC酶活力提高16.7倍.优化后产酶条件为:接种量4%,温度37℃,摇床转速150 r.min-1,装液量80 mL/250 mL.在此条件下发酵8 d,CMC酶活力达到了12.26 U.mL-1,比优化前提高了约2倍.     

猪皮明胶抗冻多肽的制备及其低温保护活性研究

以食品源猪皮明胶为原料,用碱性蛋白酶水解,制备抗冻多肽,并对影响碱性蛋白酶水解的各个因素进行研究. 以水解制备的多肽对过氧化氢酶的低温保护活性为指标,在单因素实验的基础上,通过正交实验确定碱性蛋白酶水解猪皮明胶的最适pH为9.0,最适温度是37℃,酶和底物比例为1∶50,酶解时间3h. 在此条件下制备的抗冻多肽对过氧化氢酶的低温保护活性为88.2%. 与牛血清蛋白和商业抗冻剂（4%蔗糖+4%山梨醇）比较,抗冻多肽表现出更优越的抗冻活性,且其抗冻活性和浓度成正相关关系.     

高纯度荷叶碱的制备及其药效研究

以福建建宁荷叶为原料,研究荷叶碱和总黄酮的提取纯化技术.采用FD阳离子交换树脂分离与石油醚萃取组合技术可得85%纯度荷叶碱,得率82%以上;进一步结晶,荷叶碱纯度达95.4%以上.采用聚酰胺柱分离技术纯化黄酮,纯度可达55%,总收率80%以上.动物药效学试验表明,荷叶碱具有明显的降甘油三酯、降胆固醇及减肥效果,是荷叶中减肥降脂的主要活性成分,建议每日每人摄入量为25~30 mg.黄酮也具有一定的功效.     

微波裂解温度对菌糠生物炭特性的影响

为了探讨菌糠微波裂解产生的生物质炭作为土壤改良剂的可行性,试验分析不同裂解温度下生物质炭的理化特性,以期探究菌糠生物质炭的理化特征,以及微波裂解温度对它的影响变化规律.结果表明,微波裂解温度对菌糠裂解产物生物质炭的性质具有显著影响,较低裂解生物炭元素组成含量较高,但裂解不完全;而随着裂解温度升高,生物质炭表现出较高的pH值10.43、持水量7.886 m L·g~(-1)和比表面积189.38 m~2·g~(-1).研究对于菌糠生物质炭在土壤改良、固碳减排等方面的应用具有一定的借鉴意义.     

枯草芽孢杆菌发酵生产腐植酸条件研究

以枯草芽孢杆菌为生产菌株,在蔗渣发酵培养基的基础上,采用一次回归正交试验,对腐植酸发酵过程中接种量、通气量(搅拌次数)、温度及时间4个因素对腐植酸产量的影响情况进行分析.试验结果表明,发酵时间的影响最为显著;所得到的回归方程有效且可信度高,回归方程为:y=4.6844+0.03251+0.0208A-0.041 9θ+0.202 5D,其中发酵时间、接种量和通气量与腐植酸产量呈正相关、与温度呈负相关.     

甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸在棘孢小单孢菌中的作用

在棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)突变株(Fzu-707)产生小诺霉素的过程中,运用正交设计筛选小诺霉素(Micronomicin, MCR)生物合成促进剂--氨基酸.经摇瓶实验证明在原培养基中添加一定量的甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸有利于生物合成小诺霉素,在旋转摇床上220 r/min 36 ℃培养,发酵时间由原工艺144 h缩短到104 h,产量(u·mL-1)较对照可增加20%左右,产素率(u·mL-1·h-1))提高60%左右.     

花生几丁质酶的纯化及酶学性质研究

本课题利用亲和色谱和凝胶过滤色谱法从花生种子中分离得到了几丁质酶.经SDS-PAGE鉴定,该酶蛋白已达电泳纯,分子量约34.4 kD.在还原和非还原状态下均显示单一区带,表明其为单体蛋白.此外,通过等电聚焦法可测得该酶等电点为5.1.而酶学性质的相关研究则表明：该酶最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.