N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌合成庆大霉素的影响

研究了N-乙酰氨基葡萄糖对绛红小单孢菌产素的影响,实验探索了N-乙酰氨基葡萄糖添加工艺,在250mL摇瓶发酵过程中培养48h,60h分别添加0.05%,0.15%N-乙酰氨基葡萄糖可使庆大霉素生测效价达2 030U/mL,较对照1 228U/mL提高了65%以上(三次平均基本一致);5L发酵罐试产三批次发酵终结,生测效价平均为1 727U/mL(厡工艺1 097U/mL)提高了57%,效果十分明显.同时测定了发酵过程中菌体代谢各种参数的变化,证明了N-乙酰氨基葡萄糖在绛红小单孢菌生物合成中的促进作用.本方法操作简单,基本不改变原工艺,生产成本低廉,对提高庆大霉素产量效果非常明显.     

甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸在棘孢小单孢菌中的作用

在棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)突变株(Fzu-707)产生小诺霉素的过程中,运用正交设计筛选小诺霉素(Micronomicin, MCR)生物合成促进剂--氨基酸.经摇瓶实验证明在原培养基中添加一定量的甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸有利于生物合成小诺霉素,在旋转摇床上220 r/min 36 ℃培养,发酵时间由原工艺144 h缩短到104 h,产量(u·mL-1)较对照可增加20%左右,产素率(u·mL-1·h-1))提高60%左右.     

钝齿棒状杆菌二氢吡啶二羧酸合成酶的初步研究

本工作对钝齿棒状杆菌AS1.542及其产赖氨酸诱变株253(AEC),365-25P-3(AEC,Hosor~-)赖氨酸分枝途径的第一个酶DDP Sase进行初步纯化,研究天门冬系氨基酸对该酶活性的影响,对钝齿棒状杆菌AS1.542的赖氨酸生物合成调节机制进行初步探讨,发现钝齿棒状杆菌AS1.542赖氨酸分枝途径的第一个酶DDP Sase受末端产物赖氨酸的反馈抑制,在诱变株253(AEC),365-25P-3(AEC,Hoser~-)菌中,赖氨酸对DDP Sase的反馈抑制被部分解除,因而有利于产生大量赖氨酸。     

庆大霉素生物合成关键酶基因在E.coli中的克隆与表达

从庆大霉素产生菌?棘孢小单孢菌基因组中扩增出参与庆大霉素生物合成的关键酶基因——2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因GntB,将其分别克隆到克隆载体pBS-T和表达载体pET-22b(+)上,并将pET-gntB转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导使GntB基因实现表达.GntB基因大小为1 193 bp,其编码的氨基酸含397个残基,约为42 kD的多肽链.     

庆大霉素产生菌GntB基因的克隆与转化

根据小单孢菌产生庆大霉素的生物合成机理，利用基因克隆方法从棘孢小单孢菌（Micromonospora echinospora）基因组中扩增出庆大霉素生物合成的关键酶基因—2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因（GntB），并将其通过大肠杆菌／链霉菌穿梭质粒pIJ699转化原菌株，采用硫链丝菌素抗性基因启动子带动2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因在棘孢小单孢菌细胞中实现了转化。     

增加新霉素产量的研究

报道了一种生产新霉素的新工艺.该工艺除去摇瓶发酵原培养基中的玉米浆、花生饼粉及玉米淀粉,添加促进剂甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸,不改变原菌种遗传性状(DNA)36℃培养.摇瓶发酵周期由136 h缩短到112h,产素率(单位时间、单位体积产抗生素的量)提高30%以上,简化了生产工艺,降低了生产成本.     

穿膜肽TAT-PTD的固相合成及其与DNA相互作用的研究

通过N-芴甲氧羰基(N-fluorenylmethoxycarbonyl,Fmoc)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成TAT-PTD多肽,运用高效液相色谱和质谱鉴定合成多肽的纯度和相对分子质量。通过紫外吸收光谱和琼脂糖凝胶电泳阻滞实验研究合成的TAT-PTD多肽与质粒DNA相互作用,实验表明TAT-PTD多肽与质粒DNA可以通过静电作用相互吸引、靠近并结合,于是为下一步小单孢菌基因工程的细胞转导提供了依据。     

反相高效液相色谱测定庆大霉素效价方法的研究

建立了反相高效液相色谱（Reverse Phaseliquid Chromatography，RP—HPLC）测定庆大霉素效价的方法，结合管碟法所做的生物效价进行比较，其相关度R。：0．9823，RSD：1．29，证明RP—HPLC可直接测定庆大霉素的效价，从而解决了生测效价程序复杂，人为误差大的问题。RP—HPLC测定方法：采用岛津高效液相色谱SPD．IOAVP、UV．VIS、LC．IOATVP，PepMapC18Trs4．6×150mmSilicaC18（5μm300A）PhenomenexODS色谱柱，流动相MILLI-Q水：冰醋酸：甲醇（比例为25：5：70）配置0．02mol／L庚烷磺酸钠溶液，流速1．0mL／min，检测波长330nm，检测灵敏度0．020AUFS，柱温为室温，进样量20μL，在10min内可对样品液中C1、C1a、C2a、C24种物质同时进行定性定量测定。     

几种氨基酸对庆大霉素生物合成的影响

在绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea)产生庆大霉素的过程中,运用正交设计筛选庆大霉素(gentam icin)生物合成促进剂——氨基酸.经摇瓶实验证明,在原培养基中添加一定量的甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、蛋氨酸,在旋转摇床上220 r/min 36℃培养96 h,有利于生物合成庆大霉素,较对照产量可增加30%左右,产素率提高40%左右.