海分枝杆菌embA低表达菌株的构建及巨噬细胞侵染实验

通过CRISPRi基因编辑技术构建阿拉伯糖基转移酶基因A(embA)低表达海分枝杆菌突变株,利用qRT-PCR技术检测相关基因转录水平。突变株侵染巨噬细胞后,台盼蓝染色测定细胞存活率,稀释涂布法检测胞内活菌数量。免疫荧光染色观察感染后巨噬细胞中F-actin细胞骨架重排和吞噬小泡的形成。分别通过Western blot和细胞因子悬液芯片方法验证小鼠巨噬细胞J774A.1胞内髓样分化因子88(Myeloid Differenti-ation factor, MyD88)表达量和细胞因子分泌。结果显示：对数生长中期野生型海分枝杆菌中glfT2和embA基因表达量增加。embA低表达突变株中embB,glfT2等6个阿拉伯半乳聚糖合成基因显著下调,但菌体形态和长度不变。与对照菌株相比,突变株侵染J774A.1巨噬细胞24 h后,细胞存活率和胞内CFU上升,吞噬小泡和骨架蛋白无明显变化。胞内MyD88蛋白表达水平增加,分泌性炎症因子TNF-α、IL-6和趋化因子RANTES、MIP-1α水平上升。本研究提示,embA表达量下降会降低海分枝杆菌的细胞毒力,但不会直接改变巨噬细胞吞噬病原菌的生理过...     

通花梗根多糖分离纯化及生物功能研究

以通花梗根为实验材料,对通花梗根多糖的分离纯化、含量测定和组分分离进行研究,探讨该多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。采用正交实验设计选择提取通花梗根多糖的优化条件;采用碳粒廓清实验测定多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。实验结果显示:①提取通花梗根多糖的优化条件为:料水比为1:30,时间2 h,温度90℃;②乙酸铅用量在0.67%以上,可以除净糖液中的蛋白质,乙酸铅用量在0.31%~0.77%之间时,不仅可以排除蛋白质的干扰,而且不会影响多糖得率;③多糖溶液中含醇量达80%以上时,可以完全沉淀多糖;④乙醇分级沉淀该多糖,通过Sephadex G-100柱进行组分分离,得到7个洗脱峰;⑤通花梗根多糖组的碳粒廓清指数(K)和吞噬指数(α)显著高于模型组。实验结果表明,通花梗根多糖由7种单一多糖组分构成,具有提高小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的作用,为进一步阐明通花梗根多糖的药理作用奠定了实验基础。     

GM-CSF诱导的小鼠腹腔巨噬细胞Ca~(2+)激活的非电压依赖性内向整流型K~+通道

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种十分重要的细胞因子,不仅能刺激干细胞的增殖,而且也能增强成熟细胞的功能.后者表现在两个方面,即直接效应和间接效应,间接效应又称启动效应(Priming effect),是指GM-CSF可增强靶细胞对第二刺激(触发刺激Triggering stimulus)的应答能力.到目前为止,对于GM-CSF激活巨噬细胞的过程已进行了大量的研究.然而,离子通道是否参与了这一过程目前尚未见报道.本工作采用膜片钳技术,探讨了小鼠腹腔巨噬细胞经GM-CSF诱导的Ca~(2+)激活的非电压依赖性内向整流型K~+通道的基本特性及其可能的生理功能.     

云芝多糖在NO诱导的巨噬细胞凋亡中的分子基础

在应用云芝多糖的基础上,用NO诱导居噬细胞凋亡,发现云芝多糖可加强NO诱导的细胞凋亡;通过RT－PCR观察诱导生性一氧化氮合酶基因的表达情况,结果表明云芝多糖能诱导一氧化氮合酶基因表达,并可增强γ干扰纱和脂多糖的诱导作用,提示云芝多糖在动脉粥样硬化中的防治作用是通过诱导诱生性一氧化氮合酶表达而实现的。     

精巢间质细胞雄激素合成及其调节的研究进展

本文综述了近年来精巢间质细胞雄激素的合成及其分泌调节的研究进展。间质细胞内的雄激素合成的限速步骤是胆固醇转化为孕烯醇酮时的胆固醇跨线粒体膜转运。在此转运过程中，PBR可能是作为依赖于配体的通道蛋白，对胆固醇分子进行跨膜转移；StAR则通过解离线粒体膜与胆固醇分子的吸附作用，加速了胆固醇分子的转运。雄激素的合成还受垂体、支持细胞、巨噬细胞和其自身分泌激素和细胞因子的调控。同时对今后研究的方向做了总结和展望。     

大黄酸抑制脂多糖刺激巨噬细胞升高[Ca2+]i和释放TNFα的作用特征

以正常腹腔巨噬细胞(PMφ)和脂多糖(Lipopolysacharide，LPS)刺激的PM垂为对象，用MTT法和激光共焦扫描显微术检测肿瘤坏死因子α(TNFα)释放量和单细胞[Ca^2 ]i的动态变化，研究了大黄酸(Rhein)的作用特征和机理．结果显示，大黄酸对正常PMφ释放TNFα没有明确的影响，但对LPS刺激的PMφ释放TNFα有显的抑制作用，其抑制作用随浓度增加而增强，10^-4mol／L大黄酸抑制了10μg／mL LPS效应的72％．值得注意的是，大黄酸不但抑制了LPS引发的PMφ[Ca^2 ]i的升高，而且使LPS引发的[Ca^2 ]i由宽平台峰状转变为振荡动力学模式，胞外介质无钙时又转变为更低幅值的峰．以上结果表明，大黄酸降低LPS引发的PM垂的[Ca^2 ]i升高是其抑制TNFα释放的信号传导通路的重要环节，并提示大黄酸在降低胞内钙释放和胞外钙内流的同时又对其动力学进行了类周期性的调制．     

灵芝菌丝体碱提多糖对小鼠细胞免疫的作用

体外灵芝菌丝体碱提多糖对脾细胞增殖反应和巨噬细胞的吞噬能力均有促进作用,但显示出低剂量增强、高剂量抑制的双向调节能力.体内实验表明灵芝菌丝体碱提多糖高、低剂量组灌胃给药在第10天时,能够最大增强淋巴细胞增殖反应.同时,显著升高CD 4T细胞的百分率,而对CD 8T细胞的百分率无影响,从而改善CD 4T/CD 8T细胞的比值,促进荷瘤小鼠恢复正常的免疫平衡状态.因此,灵芝菌丝体碱提多糖对小鼠体内外细胞免疫有直接作用,但有剂量和时间依赖性.     

中药“催乳Ⅰ号”对小白鼠主要脏器发育及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

将８０只小白鼠随机分为实验Ⅰ组２０只、Ⅱ组２０只，Ⅲ组２０只，对照组２０只。实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小白鼠灌服“催乳Ⅰ号”汤剂（生药含量１ｇ／ｍＬ），剂量分别为０．０７ｍＬ／只，０．０１ｍＬ／只、０．２ｍＬ／只、连续７天，对照组不喂任何药物。测定了各组小白鼠的主要脏器指数，结果表明：实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比脾脏指数差异均极显著（Ｐ＜０．０１）；实验Ⅱ组与对照组相比肺脏指数差异极显著（Ｐ＜０．０１），心脏、肝脏指数差异均显著（Ｐ＜０．０５）；实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照组相比小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬率差异均极显著（Ｐ＜０．０１）。     

“枸杞花粉口服液”对巨噬细胞功能的影响

作者观察了“枸杞花粉口服液”对小鼠腹腔巨噬细胞形态、酸性磷酸酶变化及对酶母细胞的吞噬活性，结果表明：“枸札花粉口服液”可以激活巨噬细胞，吴活化状态ＡＣＰａｓｅ活性增高，对酵母细胞吞噬活性增强，说明“枸杞花粉口服液”可提高机体免疫功能。