| 海分枝杆菌embA低表达菌株的构建及巨噬细胞侵染实验 |
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| 引用本文： | 李烨雨,刘含梅,黄滢睿,郭滨,张鹭.海分枝杆菌embA低表达菌株的构建及巨噬细胞侵染实验[J].复旦学报(自然科学版),2023(5):585-594. |
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| 作者姓名： | 李烨雨 刘含梅 黄滢睿 郭滨 张鹭 |
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| 作者单位： | 1. 复旦大学生命科学学院微生物学与免疫学系;2. 复旦大学遗传工程国家重点实验室;3. 复旦大学基础医学院;4. 复旦大学生命科学学院实验教学中心 |
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| 基金项目： | “十四五”国家重点研发计划(2021YFC2301500)； |
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| 摘 要： | 通过CRISPRi基因编辑技术构建阿拉伯糖基转移酶基因A(embA)低表达海分枝杆菌突变株，利用qRT-PCR技术检测相关基因转录水平。突变株侵染巨噬细胞后，台盼蓝染色测定细胞存活率，稀释涂布法检测胞内活菌数量。免疫荧光染色观察感染后巨噬细胞中F-actin细胞骨架重排和吞噬小泡的形成。分别通过Western blot和细胞因子悬液芯片方法验证小鼠巨噬细胞J774A.1胞内髓样分化因子88(Myeloid Differenti-ation factor, MyD88)表达量和细胞因子分泌。结果显示：对数生长中期野生型海分枝杆菌中glfT2和embA基因表达量增加。embA低表达突变株中embB,glfT2等6个阿拉伯半乳聚糖合成基因显著下调，但菌体形态和长度不变。与对照菌株相比，突变株侵染J774A.1巨噬细胞24 h后，细胞存活率和胞内CFU上升，吞噬小泡和骨架蛋白无明显变化。胞内MyD88蛋白表达水平增加，分泌性炎症因子TNF-α、IL-6和趋化因子RANTES、MIP-1α水平上升。本研究提示，embA表达量下降会降低海分枝杆菌的细胞毒力，但不会直接改变巨噬细胞吞噬病原菌的生理过...
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| 关 键 词： | 海分枝杆菌 embA 巨噬细胞 髓样分化因子88 F-actin |
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