人血小板多态性抗原HPA-1a/HPA-1b在CHO细胞中的表达及功能研究

为了在体外研究HPA-1抗原的多态性,同时建立一种更简便灵敏的检测抗HPA-1同种(异型)抗体的方法,将含有HPA-1a和HPA-1b的DNA质粒分别转染CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)并获得稳定表达β3HPA-1a和β3HPA-1b的细胞株.流式细胞分析结果表明,CHO细胞结合抗HPA-1a同种(异型)抗体的能力与细胞表面β3整合素表达量直接相关.同时,针对HPA-1a表位的单克隆抗体SZ21仅能抑制CHOβ3HPA-1a细胞的粘附,对CHOβ3HPA-1b细胞却没有影响.抗HPA-1a参照血清能阻断CHOβ3HPA-1a细胞的粘附,但对CHOβ3HPA-1b细胞却影响甚微.结果表明,CHO细胞模型可以成功地用来表达并研究HPA-1a的多态性及其抗原特性,同时可以作为用于临床检测抗HPA-1a同种(异型)抗体的一种替代方法.     

整合素家族与肾小球系膜研究进展

整合素为一类位于细胞膜表面的糖蛋白分子，是细胞与细胞外基质（ＥＣＭ）相互作用的主要介导者。新近研究发现，整合素在维持肾小球组织的完整性和炎症、硬化过程中起重要作用。本文重点介绍整合素家族与肾小系膜的关系，包括其结构特性、表达调节和信号传递机制等等。     

应力方向对内皮细胞力学传递和功能的影响

剪切力可经由应力感受、信息传递和基因与蛋白质的表达来调控血管内皮细胞的功能。层流剪切力会导致单核细胞趋化蛋白质(MCP-1)及多种增生基因的迅速上调。但有特定方向的持久层流剪切力会使MCP-1及增生基因与蛋白下调, 同时并上调抑制内皮细胞增生的基因与蛋白。复杂的流型没有什么固定的方向,会使MCP-1及增生基因持续上调,因而增加单核细胞的侵入及内皮细胞的分裂及凋亡。在动脉的直管部分,层流剪切力有特定的方向,因此有抗动脉粥样硬化的作用。在动脉分支部位,复杂的流型有促使动脉粥样硬化的作用。所以,应力的方向对内皮细胞在正常及疾病时的功能有重要影响。     

阳离子-π相互作用对整合素α4β7配体结合亲和性及其信号转导的调控

淋巴细胞在血管内皮表面的黏附和迁移是炎症反应病理过程中的重要步骤和关键环节,这一过程是由淋巴细胞表面的一类特殊黏附分子——整合素所介导的。研究显示,整合素α4β7的异常表达和活化与一些人类自身免疫疾病密切相关,如溃疡性结肠炎、克罗恩病等。整合素α4β7的生物学功能是依靠对其配体亲和性及其相关信号转导的动态调控来实现的。这种精确的动态调控机制一直以来都是整合素研究领域的热点。我们的研究发现整合素α4β7的特异性决定环（specific determining loop,SDL）与协同金属离子结合位点（the synergistic metal ion binding site,SyMBS）通过一对特殊的阳离子-π相互作用相连接。该阳离子-π相互作用的丧失严重影响了高亲和性α4β7介导的细胞稳定黏附,但是对低亲和性α4β7介导的细胞滚动黏附影响很小。破坏该阳离子-π相互作用诱导了整合素胞外区的部分伸展和胞内亚基一定程度的分离,并影响了整合素所介导的双向跨膜信号传递,表现为胞内paxillin蛋白水平上调以及paxillin与α4β7的结合增强,同时胞内FAK蛋白表达以及磷酸化水平上调。研究还发现阳离子-π相互作用的丧失抑制了整合素介导的细胞迁移。该研究首次发现阳离子-π相互作用对整合素配体结合亲和性以及信号转导的调控机制,不仅有助于我们进一步了解整合素相关的生理病理过程,而且为相关自身免疫疾病的治疗提供了一个新的药物靶点。     

整合素连接激酶相关磷酸酶（ILKAP）抗体的制备及其特异性分析

以整合素连接激酶相关磷酸酶（ILKAP）全蛋白为抗原, 采用腿部肌肉注射和耳缘静脉注射相结合的方法对新西兰大白兔进行免疫, 共免疫6次, 最
终获得ILKAP抗血清. 采用Protein A agrose柱纯化抗体, 获得ILKAP的多克隆抗体. 免疫印迹分析表明, 所获得的ILKAP多克隆抗体具有较高的特异性, 间接ELISA方法测定ILKAP多克隆抗体的滴度为1 ∶1 600. 免疫荧光分析表明, 所获得的ILKAP多克隆抗体在细胞水平应用效果较好.     

抗β8整合素单克隆抗体在推断小鼠死亡时间中的初步应用

用抗β8整合素单克隆抗体,检测星形胶质细胞氧糖剥夺-复氧模型,小鼠死后不同时间肾和脑组织β8整合素表达、定位的变化,绘制光密度平均值-死亡时间曲线,初步推断小鼠个体死亡时间.结果显示缺氧环境中,星形胶质细胞、肾小管上皮细胞和脑胶质细胞β8整合素表达量升高.细胞形态的变化以脑胶质细胞最为明显,β8整合素定位由细胞膜到细胞浆,最后随细胞膜破裂释放到细胞外基质.Image-Pro Plus分析显示,缺氧脑胶质细胞β8整合素表达量在48 h达最高值,绘制的光密度平均值-死亡时间曲线能初步推断小鼠个体死亡的时间.     

应力刺激在植物细胞防卫反应中的作用

在病原菌与植物初步接触并企图定植期间,有一系列的识别活动,其中包括物理学和生化识别等．二者的相互关系,将直接影响以后的侵染．在病原真菌侵染过程中,不仅对植物细胞有一个酶解的过程,还有一个物理挤压的过程．后者的应力刺激几乎总是能够引起细胞壁相关的防卫反应,诸如细胞外超氧化物的产生和胼胝质的沉积等．化学信号和力学信号诱导的有机结合才能引发完整的细胞防卫反应．和哺乳动物细胞相似,植物细胞对于力学信号的感知和传导依赖于细胞壁和细胞膜之间的粘附。该粘附是由包含RGD（Arg-Gly-Asp）序列多肽特异介导的,并且该粘附为植物细胞壁相关防卫基因表达所必需．     

RGD在整合素中的作用及纤粘蛋白介导的生物学过程

整合素直接参与细胞与细胞质的相互作用，控制细胞的分化、形态发生、增殖和迁徙。整合素直接参与细胞与细胞质的相互作用受到细胞粘附分子整合素家族的调节，以增强它们的粘附功能。整合素受体功能被认为是细胞行为的关键调节器。在再生性血管中选择性表达的许多分子中，整合素在肿瘤靶向方面显示出了特别的希望。SaiKi和其合作者报告．肿瘤再生血管受到整合素和含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列的细胞质蛋白的相互作用而受到抑制。在再生性心血管形成中研究最多之一的靶向决定簇是αvβ3整合素。研究表明αvβ3和αvβ5整合素更能调节血管再生内皮细胞，并且这些整合素受到抗体的抑制，环RGD肽和RGD多肽类似物能干扰新血管的形成。本文意在概括一下RGD在整合素中的作用及纤粘蛋白介导的生物过程。     

以整合素为靶点治疗乳腺癌的研究进展

乳腺癌是严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见肿瘤之一,发病率占各种恶性肿瘤的7%～10%.乳腺癌通常发生于乳房腺上皮组织,绝经期前后的妇女发病率较高.男性乳腺癌罕见,仅占乳腺癌患者的1%～2%.整合素是细胞表面受体的主要家族,介导细胞和细胞外基质的黏附,介导细胞间的相互作用.整合素在生物体内广泛表达,在许多生命活动中发挥着关键的作用.整合素与癌症进程密切相关,在转移性肿瘤中某些整合素高表达,并与蛋白水解酶相互作用,导致基底膜降解.整合素通过重塑细胞外基质在肿瘤的迁移和侵袭中起着重要作用.综述了以整合素为靶点治疗乳腺癌的新进展.     

含RGD环六肽与整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合反应

ＲＧＤ序列普遍存在于细胞外基质蛋白中，并能为许多整合素蛋白所识别．利用 ＥＬＩＳＡ，ＳＰＲ等技术，对表面固定的人工合成生物素－含 ＲＧＤ环六肽［ｃｙｃｌｏ（－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－）］与人血小板整合素蛋白α_（Ⅱｂ）β_３的结合能力进行了检测结果表明，含ＲＧＤ环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 １．４８～２．２ ｎｍ时， ＲＧＤ序列才能有效进入α_（Ⅱｂ）β_３以头部的反应中心并发生结合反应；反应的平衡解离常数为 １．１μｍｏｌ／Ｌ．为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统．