正交设计优化苜蓿ISSR-PCR反应体系的研究

以苜蓿基因组DNA为模板,利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物和模板)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合苜蓿的最佳ISSR反应体系:20μL反应体系中加83.4 nkat Taq酶,2.0 mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.0μL,0.4 mmol/L dNTP,0.2 mmol/L引物,2.5 ng DNA模板.PCR扩增反应程序为:94℃预变性4 min(94℃变性1 min,45~53℃退火1 min,72℃延伸1 min)40个循环,于72℃延伸7 min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.     

磷酸缓冲液对大豆种子萌发期抗冷性的影响

用0.01mol/L的pH5.8磷酸缓冲液浸种9h,可在大豆种子萌发期低温胁迫((3±1）℃,24h)条件下,能有效地降低相对电导率,水溶性蛋白含量和稀碱提取蛋白含量明显增加,脯氨酸含量也显著增加.表明磷酸缓冲液浸种对大豆种子萌发期在低温胁迫时,具有防护作用.     

甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳体系的建立

双向电泳是目前唯一能将数千种蛋白同时分离与展示的技术.以具有野生白花甜菜优质基因资源的甜菜M14品系为材料,从植株取材、样品制备、蛋白质定量、上样量、双向电泳、染色、脱色等方面优化,构建了高效、稳定的甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳技术平台.结果证明所获得的凝胶图谱背景清晰,对比度高,重复性好,蛋白质点边缘平滑,并且...     

大豆胚芽中RNA提取方法的比较评价

从细胞中分离完整性好、纯度高的RNA是进行基因克隆和基因表达研究的基础，不同植物、不同组织的RNA提取难点各异，适宜方法也不尽相同，大豆胚芽富含蛋白质、脂质、多糖、酚类化合物及未知次级代谢产物，其组成成分的复杂性增加了从大豆胚芽中提取高质量的RNA的难度，本文采用了尿素-LiCi法、异硫氰酸胍法及改进的异硫氰酸胍法等三种方法从大豆胚芽中提取了RNA，从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这三种方法进行了比较和评价，结果发现改进的异硫氰酸胍法是从大豆胚芽中提取RNA的适宜方法。     

大豆油脚中大豆磷脂的提取

通过离心提取新鲜大豆油脚的中层分离物,将其与丙酮充分混合,经减压抽滤、真空干燥得到大豆磷脂并对该过程提取条件进行了优化.结果表明,最佳提取条件为离心转数5 000 r/min,磷脂与丙酮的体积比为1∶6,丙酮洗涤3次,得到相对质量分数为86.78%的大豆磷脂.     

UV - vis/H2O2/草酸铁络合物法光解焦化含酚废水的研究

研究了用UV-vis/H2O2/草酸铁络合物法处理含酚废水时诸因素对COD去除效果的影响.通过正交试验确定最佳工艺条件初始pH=3.7,H2O,、FeSO4、K2C2O4加入量为35mmol/L、20mmol/L、50mmol/L,反应的持续时间60min,此条件下再经絮凝处理,废水COD由650nag/L降至32mg/L左右,去除率达95%;挥发酚由15mg/L降至0.5mg/L以下,去除率近97%.本法的处理效果和能耗均好于UV/Fenton法.     

红球菌菌株腈水合酶提取方法优化

研究了红球菌(Rhodoccus sp.Tccc28001)腈水合酶初步提取实验.对腈水合酶提取的菌体培养时间、细胞的超声破碎方法和硫酸铵分级分离方法进行了优化.结果表明,提取的最佳条件为:培养96 h收获菌体;在4℃下溶菌酶处理菌悬液40 h后进行超声波处理,400 W超声破碎60min,分2次进行,每次30 min(60个循环,15 s超声,15 s间歇);然后使用40 mmol/L磷酸缓冲液,经20%~70%饱和度硫酸铵沉淀,能获得最高产率的腈水合酶.此研究为腈水合酶的层析纯化奠定了基础.     

单柱离子色谱法(草酸、草酸—乙二胺淋洗液)测定碱金属和碱土金属离子

本文用单柱离子色谱法测定了碱金属和碱土金属离子，以草酸为淋洗液测定了碱金属离子，确定淋洗渡最佳浓度为4.0mmol/L，并以此淋洗液测定了Li^ 、Na^ 、K^ 和Rb^ 的检出限及精密度，以草酸－乙二胺为淋洗液测定了碱土金属离子，确定淋洗液的最佳组成为0.5mmol/L草酸-0.25mmol/L乙二胺，测定了Mg^2 、Ca^2 和Sr^2 检出限，方法用于雪样分析，结果良好。     

柱前衍生高效液相色谱-质谱法测定血浆中的氨基葡萄糖浓度

采用柱前衍生高效液相色谱-电喷雾质谱法(HPLC-ESI-MS)测定了人血浆中的氨基葡萄糖浓度.该方法以氨基半乳糖为内标,用丙酮沉淀蛋白后,加入5 μL三乙胺和10μL异硫氰酸苯脂后,在60℃的恒温水浴中反应1 h,用氮气吹干、流动相溶解后于离心机上以12 000 r/min离心5 min后进样20μL分析;以甲醇与水作流动相,经过Ultimate-XB C18柱(4.6 mm ×250 mm,5μm,Welch Materials)在梯度模式下分离后1:4分流,以0.2 mL/min的流速进质谱分析.实验结果表明:氨基葡萄糖的回归方程为Y=6.70×10-4X+1.11×10-2(r2=0.996),在0.10～5.00μg/mL范围内线性关系良好;最低定量限为0.10 mg/L;氨基葡萄糖和内标的萃取回收率分别为88.3%～92.1%和85.2%;日内、日间精密度的RSD值分别为<6.0%、<5.0%,稳定性的RSD<7.5%.所建立的方法准确度好、灵敏度高、稳定性好,适合于血浆中的氨基葡萄糖的含量测定.     

大孔树脂柱层析法提取蛹虫草废弃培养基中的虫草素

目的提取纯化蛹虫草废弃培养基中的虫草素.方法利用正交实验优化热水浸提条件,即浸提温度70℃,浸提时间8 h,料液比1 g∶20 mL,对虫草素进行粗提;用优化的大孔树脂层析法,即XAD16树脂,在pH9.0的条件下,以体积分数为50%的乙醇作为洗脱剂,对其进行分离,利用聚酰胺树脂精制虫草素.结论提取的虫草素纯度达到了98%以上.     

原子吸收解吸仪分离测定食品中镉

应用YAE-2原子吸收解吸仪自动萃取食品中的镉.结果表明,镉在pH8～9的氨缓冲溶液存在的条件下被EDTA富集柱富集,用Imol/L硝酸溶液作洗脱载液,食品镉含量在100～200μg/kg之间时,含量与最大吸光度成线性关系.测定镉含量为0.5mg/kg的食品,标准差为0.0042mg/kg;均值为0.217mg/kg,变异系数1.93%.检出限为5μg/L(以被测液中的镉计).本方法适用于各种食品中镉的分析,具有分析速度快、准确度好、灵敏度高、线性范围宽等优点.是一种在线高速解吸的分离分析技术.     

反相高效液相色谱法测定烟草中烟碱的优化

考察了烟碱在C18柱上的色谱行为.优化出的反相高效液相色谱法测定烟草中烟碱的条件为:ODSHypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱;柱温25℃;流速1 mL/min;流动相A为10 mmol/L的磷酸氢二钠缓冲溶液,三乙胺添加量为0.2%,pH值为4.2,B为甲醇;A∶B=95∶5;检测波长259 nm.该条件下烟碱的分离和对称性良好,保留时间短,准确度高、重现性好.     

玉米皮多糖超声波辅助提取工艺研究

以玉米片为原料,采用超声波辅助法提取其多糖,通过单因素和正交实验优化料液比、超声功率、超声时间和超声温度等因素,以多糖提取率为评价指标,确定该多糖提取的最佳工艺条件.试验结果表明,玉米皮多糖最佳提取条件为料液比1∶25 g/m L、超声功率126 W、超声时间20 min、超声温度60℃,多糖提取率达到34. 2%±0. 31%.文中的相关试验方法将为以后的玉米皮多糖提取工艺提供理论依据.     

大豆乳清提取物的初步定性分析

采用超滤、乙酸乙酯萃取、大孔树脂柱层析等工艺,从工业上生产大豆分离蛋白的副产物———大豆乳清中提取出一种棕黄色膏状物.通过颜色反应、紫外光谱对提取物进行了初步的定性分析.结果表明,提取物中含有异黄酮类物质,但其含量和组成情况还需进一步分析.     

酒石酸、酒石酸-乙二胺流动相的非抑制型离子色谱法测定碱金属和碱土金属离子

用非抑制型离子色谱法测定了碱金属和碱土金属离子,以酒石酸为流动相测定碱金属离子,以酒石酸－乙二胺为流动相测定碱土金属离子,研究了淋洗液浓度对保留值的影响,当淋洗液浓度增大时,保留值减小,选择6.0mmol／L酒石酸作流动相测定了Li^ 、Na^ 、NH4^ 、K^ 和Rb^ 的检出限及线性范围,选择4.0mmol/L酒石酸－2.0mmol/L乙二胺作流动相测定了Mg^2 、Ca^2 、Sr^2 和Ba^2 的检出限和线性范围。方法用于雪样分析,结果良好。     

高活性牛肠碱性磷酸酶的制备

本文叙述一种从小牛肠粘膜制备碱性磷酸酶的方法.主要包括用正丁醇提取,丙酮和硫酸铵分级,DEAE纤维素离子交换层析和Sephadex凝胶过滤.所得制剂比活为845单位/毫克蛋白;活力回收29%;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一性活力区带.     

基于普鲁士蓝/双胺氧化酶修饰的生物胺传感器

通过壳聚糖及戊二醛将双胺氧化酶固定在普鲁士蓝修饰的玻碳电极表面,制备了生物胺传感器.考察了该传感器的电化学特性并优化了实验条件.结果表明,在优化条件下所制备的传感器的电流响应与组胺浓度在0.33μmol/L~3.3 mmol/L(3.7×10-2~3.7×102mg/L)范围内相关;检测限(S/N=3)为0.05μmol/L(6μg/L).该传感器具有响应范围宽、灵敏度高、选择性强、简便快速的特点.     

甘肃地区冬虫夏草液体发酵研究

自甘肃地区采摘的冬虫夏草子座和内核菌上经组织分离得到冬虫夏草菌,经形态学鉴定为中国被毛孢,利用该菌株进行液体发酵.结果表明：温度18℃、溶氧量160 r/min、接种量10％、pH自然;优化配方为：葡萄糖30 g/L、蚕蛹粉20 g/L、KH2PO4 1.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.9 g/L,2 g/L（NH4）2SO4＋0.1 g/L VB1,发酵8天可得菌丝体产率为17.36 g/L.     

离子色谱法对丁二酸中微量甲酸和乙酸的检测

建立了测定丁二酸中微量甲酸和乙酸的离子色谱法（IC）.最佳色谱分析条件为：ICA1亲水性阴离子交换分离柱（5 μm×4.6 mm×10 cm）,淋洗液为0.8 mmol/L邻苯二甲酸,电导检测器,电导率0.1 μS/cm,流速0.5 mL/min,柱温45 ℃.在上述色谱条件下,甲酸和乙酸的线性范围分别为0.02～500、0.05～500 μg/L ,线性相关系数均大于0.999 9.样品中甲酸、乙酸的加标回收率为98.96 %~100.90 %,其相对标准偏差（RSD）均小于1.5%.该方法具有操作简便、稳定、准确、可重复的特点,可用于由顺丁烯二酸酐催化加氢生产的丁二酸中微量甲酸和乙酸的定性定量分析.     

微萃取火焰原子吸收法测定水中微量铅

建立了分散液-液微萃取与火焰原子吸收光谱结合测定水中微量铅的实验方法.该方法为火焰原子吸收光谱法提供了一种易雾化的、非易燃的有机萃取体系.选定并优化了萃取的影响参数后,计算出经过富集与未经过富集的标准曲线的斜率比为330.标准曲线在2～70μg/L的质量浓度范围内呈线性,检测限为1.4μg/L.重复7次测量50μg/L的铅溶液的相对标准偏差为0.2﹪.对自来水、井水、湖水等样品进行了分析,回收率为104.4﹪～109.6﹪.